人食管上皮细胞原代培养方法的研究

目的探讨适用于组织工程食管研究的食管上皮细胞培养方法.方法对比食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM及含血清培养基DMEM中的生长情况.结果食管上皮细胞在无血清培养基K-SFM中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染.结论应用无血清培养基K-SFM培养食管上皮细胞,方法简便,适合推广应用.     

细胞性心肌成形术研究进展

许多基本的心血管疾病发展到晚期会演变为充血性心力衰竭 ,尽管治疗手段已有了明显进步 ,但充血性心力衰竭仍然是一个主要并且将继续为人类关注的健康问题。充血性心力衰竭可使具有完整舒缩功能的心肌细胞数量减少 ,心肌结构完整性遭到破坏。心脏移植治疗终末期心力衰竭是金标准 ,但供体的不足限制了其临床广泛应用 ,就需要其它新方法来替代以挽救丧失的心肌细胞。细胞性心肌成形术被证明是一种行之有效的替代治疗方法。细胞性心肌成形术就是将包括自体心肌细胞在内的不同类型的细胞移植到宿主心肌组织中加固其结构和改善其功能。最近研究发现胚胎干细胞和成体干细胞均可以向心肌细胞方向分化。自体骨骼肌成肌细胞、内皮祖细胞等其它类型细胞同样成功地在宿主受损心肌组织中存活并增殖分化 ,改善宿主心脏功能。这里对目前细胞性心肌成形术的移植细胞类型作一综述。     

血管内皮生长因子在大鼠实验性关节炎模型中表达的动态观察

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠实验性关节炎模型中的表达，探讨VEGF在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用。方法：30只雄性Wistar大鼠采用皮下注射Ⅱ型胶原的方法诱导实验性关节炎模型，并随机分为6组，每组5只。致敏1、2、3、4、5、6周后分别将各组动物处死，采用免疫组织化学方法对组织中表达的VEGF进行观察，并采用计算机图像分析的方法对各时期VEGF的表达量进行定量分析。结果：大鼠在接受胶原致敏后2周左右发病，滑膜组织中的VEGF蛋白的分泌与炎症发展密切相关。结论：VEGF参与了实验性关节炎滑膜血管翳的形成过程，在RA的发病机制中具有重要意义。     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的实验研究

目的:研究肝细胞生长因子（HGF）抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用。方法: 采用磷酸钙/DNA-TPC方法构建携带HGF基因的重组腺病毒(Ad.HGF)。经18只小型猪的左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血猪动物模型,并随机分为3组即盐水组、AdHGF组和缺陷型空病毒Ad5(AdNull)组,每组6只(n=6)。于缺血心肌处,分别注射4×109 pfu 200 μl AdHGF、4×109 pfu 200 μl AdNull及200 μl盐水。4周后做超声心动图检查各组的心脏功能,并行病理学心肌纤维化、心肌凋亡检测。结果: 心脏彩超检测显示,AdHGF组室壁增厚,运动增加,左室舒张末容积（LVEDV）、左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（FS）等明显改善(P<0.05)。AdHGF组心肌组织切片缺血坏死区纤维组织增生明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌中Ⅲ型胶原蛋白的量明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌细胞的凋亡率(%)明显低于对照组(P<0.05)。结论: HGF具有抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用,从而可抑制心室重构和改善心功能。     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血心肌细胞纤维化及凋亡的实验研究

我们采用携带肝细胞生长因子(HGF)基因重组腺病毒(AdHGF)干预猪慢性缺血性心肌模型,研究HGF改善缺血性心脏病心脏功能的重要机制,探讨其抑制缺血心肌细胞纤维化及凋亡的作用. 一、材料与方法 1.材料:相同遗传背景的实验用贵州小型香猪18只,体质量(30±5)kg,雌雄不拘(第二军医大学动物实验中心提供).术前禁食、禁水24h以上.     

体外促进血管内皮细胞分化的实验观察:人血管生成素相关蛋白2全长编码基因的克隆

目的:克隆人血管生成素相关蛋白2(angiopoietin-relatedprotein2,ARP2)全长编码基因,使其以体外方式促进血管内皮细胞分化,拟构建PET32a载体。方法:采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)从人脾脏组织中扩增ARP2cDNA,构建PET32a载体,采用EcoRI,HindIII双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果:RT-PCR扩增长度为1492bp的基因片段。EcoRI,HindIII双酶切结果显示重组T载体中含有目的基因片段,测序结果显示编码区无基因突变。结论:顺利构建PET32a载体,人ARP2全长cDNA基因克隆成功。ARP2有非常明显的促进血管内皮细胞生长的作用,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大帮助。     

基因重组人血管生长素衍生物Asp116His对缺血心肌再血管化的影响

在建立家兔心肌梗死模型的基础上,以基因重组人血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ于血心肌边缘部作心肌多点注射。术后８－１０天取注射点心肌切片作ＨＥ染色、ＶＢ染色及Ⅷ因子标记的免疫组化染色观察,术后１８－２０天,做非选择性冠脉造影。病理学检查,可见心肌间质内大量小血管结构,毛细血管明显增多,冠脉造影,示有侧支血管形成。本研究首次证实血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ在心肌作用局部可引起明显新生血管形成     

NF-κB在早期心肌缺血-再灌流损伤中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)在心肌早期缺血-再灌流损伤中的作用.方法将18只山羊随机分为单纯体外循环(CPB)组、缺血-再灌流(IR)组、缺血-再灌流加特异性NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组.建立山羊CPB模型,心脏行缺血60 min,恢复血流-再灌流90 min,PDTC组在心肌缺血前应用PDTC(100 mg/kg).于心肌再灌流后,测量血流动力学数据及测定局部心功能,并应用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡数量,同时采用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测心肌组织中NF-κB的含量.结果缺血-再灌流能引起典型心肌缺血损伤的组织学改变,IR组NF-κB在缺血心肌组织中大量激活,心肌组织中NF-κB的活性水平显著高于CPB组(P＞0.05);而PDTC组再灌流60、90 min后,NF-κB的核转录活性明显减弱,显著低于IR组(P＜0.05);原位末端标记表明,IR和PDTC组中心肌细胞凋亡指数分别为(11.2±0.4)%和(6.4±0.2)%,心肌损伤显著减轻(P＜0.05).结论核转录因子-κB在心肌早期缺血-再灌流损伤中起重要作用,PDTC通过抑制NF-κB的核转录活性,从而减轻了心肌缺血-再灌流损伤.     

人脐静脉血管内皮细胞构建组织工程心脏瓣膜及其生理功能

目的 探讨人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)及其生理功能.方法 以脱细胞猪主动脉瓣作支架;将扩增的HUVECs种植在瓣膜上,体外静态构建TEHV,观察内皮细胞的形态和生长状况.收集瓣膜培养液,检测瓣膜内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、前列环素(PGI2)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)的功能.结果 猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全去除,脱细胞瓣叶的生物力学特性同新鲜瓣叶相比无明显变化以HUVECs做种子细胞,成功构建TEHV;瓣膜表面的内皮细胞生长状态良好,长成连续的细胞层.细胞能够分泌t-PA、PAI-1、PGI2、NO、ET-1等.结论 以脱细胞猪主动脉瓣膜为支架,种植HUVECs成功构建TEHV,其表面HUVECs具有正常内皮细胞的生理功能.     

层层静电自组装多聚电解质共混膜与组织工程心脏瓣膜细胞的黏附

背景:组织工程心脏瓣膜研究中的核心和难点是种子细胞在支架材料上的黏附.层层静电自组装技术能够将多聚阴阳离子组装成多层膜状结构增加材料表面的生物相容性.目的:拟对猪去细胞瓣膜在体外进行层层静电自组装成多聚电解质共混膜,并且检测共混膜列种子细胞黏附的效果.设计时间及地点:细胞学体外观察性实验,于2008-09/2009 02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室和复旦大学高分子科学系实验室完成.材料:新鲜猪心脏瓣膜取自上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理.密度梯度离心法从骨髓中获取骨髓单个核细胞,体外扩增培养后鉴定.方法:通过层层静电自组装技术构建20,10,5,0层的壳聚糖,透明质酸共混膜履盖在猪去细胞瓣膜支架上.将骨髓基质干细胞在涂膜支架上种植培养并检测支架对种子细胞的黏附效果.主要观察指标:扫描电镜观察、细胞计数、MTT检测组织工程心脏瓣膜上种子细胞的形态和细胞黏附效果.结果:扫描电镜观察20层壳聚糖,透明质酸多层膜样品上细胞生长情况比较好,样品上可以铺满细胞.而在组装层数为5层和10层的样品上,细胞生长的比较少.构建层数为20层的瓣叶,其细胞计数及吸光值高于10层和5层构建的瓣叶(P<0.01).构建层数为10层和5层的瓣叶与0层比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:通过层层静电自组装技术构建的共混膜能够促进种子细胞的黏附,而且有一定的量效关系.