抗核抗体定量与体液免疫指标及肝功能异常关系分析

目的探讨抗核抗体(ANA)水平与体液免疫指标的关系及其与肝功能异常检出率的临床意义。方法将2011年1月至2012年1月在该院住院接受ANA检查的患者160例,根据ANA测定结果分为阴性组(n=75)和阳性组(n=85),阳性组患者再根据ANA不同水平分为3个亚组,对其进行体液免疫和肝功能检测。分别比较各组免疫球蛋白和补体水平以及肝功能异常的情况。结果 ANA阳性组免疫球蛋白IgG和IgA水平明显高于ANA阴性组,而补体C3、C4水平低于ANA阴性组,差异有统计学意义(P<0.01);ANA阳性组免疫球蛋白IgM水平与ANA阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05);ANA阳性各亚组间免疫球蛋白和补体水平比较,随着ANA水平的增加,其血清免疫球蛋白水平逐渐升高,而补体水平明显下降,3组间进行方差分析,差异有统计学意义(P<0.05)。ANA阳性患者中检出肝功能异常者47例,占55.23%(47/85),其中,肝酶异常22例,占46.81%(22/47),总蛋白降低有26例,A/G倒置有22例,总蛋白、清蛋白/球蛋白比值(A/G)异常共38例,占78.72%(38/47)。结论 ANA水平与体液免疫变化有密切关系,ANA阳性患者肝功能损害与患者血清中存在多种自身抗体有密切关系,ANA高水平的患者,肝功能异常检出率较高,临床医生应予以重视。     

分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

目的 构建分泌型PD-L1真核表达载体，并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1（programmed death-1，PD-1）配体PD-L1的胞外段基因片段，定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质体将重组子导入NTT细胞，转染后的NTT命名为NITp。以Western blot鉴定重组蛋白的表达。MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响；用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响。结果 RT-PCR得到约730bp目的基因片段，测序结果显示该目的基因与Gen-Bank上的序列相符；Western blot分析提示NTTp分泌性表达目的蛋白；NTTp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖，其效应呈剂量依赖性；反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示，培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低，与正常对照组差异有统计学意义。结论 成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1，PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用，并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化。     

2型糖尿病患者糖化血红蛋白和C肽水平与肝功能异常关系分析

目的 探讨2型糖尿病患者血糖控制与肝功能异常的相关性.方法 选择该院内分泌科门诊和住院已经确诊的2型糖尿病患者156例,检测其糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、空腹C肽(FCP)、餐后2 h C肽(2 hCP)和肝功能,并对检测结果进行比较及统计学处理,对伴肝功能损害情况进行分析.结果 2型糖尿病患者肝损害发生率37.82%;B组(HbA1c>9%)患者的血糖水平、肝功能异常率显著高于A组(HbA1c≤9%),P<0.01;而B组(HbA1c>9%)C肽水平均明显低于A组(HbA1c≤9%).结论 HbA1c可反映糖尿病控制好坏与否,较好地控制血糖是改善2型糖尿病患者肝损害的主要措施.     

大型综合医院检验医学专业实习生的带教体会

探讨大型综合医院检验医学专业实习生的带教方法,实习生通过一年临床检验科学习,可获得检验“标准化”、“临床化”及初步的医学研究技能,成为既精通标准操作又具有良好临床服务意识的合格检验人才。     

基因芯片技术检测142例尖锐湿疣HPV基因型的临床分析

目的：评价核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（HybriMax）检测尖锐湿疣（CA）组织中人乳头瘤病毒（HPV）基因型的临床应用。方法：采用HybriMax技术,对142例尖锐湿疣患者皮损组织进行HPV感染分型检测。结果：在受检的CA患者中21种HPV亚型共检出18种,未发现HPV18、35和56型。142份CA组织标本中HPV阳性137例,总检出率是96,48％,单一基因型别阳性率是58．45％（83／142）,多重基因型别阳性率是38．03％（54／142）;各基因型别检出率由高到低依次是HPV6（64．08％）、11（34．51％）、52（7．75％）、33（7．04％）、58（7．04％）、16（5．63％）、59（4．23％）、31（3．52％）和68（3．52％）。高危型HPV检出率为42．96％（61／142）,高危型HPV多以混合感染形式存在,其多重感染率达到86．89％（53／61）,其主要基因型中女性高危HPV型感染率55．56％（20／36）明显高于男性的31．13％（33／106）。结论：尖锐湿疣主要基因型感染是低危型HPV6,高危型HPV感染率高并多以混合感染形式存在。HybriMax技术检测尖锐湿疣患者HPV基因型准确性高,并可快速分型,是临床HPV感染分型检测有效方法。     

溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响

目的：探讨溶血对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素的影响。方法收集30例未发生溶血的血清标本,利用低渗溶血法分别制备轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本各10例;采用时间分辨免疫荧光分析法分别测定各组标本溶血前（0 h）和溶血后0．5、2、18 h的胰岛素浓度;通过配对t检验、重复测量数据的方差分析对溶血程度和时间对胰岛素浓度检测结果的影响进行分析。结果轻度溶血、中度溶血、重度溶血标本之间胰岛素浓度检测结果比较差异无统计学意义（P＞0．05）;随着溶血时间的延长,胰岛素浓度呈明显下降趋势,0．5、2、18 h检测结果与0 h检测结果相比,比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论溶血程度对时间分辨免疫荧光分析法测定胰岛素浓度的影响不明显,但溶血时间则对测定结果具有较为明显的影响;标本溶血和溶血时间均为影响胰岛素浓度检测结果的重要因素。     

老年2型糖尿病患者胰岛自身免疫抗体与超敏-CRP和肾功能指标变化的临床分析

目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)患者血清谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)、胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)与超敏C反应蛋白(hs-CRP)和肾功能指标变化的临床价值。方法选择2012年1月至2012年12月在该院内分泌科住院确诊的T2DM患者122例,根据抗体检测结果将患者分为胰岛自身免疫抗体阳性组(n=21)和胰岛自身免疫抗体阴性组(n=101),检测其空腹C肽(FCP)、餐后2hC肽(2hCP)、糖化血红蛋白(HbA1c)、hs-CRP和肾功能指标[尿素(UREA)、肌酐(Cr)、尿微量清蛋白(尿mALB),尿β2-微球蛋白(尿β2-MG)],并对检测结果进行分析比较。结果 122例老年T2DM患者检出至少有1种胰岛自身免疫抗体阳性者共21例,阳性率为17.21%。其中检出单项抗体GAD-Ab阳性14例(11.47%)、ICA阳性10例(8.19%)、IAA阳性1例(0.82%),检出2种抗体阳性患者4例(3.27%),未检出3种抗体均为阳性的患者。胰岛自身免疫抗体阳性组其hs-CRP、UREA、Cr水平高于胰岛自身免疫抗体阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。而FCP、2hCP、HbA1c、尿mALB、尿β2-MG水平与胰岛自身免疫抗体阴性组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论老年T2DM患者的慢性炎症反应和胰岛自身抗体的出现与胰岛细胞功能的损伤密切相关;了解患者胰岛自身免疫抗体、炎症和肾功能指标的变化情况,对老年T2DM患者及其并发症的监测和疗效观察有较高的价值。     

结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光表达载体的构建及表达

背景:Hsp65和Esat6之间的Linker编码一段疏水性多肽,其具有良好的柔顺性和折叠性,有利于翻译成融合蛋白时融合蛋白之间的空间折叠,使融合蛋白保持与两个天然蛋白空间构象的一致性,从而形成正确的构型而提高它们的免疫原性。目的:从结核分枝杆菌(MTB)H37Rv株中克隆目的融合基因Hsp65-Esat6,与报告基因EGFP一起构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。设计:单一样本实验。单位:暨南大学医学院微生物免疫学教研室。材料:质粒pVAE由华南理工大学曹以诚教授惠赠,MTBH37Rv株、大肠杆菌DH5α、表达质粒pEGFP-C1为本实验室保存,Hela细胞由本教研室胡萍博士惠赠。方法:实验于2005-09/2006-06在暨南大学医学院微生物与免疫教研室和中心实验室完成。以MTB全基因组为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65基因(不含终止子),与pEGFP-C1载体进行重组,构建pEGHsp65(不含终止子)重组质粒。再以pVAE质粒为模板,经PCR扩增出Linker-Esat6基因,与pEGHsp65质粒(不含终止子)进行重组,构建真核表达载体pEGHsp65-Esat6。通过限制性内切酶图谱测定pEGHsp65-Esat6融合质粒大小;对质粒pEGFP-C1的多克隆位点内的DNA序列进行序列分析鉴定;将质粒转染Hela细胞,观察荧光的表达情况及转染效率,通过免疫组织化学法分别检测细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的表达。主要观察指标:①pEGHsp65-Esat6融合质粒大小。②pEGFP-C1DNA序列分析。③转染后Hela细胞的荧光表达情况。④细胞中Hsp65蛋白和ESAT-6蛋白的免疫组织化学结果。结果:①质粒pEGFP-C1的大小约为4.7kb,而pEGHsp65为6.4kb,融合质粒pEGHsp65-Esat6约为6.7kb,在琼脂糖凝胶电泳图上可以分辨出泳动速度的差异。②结果与结核分支杆菌H37Rv株的Hsp65和Esat6的基因序列完全相同。③转染融合质粒24h后,使用共聚焦显微镜可观察到有部分细胞表达荧光蛋白,说明融合质粒转染成功,转染率约为30%。未转染的Hela细胞则无荧光表达。④通过免疫组织化学法证实融合质粒在Hela细胞内能正确表达出具有生物学活性的Hsp65与ESAT-6蛋白。结论:采用Hsp65和Esat6搭配作为免疫原,成功克隆并构建了结核分枝杆菌融合基因Hsp65-Esat6荧光真核表达质粒。     

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的：进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建，并在人源肝细胞QSC7701中进行表达与鉴定。方法：从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM／HCV1—3011质粒中扩增出HCV核心（core）基因片段，构建peDNA3．1（-）／core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701，用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达，再通过Western blot印迹法进行鉴定。结果：所克隆的core片段大小正确，序列正确；成功的构建了pcDNA3．1（-）／core重组表达质粒，瞬时转染QSG7701细胞，用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达，Western blot印迹法显示其分子量约为21000。结论：丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3．1（-）／core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白，从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统，同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。     

血红蛋白琼脂糖凝胶片电泳用于地中海贫血筛查的价值

目的 探讨血红蛋白琼脂糖凝胶片电泳用于地中海贫血筛查的价值.方法 选取124例疑似地贫（小细胞低色素或红细胞脆性〈63%）的标本,进行血红蛋白琼脂糖凝胶片电泳,对α地中海贫血表型阳性[HbA2〈2.5%或出现异常血红蛋白快带（HbH、HbBart＇s）]或者β地中海贫血表型阳性（HbA2〉3.5%或HbF〉3.2%）的标本,进行地中海贫血基因检测.结果 124例中α地中海贫血表型阳性60例,占48.4%,基因检测确诊51例,符合率85%,Χ2检验二者无显著性差异（P〉0.05）;β地中海贫血表型阳性36例,占29.0%,基因检测确诊30例,符合率83.3%,Χ2检验二者无显著性差异（P〉0.05）.结论 血红蛋白琼脂糖凝胶片电泳用于地中海贫血筛查有较高的敏感性和特异性.