Survivin-2B诱导人乳腺癌细胞凋亡的初步研究*

 目的：探讨存活蛋白2B (survivin-2B)在诱导肿瘤细胞凋亡中的分子机制。方法：将survivin-2B基因插入真核表达载体pCDNA3.1,得到重组载体pCDNA3.1-survivin-2B。将空载体pCDNA3.1及重组载体pCDNA3.1-survivin-2B分别转染人乳腺癌细胞株MCF7,转染后48 h,用annexin V/7-AAD染色法分析细胞凋亡情况,利用碘化丙啶染色法分析转染对细胞周期的影响;同时提取总RNA并反转录成cDNA,进行多重聚合酶链反应。利用GeXP多基因表达分析系统检测21个与肿瘤相关基因的表达情况。结果：过表达survivin-2B基因导致MCF7细胞凋亡与细胞周期阻滞,并引起8个基因表达上调,2个基因表达下调。变化最大的为醛脱氢酶4家族成员A1（ALDH4A1）,表达下降48%;变化最小的为胞质分裂调控蛋白1（PRC1）,上调1.08倍。结论：Survivin-2B能够诱导细胞凋亡与细胞周期G2/M期阻滞,并引起部分肿瘤相关基因的表达变化。     

乡镇卫生防疫队伍现状及解决对策

乡镇卫生防疫队伍现状及解决对策湖北省通城县卫生防疫站黄树林，杨柳，能新征乡镇卫生防疫队伍是农村实施初级卫生保健的主要力量，在农村三级医疗预防保健网中起着重要作用。如何组织、利用和发展乡镇卫生防疫队伍是实施农村初级卫生保健成败的关健。为了摸清我县卫生防...     

应用毕赤酵母分泌表达筛选人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc

目的：利用毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体分泌表达文库获得具特异性狂犬病毒抗原结合活性的分泌型小分子抗体（scFv-Fc）。方法： RT-PCR方法扩增获得一组轻链和重链可变区基因。利用重叠延伸PCR方法组装scFv基因后克隆入毕赤酵母scFv-Fc抗体库通用表达质粒pPICZα/Fc后，电转化X33酵母菌，甲醇诱导表达后进行ELISA筛选、基因序列分析及免疫印迹分析。结果：构建了抗狂犬病毒毕赤酵母分泌型scFv-Fc库，获得了12株阳性菌株。对其中2株阳性克隆进行了序列分析证实为新的抗体可变区基因。ELISA、Western blotting分析，证实该scFv-Fc具有特异性狂犬病毒抗原结合活性，相对分子质量为56 000。结论：通过毕赤酵母人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc分泌表达文库筛选获得具较高亲和力的新scFv-Fc抗体。     

T细胞受体信号转导通路的动力学分析

目的:建立T细胞受体信号转导途径的动力学模型,通过模型仿真揭示T细胞受体信号途径各分子间的动态调控过程,简要分析模型的动力学特性。方法:根据数据库KEGG及相关中英文文献,提取T细胞受体信号转导各条通路相关分子作用的方式及数量关系,利用Matlab7.0的Simulink工具箱构建信号途径的动力学模型并仿真。结果:模型仿真结果与文献符合得较好,能够从数量上反映T细胞受体信号转导途径中各分子间复杂的调控关系,并能通过模型仿真发现和验证该信号途径中的关键节点分子。结论:模型基本反映了T细胞受体信号转导途径的动力学特征,可以作为后续的精确定量关系研究的基础。     

McAb共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性

目的研究McAb共刺激PBLs前后的表型变化及与肝癌细胞凋亡的相关性。方法采用流式细胞仪分析PBLs被刺激前后的表型,用电镜超微结构和DNA梯子电泳观察肝癌细胞凋亡。结果CD3、CD4分子表达高于刺激前约10%,肝癌细胞出现凋亡,细胞核固缩、边聚、裂解。同时也出现典型的DNA梯子。而肝癌患者用共刺激PBLs后,CD3和CD8增高(P<0.05)。结论共刺激使共刺激信号分子增加,抗原呈递能力增强,也使细胞因子分泌增加,这些因素促使肝癌细胞凋亡,而肿瘤患者T细胞增加时向CD8     

腰椎间盘突出症手法施治原则

自 1995年 1月～ 1997年 12月 ,采用推拿正骨配合超短波治疗腰椎间突出症患者 183例取得了满意疗效 ,现报告如下。1　临床资料183例中 ,男 10 1例 ,女 82例 ,年龄 2 3～ 6 5岁 ,平均 39 5年 ;病程 15天～ 8年 ,平均 3 5年。本组 183例根据临床发病特点 ,在研究了椎间盘突出部位与神经根硬膜囊位置 ,以及伴随的典型症状 ,分为五型。 (1)外侧后型 90例 :腰椎间盘突出部位近于椎间孔或侧隐窝的位置 ,典型症状是腰痛伴下肢窜痛。 (2 )侧后型 34例 :腰椎间盘突出靠近后纵韧带 ,典型症状一般先出现下肢窜痛 ,腰痛不明显 ,腰椎侧弯也不多见。 (3)中…     

肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究

目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。     

Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立

目的：建立和优化基于钙黄绿素-AM（ Calcein-AM）荧光扫描的细胞毒测定方法。方法：首先使用Calcein-AM染色靶细胞,扫描检测Calcein-AM荧光值,确定Calcein-AM最佳激发波长和发射波长;然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间;最后以效靶比为30∶1～1∶1,共孵育时间为4 h,荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果：荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞,最佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm;Calcein-AM对细胞毒性低,不影响细胞活性;4 h内的自发释放率低于15％;CIK（ Cytokine induced killer ）效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论：建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法,该方法可避免放射性试剂的应用,对细胞毒性低,准确性高。