关节软骨缺损修复的基因治疗实验人胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染软骨细胞及其在软骨细胞中的表达

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染人软骨细胞的可能性及其在软骨细胞中的表达,并初步判断转基因细胞的生物学功能变化.方法实验于2002-07/2003-06在中山大学附属第二医院医学研究中心完成.①构建pcDNA3.1-胰岛素样生长因子I/GS质粒,将构建质粒在大肠杆菌DH10B中大量扩增后,抽提纯化质粒,并对质粒进行测序鉴定.②将鉴定的质粒用阳离子脂质体转染人关节软骨细胞,通过逆转录-聚合酶链反应、Westren-blot等方法检测胰岛素样生长因子Ⅰ基因在人关节软骨细胞中的表达.③分别将同代软骨细胞与转基因细胞的培养液、软骨细胞与转基因细胞裂解液和二甲基亚甲蓝共孵育后,检测各混合液的吸光度,以此判断同代软骨细胞、转基因细胞、软骨细胞培养液、转基因细胞培养液中的蛋白多糖含量.结果①质粒鉴定结果质粒抽提纯化后电泳可见3条DNA条带,符合质粒的电泳图谱;质粒的测序结果和胰岛素样生长因子Ⅰ基因序列完全吻合.②胰岛素样生长因子Ⅰ基因在软骨细胞中的表达质粒转染软骨细胞后,反转录-聚合酶链反应能见到298 bp的胰岛素样生长因子ⅠmRNA片断的表达;Western-blot可见7.6 ku的胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白表达条带.③转胰岛素样生长因子Ⅰ基因对软骨细胞分泌蛋白多糖的影响转基因软骨细胞裂解液和同代的软骨细胞裂解液的蛋白多糖含量分别是(5.23±0.62)mg/L和(2.47±0.31)mg/L,两组比较,差异有显著性意义(t=2.88,P＜0.05);转基因软骨细胞培养液和同代非转染软骨细胞培养液中的蛋白多糖含量分别为(9.92±1.04)mg/L和(4.56±0.51)mg/L,两组比较,差异有显著性意义(t=6.47,P＜0.05).结论胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染人关节软骨细胞后能在软骨细胞中表达,并能促进软骨细胞分泌软骨基质蛋白多糖,具有促DNA合成和维持软骨细胞表型稳定的能力.转胰岛素样生长因子Ⅰ基因软骨细胞的研究为体外软骨组织工程和关节软骨病的基因治疗提供了直接的实验依据.     

支具治疗中度特发性脊柱侧凸患儿59例8年随访

背景:对于中度脊柱侧弯畸形患者的治疗干预方法的选择至关重要.目的:观察规律佩戴支具治疗中度特发性脊柱侧凸的疗效,并与间断佩戴和未佩戴矫形支具比较.设计、时间及地点:回顾性病例对比分析,1996-01/2004-12中山大学附属第二医院.对象:中度脊柱侧凸患儿59例,男21例,女38例,年龄12～16岁.34例患儿进行支具治疗,其中部分患儿遵医嘱规律佩戴,每天20～22 h;另有部分患儿没有坚持规律佩戴,每天8～10 h.另25例因各种原因未遵医嘱佩戴支具而行体操疗法.方法:观察时间为3～7年,平均时间为4.5年.支具的佩戴终止时间以Risser征5度为主要参考指标.通过摄X-ray的脊柱全长片,对比患者观察前后的侧弯角度,原Cobb角> 20°现Cobb < 10°为消退, Cobb角减少5°以上为减轻,Cobb角相差在5°内为未变,Cobb角增加5°以上为进展, Cobb角大于40°,最终选择手术治疗为失败.主要观察指标:各组治疗结束后临床疗效.结果:规律佩戴支具组有效率达90.9%,间断佩戴支具组有效率达50.0%,未佩戴支具组有效率为48.0%.经比较支具规律组优于支具间断组和无支具组(P < 0.05).结论:坚持正确规律佩戴支具(佩戴时间不应少于20 h)治疗中度特发性脊柱侧凸疗效确切.     

热带病和寄生虫病研讨会会议纪要

2014年5月16至18日,热带病和寄生虫病研讨会在杭州顺利举行。本次会议为期3天,共收到论文84篇,其中专题报告15篇,大会发言14篇,200余名奋战在热带病和寄生虫病学界的代表参加了会议。会议由浙江省医学会热带病与寄生虫病分会（筹）主任委员黄建荣教授致开幕词,中华医学会副会长、中国工程院院士李兰娟教授到会致祝贺词并讲课,吴南屏、闻礼永、王伟洪、朱敏、肖永红、杨益大、李君、朱彪等教授莅临作专题报告。     

两种方法对口腔印模的消毒效果观察

目的 比较两种消毒方法对口腔印模的清洗效果,探求最为有效的口腔印模消毒方法.方法 将口腔印模120例以消毒方法分为2％戊二醛浸泡组,二氧化氯喷雾组以及阳性对照组,并根据不同菌种分别进行细菌培养后计算抑菌率;比较两种方法的灭菌效果,应用SPSS11.5统计软件对结果进行统计分析.结果 戊二醛浸泡后印模上抑菌率金黄色葡萄球菌为(96.45±0.09)％、大肠埃希菌为(94.37±0.05)％、白色假丝酵母菌为(95.22±0.06)％、溶血链球菌为(94.15±0.07)％,而用二氧化氯喷雾法抑菌率则分别为(92.03±0.06)％、(90.13±0.12)％、(91.14±0.07)％、(90.05±0.10)％,抑菌效果均较好,但由于喷雾不完全,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对不同材料的印模,选择的消毒方法也不同,应综合考虑消毒浓度、时间、方法,以便于选择.     

无血清培养对人绒毛膜来源间充质干细胞免疫活性的影响

目的 评价人绒毛膜来源间充质干细胞(MSCs)在无血清培养体系中的免疫活性,探索干细胞安全的应用于临床的条件.方法 应用无血清与含10％胎牛血清培养基培养人绒毛膜来源MSCs,比较两种培养条件下培养细胞的形态、免疫表型、分化潜能及对混合淋巴细胞反应的抑制作用等生物学特性.结果 两种方法培养的细胞形态相似,表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、人类白细胞抗原(HLA)-DR;具有多向分化潜能,同样能明显抑制混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的干细胞数量成正比,可以减少混合淋巴细胞反应中白细胞介素2、γ-干扰素的分泌.结论 人绒毛膜来源间充质干细胞经无血清培养后仍保持原有的细胞形态、免疫表型、多向分化等生物学特性,没有改变免疫学活性.无血清培养可取代有血清培养用于细胞培养,避免经有血清培养的干细胞移植等临床应用研究引起的免疫原性反应及人畜共患病.     

NT-proBNP对心衰患者的临床诊断意义

目的:观察检测心力衰竭患者血清中N末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)浓度,以及与心功能分级(NYHA分级)和左室射血分数(LVEF)等临床指标之间的相关性,评价NT-proBNP在心衰中的应用.方法:选取无锡市人民医院2011年2月～2011年3月住院心衰患者63例,采用电化学发光法测定血清NT-proBNP浓度,...     

慢性乙型重型肝炎抗病毒治疗的研究进展

目前,慢性重型乙型肝炎已成为导致乙型肝炎患者死亡的主要原因,病死率国外为80%～90%,国内为50%～78%[1].近年来,慢性重型乙型肝炎患者的抗病毒治疗取得了较大进展,现将相关研究结果作一综述.     

闭孔疝嵌顿误诊为大腿脓肿1例

患者钟某,女,73岁,因右大腿红肿热痛1周,破溃流脓2天而于2007年1月27日入院。患者于1周前无明显诱因出现右大腿根部红肿疼痛,局部发热,2天前破溃流脓,大小便正常,右下肢肿胀,行走困难,2周前因肠梗阻在内科保守治疗1周痊愈出院。     

有创与无创通气治疗慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者的效果

目的观察有创与无创通气治疗慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者的效果。方法按照随机数字表法将78例慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者随机分为观察组和对照组,观察组患者采用有创通气治疗,并合理使用抗生素预防感染;对照组采用无创通气治疗,选用大小合适的四头式无创呼吸机专用口鼻面罩。结果两组患者显效率、有效率、无效率差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论有创机械通气和无创机械通气治疗均能有效治疗慢性阻塞性肺病合并呼吸衰竭。     

TGAb、TMAb放射免疫分析的内质控

为探讨甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺微粒体抗体(TMAb)放射免疫分析(RIA)结果不稳定的原因,分析比较了不同批号试剂测得的低、中、高质控血清TGAb和TMAb结果,观察标记抗原分别在2～8℃和零下冻存条件下的稳定性.结果显示,TGAb、TMAb的高质控测定值批间差异最高达33.0%和32.5%,二抗滴度变化是误差的主要原因,零下冻存的标记抗原具有较好的稳定性.严格的室内质控是提高检测质量的有效措施.