等容血液稀释和亚硒酸钠对家兔急性心肌梗塞早期左室功能的影响

40只家兔结扎冠脉左室支上中1/3交界造成AMI后,随机分为4组,每组10只。Ⅰ组:未给任何处理,Ⅱ组:动脉放血9ml/kg,同时等容等速静脉输入右旋糖酐40,Ⅲ组:静滴亚硒酸钠1.5mg/kg,Ⅳ组:先按Ⅱ     

小鼠DIC模型复制和在教学实验中的应用

目的探讨小鼠DIC模型复制和在教学实验中的应用，分析学生试行实验效果，验证模型的可行性。方法制备鼠脑悬液上清，配成不同比例，经尾静脉注射制作小鼠DIC模型，观察注射后30min、60min、90min的凝血时间；观察不同存储条件、无菌生理盐水不同配比条件下的鼠脑悬液上清对模型的影响；观察不同群体的学生试行实验的效果，分析可行性。结果使用1：3和1：4两个配比剂量的鼠脑悬液上清，其模型制作效果和DIC指标的变化具有较高的重复性和稳定性；冷冻保存的鼠脑悬液上清制作模型的效果更好；使用本模型试验能够在2个学时内完成。结论本模型能够反映DIC的发展进程，易于学生掌握，适合教学的要求，亦可用于相关的科研实验。     

全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达

目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。     

食管鳞癌组织中MET原癌基因mRNA的表达

目的:探讨食管鳞癌组织中原癌基因METmRNA的表达。方法:应用实时荧光定量RT-PCR及基因芯片技术对15例食管鳞癌组织(高分化4例,中分化5例,低分化6例)和相应正常食管黏膜组织进行METmRNA检测。结果:cDNA微阵列和实时荧光定量RT-PCR技术检测结果一致率达100%。15例食管鳞癌组织中有12例METmRNA为上调表达。METmRNA的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的部位、大小、肿瘤进展程度等临床病理特征无关(P>0.05),但高、中分化食管癌组织METmRNA表达水平与低分化组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MET原癌基因表达水平与食管鳞癌细胞分化相关。     

结肠癌组织微环境对树突状细胞的影响

目的 探讨结肠癌组织匀浆上清液模拟肿瘤微环境对人树突状细胞(DC)分化发育的影响,以及血管内皮生长因子A(VEGF-A)在其中所起的作用.方法 制备新鲜结肠癌及癌旁组织匀浆上清液.分离人外周血单个核细胞,含重组人粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和rhIL-4的1640培养液诱导DC,第2天在此基础上设结肠癌匀浆上清组、癌旁组织匀浆上清组、VEGF-A组及正常DC组,第4天加入结肠癌细胞株SW620抗原,第6天加入脂多糖,第8天收集各组细胞.ELISA检测肿瘤组织匀浆上清液中VEGF-A含量.观察DC形态,流式细胞术检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a表达,CCK-8检测T细胞增殖率及杀伤率.结果 结肠癌组织匀浆上清VEGF-A含量明显高于癌旁组织(P＜0.05);与正常DC组相比,结肠癌匀浆上清组细胞形态明显受到抑制,数目减少,表面抗原表达率明显下降(P＜0.01),混合淋巴细胞反应能力及杀伤力也明显下降(P＜0.01);而VEGF-A组细胞数目及形态与正常DC组相比无明显改变,对所检测的Dc表面抗原并无明显抑制(P＞0.05),但在功能实验中它却起到了明显抑制T细胞增殖及杀伤功能的作用.结论 结肠癌组织匀浆上清液所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用,在该过程中VEGF-A起到抑制T细胞免疫功能的作用,但该作用并非通过抑制DC共刺激分子表达而实现.     

小鼠IFN-γ真核表达载体的构建及其抗肿瘤效应研究

目的：构建小鼠IFN-γ的真核表达载体，将载体在体外转染小鼠腹腔MΦ，观察MΦ的抗肿瘤效应。在荷瘤小鼠腹腔内注射重组表达载体，观察抗肿瘤效应。 方法： RT-PCR扩增小鼠IFN-γ mRNA，将扩增的cDNA通过亚克隆重组到表达载体pcDNA3.1上。体外转染小鼠的腹腔MΦ，RT-PCR检测小鼠IFN-γ mRNA的表达，用转染的MΦ的培养上清培养另一组MΦ，MTT法检测MΦ对肿瘤细胞的杀伤活性。将重组质粒注射到荷瘤小鼠腹腔，观察小鼠腹水出现时间和存活时间。 结果: 将小鼠基因的开放阅读框（ORF）重组到真核表达载体pcDNA3.1内，测序证实和GenBank所公布序列相符。体外将IFN-γ基因导入MΦ内并表达，其培养上清对MΦ有激活作用，杀伤肿瘤细胞活性增强。腹腔内注射重组表达载体，荷瘤小鼠的腹水增长延迟、荷瘤生存时间延长。 结论： 构建的小鼠pcDNA3.1-IFN-γ表达载体体外转染腹腔MΦ并获表达，体内外实验显示有抗肿瘤细胞活性。     

食管癌基因表达谱及其与细胞分化的相关性研究

目的:研究原发性食管癌基因表达谱,筛选与肿瘤细胞分化相关的基因,旨在寻找或定位食管癌分化相关基因,加深对其癌变分子机制的了解. 方法: 应用基因芯片技术对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测,并用生物信息学对检测结果进行分析. 结果: 在886条目的基因中有110(12.42%)条至少2次出现差异表达,与肿瘤分化直接相关的基因有16条(1.81%),其中表达上调的9条(1.02%),表达下调的7条(0.79%). 结论: 高通量的基因芯片技术筛选出大量的ESCC相关基因,从中可分析出与肿瘤分化相关的基因. 对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路,并可作为ESCC诊断的指标和治疗的靶点.     

PBCA纳米粒介导反义寡核苷酸转染对肺腺癌细胞hTERT的影响

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NPs,NPs)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)载体转染肺腺癌A549细胞,观察其对该细胞hTERT mRNA表达的影响。方法以NPs携带ASODN转染A549细胞后,用流式细胞仪检测细胞周期;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞hTERT mRNA表达的改变。结果转染后,与空白对照组和正义寡核苷酸(SODN)组相比,ASODN组G0/G1期细胞增加,S期细胞明显减少(P<0.01),hTERT mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论hTERT ASODN能有效改变A549细胞的细胞周期,下调hTERTmRNA表达,对肺腺癌细胞生长有抑制作用。     

不同处理的NS1骨髓瘤细胞微小池分隔培养对树突状细胞生长和活性的影响

目的：观察不同方法处理灭活的骨髓瘤NS1细胞对树突状细胞(DC)生长和活性的影响。方法：采用细胞冻融、紫外线照射、次黄嘌呤-氨基瞟呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)杀死肿瘤细胞法处理NS1细胞,将处理过的NS1细胞与DC细胞分别于直径3μm和直径8μm微小池内同池培养,并以活NS1细胞和空白微小池DC孔为对照;观察DC数目和形态改变;检测各组DC激活的体外混合淋巴细胞杀伤活性,观察各组DC对NS1骨髓瘤动物移植性肿瘤的抑瘤效果。结果：与活NS1同一孔池培养的DC数目减少,形态改变,不能诱导太强的细胞活性T淋巴细胞(CTL)作用和宿主体内免疫系统的抗肿瘤作用。而不同处理灭活NS1脉冲致敏的DC增殖旺盛,形态典型,均诱导出较强的CTL作用和宿主体内免疫系统的抗肿瘤作用。结论：在肿瘤免疫治疗中,脉冲致敏DC一定要用灭活的肿瘤细胞作为抗原刺激物,才能有效地完成抗原递呈功能。     

食管癌点突变型DNA聚合酶β与绿色荧光蛋白重组表达载体的构建

目的构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ.方法运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T-A克隆至pGEM-TEasy载体,再定向克隆至pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体,重组质粒pEGFP-C3-polβ用限制性内切酶酶切和通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析.结果 DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列与已知的点突变型DNA聚合酶β基因序列相符.结论成功构建了携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组的荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ,为DNA聚合酶β基因的体内外表达及蛋白定位提供了理想的标记.