溶瘤性腺病毒携带canstatin基因对肺癌A549细胞小鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究溶瘤性腺病毒介导的canstatin基因表达对A549细胞的抑制作用。方法:将构建的溶瘤性腺病毒载体CRAd-canstatin感染A549细胞。Western blot方法鉴定canstatin基因在A549细胞中的表达;结晶紫染色法和MTT法检测重组病毒体外对细胞的生长抑制作用;将腺病毒注射入荷瘤的裸鼠体内,通过测量肿瘤体积,形态学观察等方法验证CRAd-canstatin对肿瘤的抑制效果。结果:体外结果显示腺病毒介导的canstatin基因在A549细胞中有效表达。体内结果显示相比对照组而言,肿瘤体积明显缩小。结论:初步的实验表明溶瘤性腺病毒介导的CRAd-canstatin基因有望用于肺癌细胞的治疗。     

FUS1基因原核表达质粒构建与诱导表达

目的 构建FUS1基因原核表达质粒,在大肠杆菌[Rosetta(DE3)2 plys]中高效表达重组蛋白.方法 采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出FUS1基因,并将其接入pET-32a( ),经PCR、测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2 plys细菌,并用IPTG诱导表达.结果 经过PCR、测序鉴定,克隆了pET32a( )-FUS1重组子;在低浓度IPTG(25μmol/L)诱导3 h,Rosetta DE3可以高效地表达重组蛋白,约占细菌总蛋白的40%.结论 成功地克隆到FUS1基因,并使其在原核系统中高效表达.     

非血缘脐血移植后EB病毒相关淋巴细胞增殖性疾病一例

EB病毒相关淋巴细胞增殖性疾病(EBV—PTLD)为异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)后的一个少见但常致命的并发症。2000年Ohga等报道了首例非血缘脐血移植(UCBT)后EBV—PTLD。我们遇到1例UCBT后同时并发EBV—PTLD和纯红细胞再生障碍(PRCA)，用CD20单抗(商品名美罗华)治疗获得成功，现报告如下并作文献复习。     

抗氧化剂协同脂肪提高战士耐寒力的研究

观察抗氧化剂协同脂肪堤同战士耐寒力的效果。方法：选寒区冬季入伍新兵１５８名，分为Ⅰ组高脂膳组（脂肪生热比３０％）Ⅱ组高脂加ＶＣ（６００ｍｇ．ｄ＾－１）组、Ⅲ组高脂和ＶＥ（３００ｍｇ．ｄ＾－１）组、Ⅳ组普食（脂肪生热比２３％）加Ｚｎ（３００ｍｇ．ｄ＾－１）组、Ⅴ组普食对照组（按连队正常供应，脂肪生热比２３％），食用２５ｄ，。测定实验前、后的血管寒冷反应指数（ＶＲＣＩ）和普冬装于－７－９℃，无风环境坐     

石蜡淋巴瘤组织中IgH FR3区基因重排引物分析

目的 利用生物信息学方法分析免疫球蛋白重链(IgH)框架区(FR3)基因重排引物并探讨其在石蜡包埋非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中应用价值.方法 通过Chustal W 软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取IgH FR3区3对(P1,P2,P3)基因重排引物,其中,P2为改进的引物.另选一对TCRγ脚引物作为T细胞淋巴瘤重排引物,通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的144例石蜡包埋组织标本,包括113例B细胞淋巴瘤、24例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织.以DG75淋巴瘤细胞系DNA作为对照组.结果 引物对P1、P2、P3在B细胞淋巴瘤检出阳性率分别为71.7%(81/113),82.3%(93/113)和76.1%(86/113),三者检出率差异无统计学意义;在T细胞淋巴瘤检出率分别12.5%(3/24)、12.5%(3/24)、16.7%(4/24).将P1和P2引物组合分析,B细胞淋巴瘤阳性检出率可以达到92.3%.以上重排引物在7例反应性淋巴结中均未检出.结论 3对IgH FR3区中,新改进的P2引物在B细胞淋巴瘤中的检出率最高(82.3%).2对IgH FR3区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤的检出率.     

Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析

目的分析Jurkat细胞株TCRγ基因重排特点,观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排的效果。方法 TCRγ基因重排正向、反向引物配对组合,分别扩增Jurkat细胞株DNA,阳性PCR产物测序并比对分析;多重引物组合、降落式PCR扩增Jurkat细胞株TCRγ基因重排,比较多重引物与单对引物扩增效果。结果两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性条带,测序并比对证实为TCRγ基因重排;与胚系基因比对发现,重排后TCRγ基因存在删除和增加的碱基序列;多重引物扩增产物中出现阳性条带的组合,其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCRγ基因重排,重排序列体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式PCR扩增TCRγ基因重排,扩增效果与单对引物一致。     

缺氧诱导因子-1α蛋白在外阴癌组织中的表达及临床意义

目的：检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白在外阴癌组织和外阴上皮内瘤病变组织中的表达,探讨其与临床病理特征和疾病预后的关系.方法：选择手术切除外阴癌组织标本48例,外阴上皮内瘤病变组织14例,正常外阴组织19例.采用免疫组织化学SP法检测上述组织中HIF-1α蛋白的表达情况.结果：HIF-1α在外阴癌中阳性率（58.3％）显著高于正常外阴组织（5.3％）、外阴上皮内瘤变（14.3％）,P＜0.05.单因素分析表明有淋巴转移组的HIF-1 α阳性率（78.6％）显著高于无淋巴转移组（35.3％）,P＜0.05.Ⅰ-Ⅱ期组的HIF-1α阳性率（47.6％）显著低于Ⅲ-Ⅳ期组（77.8％）,P＜0.05.中、低分化外阴癌中HIF-1α阳性率（63.0％）高于高分化癌（28.6％）,P ＜0.05.结论：HIF-1 α表达与外阴癌的淋巴转移、临床分期等显著相关.     

煤尘对大鼠AM分泌细胞因子的影响

煤尘对大鼠ＡＭ分泌细胞因子的影响齐宗利，李秋营近年来，不少人认为细胞因子在尘肺的发生发展过程中起着重要作用［１，２］。但煤尘对肺泡巨噬细胞（ＡｌｖｅｏｌａｒＭａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＡＭ）分泌细胞因子影响的研究，目前报道不多。为探究其机理，我们采用ＡＭ加...     

用ECT诊断法建立兔应力性骨折实验模型

目的:建立应力性骨折实验模型,探讨应力性骨折发生机理.方法:随机将14只兔分为两组,运动组10只,对照组4只.运动组置于特殊的装置内进行跑跳运动.定期对动物进行放射性核素扫描(ECT)检查.运动组于运动第7、14、21、28、35d分别处死1～2只,并对ECT阳性结果部位的骨骼行病理切片观察.结果:损害部位骨组织形态学显示,病理损害的严重程度随训练天数的延长而加重;ECT变化结果与病理切片结果不尽同步;用ECT诊断法建立的应力性骨折模型可观察到早期的骨骼形态学改变.     

下一代测序技术在弥漫大B细胞淋巴瘤基因重排检测中的应用

目的探究下一代测序技术(next generation sequencing, NGS)在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)辅助诊断中的应用价值。方法收集陕西省人民医院病理科存档的20例组织蜡块,其中15例诊断为DLBCL,5例诊断为淋巴组织反应性增生(reactive lymphoid hyperplasia, RLH)。采用天根公司石蜡包埋组织基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取,安捷伦4200评价DNA质量。采用LymphoTrack IGH FR2 Assay和LymphoTrack Dx TCRG Assay进行组织克隆性测定。结果 5例RLH均为多克隆性,11例DLBCL出现NGS IgH FR2单克隆重排(阳性率73.3%,11/15),另有4例未检测出单克隆性重排(2、5、8、15号)。15例中有3例出现TCRG重排性扩增(6、7、14号)。经PCR凝胶电泳法进行验证:4例NGS检测的IgH FR2多克隆性病例均检测到IgH单克隆性基因重排;3例NGS检测到TCRG单克隆性重排病例中,PCR凝胶电泳法只检测到1例呈TCRG克隆性重排。结论高通量测序方法特异性较高,但由于其检测过程复杂,影响因素较多,检测方法的敏感性受到一定影响。虽然该方法可以准确得到基因重排序列,但由于其检测成本较高,对技术平台和人员要求更高,其在临床上的应用尚需时日。