急性髓系白血病血清标志物初步筛选及临床意义

本研究初步分析初诊急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者与正常人群血清蛋白质质谱的差异,筛选AML血清特征性肿瘤标志物及探讨AML患者血清蛋白质组学特征及在白血病发病机制中的意义.选择AML患者14例和健康对照28例,应用弱阳离子交换纳米磁珠捕获血清蛋白质组分及Autoflex II基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测各样品的蛋白质质谱,再利用CliprotoolsTM2.2软件进行数据分析,筛选差异蛋白质分子并建立AML诊断模型.选取验证组7例AML血清和14例健康对照血清对产生的模型用盲法进行验证.结果表明,在分子量700-10 000 Da范围内,可检测到69个左右的蛋白质谱峰.与健康组比较,AML患者组中共检测出有显著意义的蛋白峰差44个(p0.0001),其中10个蛋白峰高表达,34个蛋白峰低表达.将区分疾病组与对照组能力最强的3个质谱峰建成一个基于QC(Quick Classifier Algorithm)算法的诊断模型,质荷比(mass charge ratio,m/z)分别为3216.57,4089.7,7762.87,在该训练集中其判断AML的预期敏感性为86.4%,预期特异性为82.8%.分类验证中该模型能正确识别7例AML病例中的6例和14例健康对照中的12例.交叉验证显示,该模型的敏感性和特异性均为85.7%.结论:初步应用Clinprot系统建立的急性髓系白血病QC模型由3个显著差异蛋白质峰构成,似能有效区分AML患者与正常对照者,其敏感性和特异性较高,有可能作为AML的血清标记物,其中m/z7762.87为血小板源性的趋化因子,其有可能为AML发病机制、分子分型、疗效及预后判断提供重要的实验依据.     

Lasp-1蛋白在肝癌组织中表达及临床意义

目的探讨Lasp-1蛋白在肝癌（HCC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组化染色法检测42例肝癌癌组织、28例癌旁组织以及15例正常肝组织标本中Lasp-1蛋白表达情况,并探讨其与肝癌临床病理特征的关系。结果Lasp-1蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为54.76％,明显高于癌旁（32.14％,P〈O.01）及正常肝组织（6.67％,P〈0.01）,Lasp1表达阳性率在正常肝组织、癌旁、和肝癌中呈递增趋势;Lasp-1在伴发转移的肝癌病例标本中未发生转移者表达阳性率更高（P=o.006）;肝癌组织中Lasp-1的阳性率与患者TNM分期呈正相关（P=0.013）。结论Lasp-1可能在促进HCC的发生和发展过程中发挥了重要的作用,有望成为早期诊断HCC发生以及评估预后的指标。     

SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体的构建和鉴定

目的：通过基因克隆构建表达SP—TAT—Apoptin融合基因的真核表达载体．方法：通过DNA重组技术，以pCD—NA3．1／Apoptin质粒为模板，进行PCR反应；将具有分泌功能的信号肽和能够携带核酸、蛋白和肽自由地通过细胞膜和核膜的蛋白转导域TAT序列连接于Apoptin基因5’端；PCR反应的产物连接于plenti6-V5-D—TOPO真核表达载体．用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组结果；将重组的真核表达载体瞬时转染HUVEC细胞，用免疫荧光标记对转染后的细胞进行处理，观察重组蛋白的表达情况．结果：PCR产物大小符合要求，重组质粒plenti6-V5-D—TOPO／SP-TAT-Ap—optin双酶切鉴定与预期一致，测序结果正确．且经激光共聚焦显微镜观察到重组蛋白的表达，表明重组表达载体已构建成功．结论：成功克隆出SP-TAT-Apoptin融合基因，并成功构建其真核细胞表达载体，为下一步研究SP-TAT-Apoptin融合基因对肿瘤的生长抑制作用的体内外研究奠定了基础．     

siRNA介导的MAPKp42沉默诱导HeLa细胞凋亡

目的应用siRNA沉默HeLa细胞MAPKp42,研究其对细胞存活的影响。方法体外合成靶向MAPKp42的siRNA-1和siRNA-2,并用脂质体转染HeLa细胞,Western印迹法和免疫组织化学法检测p42^MPAK的表达;电镜观察,TUNEL法测定细胞凋亡,Annexin-PI法测定不同凋亡时期细胞的分布。结果siRNA-1和siRNA-2均可使HeLa细胞MAPK p42沉默,使p42^MAPK表达下调,与阴性对照组相比分别降低2、5倍和3．2倍。电镜观察证实,siRNA-1和siRNA-2转染组部分细胞丧失表面微绒毛,细胞内空泡增加,细胞核染色质边集。处理组HeLa细胞早期凋亡率显著增加,其中siRNA-1组晚期凋亡率也明显增加。结论siRNA介导的MAPKp42沉默可以诱导HeLa细胞凋亡。     

一中国先天性长QT综合征家系的基因突变分析

目的：检测并分析一中国先天性长QT综合征（Congenital long QT syndrome,LQTS）家系的基因突变.方法：分析根据家系的临床症状及心电图,初步判断出基因分型,聚合酶链反应法扩增基因的全部外显子并用DNA直接测序法检测基因突变.结果：患者临床表现符合HERG基因突变所致LQT2,DNA测序发现HERG基因1682位点C→T错义突变,致使氨基酸第561位密码子丙氨酸被缬氨酸取代（A561V）,该突变位于HERG基因突变热点区域,为国内首次发现.结论：发现中国人HERG基因新突变,中国LQT2家系中患者具有与欧美及日本患者相同的致病突变.     

高密度脂蛋白代谢相关基因单核苷酸多态性研究

目的探讨中国人群高密度脂蛋白代谢相关基因单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)的分布特征。方法对象选自中国西部5省区健康汉族个体209人,男132名、女77名,平均年龄(59±10)岁。以蛋白酶K消化、苯酚及氯仿抽提以及异丙醇沉淀的方法提取全基因组DNA。应用聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性结合测序的方法检测ATP结合盒转运体(ATP-bindingcassettetransporter,ABCA1)、胆固醇酯转运蛋白(cholesteryleastertransferprotein,CETP)以及脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase,LPL)等高密度脂蛋白代谢相关基因SNP。结果该研究群体等位基因ABCA1-A和G的基因频率分别为53.4%和46.6%;CETP-B1和B2分别为59.0%和41.0%;LPL-H(-)和LPL-H(+)分别为18.9%和81.1%;LPL-P(+)和LPL-P(-)分别为66.0%和34.0%,符合Hardy-Weinberg平衡定律。LPL基因多态位点Hind(+)与Pvu(+)之间存在显著的连锁不平衡。将性别因素作分层分析提示CETPTaq1B基因型频率存在明显的性别差异(χ2=9.94,P=0.0075)。测序表明上述限制性内切酶片段长度多态性均系内切酶识别区域内的单核苷酸碱基替换。中国人种与白人种基因多态性分布频率对照研究发现,CETP-Taq1B等位基因频率接近,而其余3种等位基因频率分布存在显著性差异。结论中国汉族人     

吲哚-3-乙酸对人外周血淋巴细胞微核和SCE频率的影响

背景与目的:研究吲哚-3-乙酸对人体外周血淋巴细胞微核和SCE频率的影响.材料与方法:应用人体外周血淋巴细胞测定吲哚-3-乙酸诱导微核形成率试验和姊妹染色单体互换率(SCE).结果:各吲哚-3-乙酸处理组与阴性对照组相比,微核形成率和SCE差异均存在显著性.结论:吲哚-3-乙酸对人外周血淋巴细胞的遗传物质具有损伤作用.     

急性分离Meynert核团神经元方法及其应用

目的 建立急性分离Meynert核团神经元方法.方法 切取活脑组织切片,经Protease酶解消化、孵育后,机械分离Meynert核团神经元.作形态学观察,通过单细胞膜片钳技术记录电活动.结果 分离出的Meynert核团神经元,倒置相差显微镜下形态保持良好,突起较完整.90%以上细胞可以记录出电活动.结论 本方法可以获取活的Meynert核团单个神经元,用于单细胞膜片钳、激光共聚焦、流式细胞术等研究.     

门静脉高压症脾脏巨噬细胞内游离Ca2＋变化的初步研究

目的 观察门静脉高压症(PH)脾脏巨噬细胞(Mφ)游离Ca2+浓度和分布的变化,为深入探讨门静脉高压症脾脏的变化及评价其免疫功能状况提供实验依据.方法 选取门静脉高压症脾亢患者(均为慢性乙型肝炎患者)的手术切除脾脏(12例)为实验组,外伤性脾破裂患者的手术切除脾脏(4例)为正常对照组.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mφ,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载Mφ,以激光共焦镜显微镜观察Mφ内Ca2+的分布,流式细胞仪检测Mφ内Ca2+的浓度变化.结果 与正常脾脏相比,PH脾脏Mφ内Ca2+的分布无明显变化,但可见细胞表面有较多的Ca2+荧光染色阳性的伪足样突起;PH脾脏Mφ内Ca2+浓度为明显升高(48.75±2.61 vs 39.92±1.76,P＜0.05).结论 PH脾脏Mφ内Ca2+浓度明显升高,进一步说明PH脾脏Mφ处在活化状态,但PH脾脏MφCa2+浓度变化的具体机制,以及这种变化对PH脾脏免疫功能的影响还需要进一步的研究.     

HERG基因G572R突变体表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的构建HERG基因G572R突变体表达载体并建立其稳定转染HEK293 的细胞系。方法应用重叠延伸PCR构建
HERG-G572R突变体表达载体,经G418筛选稳定转染细胞系,通过Real-Time PCR,Western blot及测序鉴定稳定转染细胞系。
结果经序列比对,证明HEK-HERG-G572R突变体表达载体构建成功,Real-Time PCR,Western blot 及测序证明稳定转染细胞
系构建成功。结论该方法可成功构建的HKE-HERG-G572R细胞株,为药物个体化治疗提供工具。