HBsAg阴性/HBV DNA阳性与S基因变异的关系——附8例报告

目的研究无锡地区HBV感染者HBsAg缺失与S基因变异的关系,探讨其形成机理。方法采用ABBOTT测定 HBV M;套式 PCR检测 HBV DNA并作S基因序列分析;荧光定量法测定HBV DNA含量。结果8例HBsAg缺失者S基因出现了变异,导致HBsAg肽63、82、89、90、91、101、115、154位氨基酸替换,且89、90位氨基酸为联合变异;该模式75％(6/8)系慢性肝炎病人,87.5％(7/8)未使用免疫制剂,其HBV DNA含量是低的,而血清抗-HBs中位数值达239.1mU/ml。结论 HBsAg缺失模式多为自然发生的变异,变异主要发生在 a决定簇以外部分,可改变HBsAg的抗原性,使其不能被现行的试剂所检出,此外HBsAg阴性也与血液中HBV DNA含量低有关。     

乙型肝炎病毒表面抗原118位氨基酸变异研究

目的研究献血者乙型肝炎病毒表面抗原118位氮基酸变异对ELISA检测的影响。方法PCR扩增献血者表面抗原基因,恢复变异点氨基酸为野生型,构建不同的表达载体,在293T细胞株中表达,检测各自在不同试剂中的反应格局。结果117位点对检测反应格局不产生明显影响,118位点的变异明显影响检测格局,恢复变异点氨基酸明显提高了检出率和灵敏度。结论118位氮基酸变异影响了乙肝表面抗原的筛查,改变了其的免疫反应原性。     

RNAi对HepG2．2．15细胞HBx基因表达和细胞迁徙的影响

目的探讨HBx基因在肝细胞癌侵袭转移中的作用。方法利用psiRNA-hHlneo质粒，构建针对HBx基因的shRNA表达载体psiRNA1、psiRNA2、psiRNA3，并转染HepG2．2．15细胞，用逆转录聚合酶链反应检测shRNA对HBx基因mRNA表达，用免疫印迹法（western Blot）检测shRNA对HBx蛋白的表达。应用改良Boyden小室法测定细胞迁移情况。结果成功构建shRNA表达载体，其中shRNA载体psiRNA1对HBx基因的抑制作用最强，对HBxmRNA抑制率达82．46％，对HBx蛋白的抑制率为65．59％；与空载体转染细胞比较，HepG2．2．15细胞在psiRNA1转染后24h、72h迁移率显著下降。结论HBx基因可能促进HCC的侵袭转移。     

重组α－2b干扰素治疗输血后丙型肝炎近期疗效观察

观察重组α－２ｂ干扰素治疗３０例输血后丙型肝炎的生化学和病毒学指标，疗程结束后３个月时ＡＬＴ正常率为７２％，ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转率为５３．３％。疗效相关因素分析显示，患者的性别、年龄、输血量和临床病程等均非预测疗效的有意义指标，而治疗前血清ＨＣＶ－ＲＮＡ滴度和输血至临床发病时间均对疗效有显著影响。经ＨＣＶ基因亚型分析，本组３０例均为ＨＣＶ～Ⅱ型感染，提示在同一ＨＣＶ亚型感染中对干扰素疗法的反应亦不均一。同时发现干扰素治疗后可出现生化学疗效和病毒学疗效分离，以第二代抗一ＨＣＶ试剂盒检测抗，ＨＣＶ评价干扰素疗效，价值较小。     

肝病患者的肝组织单细胞悬液与外周血中淋巴细胞亚群的分析比较

目的探讨肝脏组织单细胞悬液的制备方法,了解慢性肝病患者的肝组织和外周血的淋巴细胞亚群差异。方法分别选择慢性乙型肝炎(CHB)14例、自身免疫性肝炎(AIH)4例和原发性肝细胞癌(HCC)3例,在超声引导下经皮作肝脏穿刺活检,用单细胞制备仪或物理研磨方法将肝组织制备成单细胞悬液,肝组织中淋巴细胞经4种特异性荧光抗体标记,在流式细胞仪(FCM)上作四色荧光分析,并与外周血测定结果比较。结果单细胞制备仪和物理研磨方法制备的肝组织单细胞悬液,细胞成活率分别为92.4%和91.5%;检测肝组织单细胞悬液中淋巴细胞亚群,正常对照组和慢性肝病各组间差异均有显著性(P<0.05),AIH组和CHB组间差异有显著性(P<0.05)。而外周血中淋巴细胞亚群检测,HCC组和CHB组间差异有显著性(P<0.05)。肝组织和外周血相应项目比较差异均有显著性(P<0.05)。结论用2种方法制备单细胞悬液能满足FCM检测的特殊需要;肝脏组织中淋巴细胞与外周血的淋巴细胞亚群比例差异有显著性。     

江苏地区丙型肝炎病毒基因分型研究

我们对江苏地区76例慢性丙型肝炎患进行了丙型肝炎病毒(HCV)基因分型,以了解江苏地区HCV基因型／亚型的分布状况及其在传播途径、疾病临床轻重程度之间的差异性。     

干扰素疗法与HBV前C区点突变关系的初步研究

用错配引物聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析对１５例血清ＨＢｅＡｇ阳性性，ＨＢＶ－ＤＮＡ斑杂交阳性的慢性乙型肝炎患者进行了干扰素疗法与ＨＢＶ前Ｃ区基因１８９６位点突变之间系的观察。结果显示，治疗后ＨＢＶ野株和突变株的变化有四种类型，即Ｗ→Ｗ；Ｗ＋Ｍ→Ｗ＋Ｗ（３例）；Ｗ→Ｗ＋Ｍ（３例）；Ｗ＋Ｍ→Ｗ（１例）。     

白细胞介素-12和白细胞介素-18质粒对HBcAgDNA疫苗诱导小鼠(H-2d)体液免疫应答的影响

目的：观察编码白细胞介素（IL）－12和IL－18的真核表达载体[pcDNA3.1/IL-12(以下简称IL－12质粒）和pcDNA3.1/IL-18(以下简称IL－18质粒）]对HBcAg DNA疫苗（pJW4303/HBc)诱导BalB/c(H-2^d)小鼠免疫应答的影响。方法：肌肉注射接种IL－12质粒、IL－18质粒和HBcAg DNA疫苗，ELISA法检测小鼠血清抗HBc IgG亚类（IgGl,IgG2a)水平。结果：免疫6周后，联合注射IL－12、IL－18和IL－12＋IL－18组小鼠血清的抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0．05），抗HBc IgG亚类以IgG2a占优。结论：IL－12、IL－18以及IL－12＋IL－18联合HBcAg DNA疫苗注射能够提高小鼠血清中抗HBc水平。     

HBV感染者血清HBsAg、抗-HBs共存与S基因变异

目的 :探讨无锡地区HBV感染者HBsAg与抗 -HBs的共存模式与S基因变异、病毒复制及免疫治疗的关系。方法 :采用Abbott及ELISA测定HBVM ;套式PCR检测HBVDNA并作序列分析 ;荧光定量法检测HBVDNA含量。结果 :30例adr亚型 ,1例adw亚型 ;2 1份血清出现S区多部位变异 ,造成HBsAg肽 36、47、6 3、77、89、90、115、12 6、12 9、139、15 4位氨基酸替换 ;该变异不影响病毒复制 ;变异组免疫药物的使用率 6 6 .6 % ;抗 -HBs阳性血清加入HBsAg阳性血清后 ,再测抗 -HBs阴转。结论 :S基因变异导致HBsAg抗原性的改变和与抗 -HBs结合力的降低 ,以及检测灵敏度的提高、亚型的转变都是造成HBsAg与抗 -HBs共存的原因 ;免疫治疗等造成的免疫压力是产生免疫逃逸变异的原因之一     

多药耐药基因在人原发性肝细胞癌中的表达

建立一种敏感性高、特异性强的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量检测了30例原发性肝细胞癌(PHC)患者癌组织及癌周组织中多药耐药基因(mdrl)表达水平,其中5例患者术前经肝动脉插管化疗。结果显示:PHC癌组织中mdrl基因表达较癌周组织高;术前行化疗者癌组织中mdrl基因过度表达,同时其癌周组织中mdrl的表达较未化疗的癌周组织高。我们认为mdrl基因的过度表达在PHC内在性或获得性药物耐受的产生中起着一定的作用。