儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

OP9-DL1细胞共培养系统在T细胞体外定向诱导分化中的应用

T细胞是一类在机体免疫应答中起核心作用的免疫活性细胞。T细胞的分化发育指来自骨髓的淋巴样祖细胞(lymph-oid pregnitors)进入胸腺增殖、分化,并从胸腺皮质迁移至髓质,成为成熟T细胞的过程。长期以来,T细胞发育的体内外研究一直依赖于胸腺。但人或鼠的胸腺组织来源有限且取材困难,加大了T细胞发育的研究难度。近年来,随着T细胞发育过程中一些关键分子的发现及其研究的不断深入,一种可高效诱导造血干/祖细胞在体外向T细胞分化的简单模型骨髓基质细胞OP9-DL1体外培养系统得以建立,这种系统的出现大大简化了T细胞分化发育的研究,本文将就其在T细胞体外定向诱导分化中的应用作一综述。     

活化PBL作用肝癌细胞的表型分析与TCR Vβ基因亚家族的优势取用

目的采用抗ＣＤ２８，ＣＤ８０，ＣＤ２及ＣＤ５８分别刺激健康人ＰＢＬ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬ的表型变化及ＴＣＲＶβ基因亚家族的表达水平进行探讨．方法用ＦＡＣＳ分析作用肝癌细胞前后ＰＢＬ表型变化，并用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析其ＴＣＲＶβ１２０的表达水平及特征．结果健康人ＰＢＬ作用肝癌细胞后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化．健康人ＰＢＬ分别加ＩＬ２，ＰＨＡ，抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８，ＣＤ２８＋ＣＤ８０，ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高．结论在癌抗原的参与下，ｍＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ呈递的相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用     

肿瘤患者偏移的T细胞TCRBV表达谱在自体CIK细胞中的恢复

目的 研究肿瘤患者自体PBMC经体外诱导培养的CIK细胞群TCRBV亚家族表达的变化.方法 Ficoll密度梯度离心法分类人体外周血单核细胞(PBMC),经IFN-γ、OKT-3以及IL-2诱导培养,Trizol试剂提取总RNA,RT-PCR半定量分析24个TCRBV亚家族表达情况,流式分选平台分选CD3+ CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群.结果 诱导培养后的CIK中,分化的CD3+ CD56+细胞亚群比例占12.6％～41.7％.PBMC中弱表达或缺失的TCRBV亚家族,在CIK中上调或恢复表达.CIK细胞群中,CD3+CD8+细胞和CD3+ CD56+细胞亚群克隆组成无明显差异.结论 肿瘤患者自体PBMC体外诱导培养CIK细胞后,部分表达偏移的TCRBV亚家族能恢复表达,表明部分受损或被抑制的T细胞克隆在CIK培养中被激活并增殖.     

5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析

 目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析。方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection, MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响。结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+ T细胞和CD4+ T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+ T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响。结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性。     

补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制

目的:探讨补血方协同转染TCRVβ7.1 PBMC对肿瘤化疗造成骨髓抑制的缓解机制.方法:采用体外细胞实验建立化疗损伤模型,利用MTT法测定肿瘤细胞的死亡率,利用ELISA法检测造血相关细胞因子的分泌情况.结果:与对照组相比补血方与转染TCRVβ7.1 PBMC组能够明显促进粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的分泌,并且加PBMC组与单纯化疗药组相比能够明显抑制肿瘤的生长.结论:补血方协同转TCRVβ7.1 PBMC不仅能够对肿瘤细胞起到杀伤作用,且对化疗药所引起的骨髓抑制有一定的缓解作用.     

重组SARS-CoV S1蛋白抗原表位分析及抗原性检测

目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spike,S)S1段进行原核重组表达,并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析,根据分析结果选定用于重组表达的区段,利用pET21b载体进行原核表达,将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明,S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位,综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素,选取S1中的关键区域259~565 aa进行原核重组表达,得到了包涵体形式的重组蛋白,经过纯化和复性,获得了纯度较高的可溶性S1蛋白;用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定,表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性,为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。     

中西医综合治疗47例脑梗塞的临床观察

动脉硬化性脑梗塞是脑血管疾病中最常见的一种。它在很大程度上影响患者的生活质量,部分病人可因梗塞面积大或并发出血、感染、心肌梗塞等而危及生命。本文将在我院中西病房1995年收治的47例脑梗塞病人治疗情况作一小结。 1 资料与方法 1.1 一般资料 自1995年1月至12月,共收治脑梗塞病人47例(均经头颅CT检查证实)。其中男性23例,女性24例。年龄最大84岁,最小36岁,平均年龄60.19岁。大多在秋、冬季发病。其中合并脑出血1例,脑萎缩25例,冠心病29例,糖尿病1例,颈椎病3例,胆囊炎5例,血小板减少1例。     

混合气体与痛点阻滞治疗肩周炎30例临床观察

我院于1994年始对30例肩周炎采用混合气体与痛点阻滞治疗,获得了良好的效果,现报告如下: 1 对象与方法 1.1 对象 男16例,女14例;年龄42～56岁;病程3个月至1年;多数病例为单侧,仅有2例为双侧;疼痛部位多在肩部前、后侧,有明显压痛,肩关节功能障碍,表现为不能梳理头发