曲古菌素A上调食管癌CAR的表达及增强溶瘤腺病毒转染效率的体外研究

目的 通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古菌素(trichostatin A,TSA)对食管癌细胞株EC9706膜表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)表达水平的影响,观察TSA能否通过上调食管癌EC9706 CAR表达而增强其对腺病毒基因转染效率.方法 采用免疫细胞组织化学、RT-PCR、Western blot检测食管癌EC9706细胞CAR的表达情况,再用上述方法检测TSA作用EC9706细胞后,CAR mRNA和CAR蛋白表达的改变;同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(Ad-TK)的体外抗瘤效应.结果 0.5 μmol/L TSA处理EC9706细胞12、24、48 h后,CAR mRNA和蛋白表达量[分别为(0.44±0.01)、(0.37±0.02),(0.66±0.04)、(0.58±0.01),(0.77±0.05)、(0.70±0.03)]与未加TSA处理组[(0.27±0.02)、(0.22±0.03)]相比,CAR mRNA和蛋白表达水平显著提高(P<0.05,P<0.01),呈现出时间依赖关系.流式细胞仪分析Ad-GFP转染后GFP的表达发现,未加TSA处理细胞转染效率为(1.35±0.11)%,0.5 μmol/L TSA作用12、24 h 和48 h后,细胞转染效率分别为(2.58±0 17)%、(4.96±0.14)%、(6.36±0.15)%.MTT检测Ad-TK介导的体外杀伤作用结果显示,0.5 μmol/L TSA作用48 h比未加TSA增强8倍.结论 TSA通过上调CAR表达量从而增强腺病毒对食管癌细胞的腺病毒基因转染效率.     

RT—PCR检测癌胚抗原基因转染树突状细胞的表达

目的：通过向人DCs转染含人CEA真核表达质粒，使DCs特异性的表达和提呈CEA。方站：RT—PCR检测转染人CEA真核表达质粒DCs的表达。结果：转染CEA质粒的DCs，RT—PCR检测有一特异性扩增带。结论：用脂质体能成功将人CEA真核表达质粒转入DCs并表达。     

等容血液稀释和丹参对缺血再灌注心肌的保护作用

观察了右旋糖酐40等容血液稀释和复方丹参注射液对犬急性缺血再灌注心肌的影响。结果:单用右旋糖酐40或丹参可使±dp/dt—max较对照组明显升高(P<0.05).两组间虽无明显差异.前者发挥作用较快。二者合用不仅使±dp/dt—max、LVSP较对照组明显升高(P<0.05),而且较单用右旋糖酐或丹参组明显升高(P<0.05),心肌丙二醛含量降低,梗塞范围缩小。提示:①右旋糖酐40等容血液稀释和复方丹参注射液对缺血再灌注心肌功能有保护作用,前者发挥作用较快。②二者并用有良好的协同作用。     

肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

目的：观察肺腺癌A549细胞培养上清液（TSN）对人单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响。方法：制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原；人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组，分别于培养全程或晚期（第7d）加入TSN或第4d加入冻融抗原冲击致敏，制备MoDC瘤苗，第9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应（MLR）、MoDC诱导的细胞毒性T细胞（CTL）抑瘤活性、培养上清液中IL－12含量。结果：培养全程加TSN的MoDC，相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原（HLA－DR）明显下调，凋亡率明显升高，同时，激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL－12的量均显著低于正常培养组；培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC，均无上述影响；脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗，表型明显上调、各项免疫指标明显升高，诱导出了高效的抗A549免疫应答。结论：TSN能干扰MoDC成熟过程，下调基表型表达，诱导其凋亡发生、抑制其介导的抗肿瘤免疫应答；而脱离TSH影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高铲的抗瘤免疫应答。     

糖尿病患者血液流变学和甲皱微循环的改变

我们对70例糖尿病患者进行了血液流变学和甲皱微循环的检查,现将结果报告如下:一般资料70例糖尿病患者均经内科内分泌疾病门诊确诊,其中男38例,女32例;年龄21～75岁,平均47.91岁,45岁以上患者占81.2％;病程2～31年,平均3.9年;血糖波动在118～400mg％,平均230mg％;患者烦渴、多饮、多尿等临床症状明显。另以73例健康人作对照检查,其中男33例,女40例,平均年龄49.91岁。使用仪器、检查项目及方法:血液流变学检查采用上海产 XN—4型血液粘度细胞电     

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-Fu对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00 mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00 mg/L)及Pae(31.25 mg/L)和5-FU(12.50 mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72 h.同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况:采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31-25、62.50、125.00、250.00 mg/L)处理EC9706细胞72 h后细胞周期的变化:倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞:采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25 mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48 h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5.FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降、S期细胞比例上升(Pae 125.00 mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28% vs 62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54% vs 9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82% vs 27.91%±2.13%,均P<0.05):HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变:Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14 vs 5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33 vs 3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖.促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.     

同池分隔培养NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞的影响

目的 :观察同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞 (DC)的影响。方法 :用不同孔径微小池分隔法 ,同池培养骨髓瘤NS1与骨髓DC。分别设为①无微小池DC孔 ,② 3μm微小池DC孔 ,③ 3μm微小池DC +NS1孔 ,④ 8μm微小池DC孔 ,⑤ 8μm微小池DC +NS1孔各 3孔。每个培养孔底均有生长 3周的DC ,铺满孔底 ,每孔5× 10 5,仅③、⑤孔微小池内加入NS11× 10 4,每 2d换 1次培养液 ,同池共育 4 0d ,观测DC数目和形态改变 ;共育 7d时 ,做体外细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性检测。结果 :与NS1骨髓瘤细胞同一孔池中培养的DC的数目减少 ,形态改变 ,抗原递呈功能下降。结论 :同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞抑制DC的增殖和功能。     

等容血液稀释和葡萄糖-胰岛素-氯化钾溶液对狗急性心肌梗塞早期左心室功能的改善

在麻醉开胸纯氧呼吸狗急性心肌梗塞(AMI)模型上,观察了右旋糖酐40等容稀释血液和静滴葡萄糖-胰岛素-氯化钾溶液(GIK)对狗AMI 6h内左心功能(±dP/dt-max,LVSP)的改善作用。结果:单用等容血液稀释或静滴GIK溶液仅使+dP/dt-max较对照组(未给治疗)明显升高(P<0.05),但前者发挥作用较快;二者联合应用不仅能使+dP/dt-max、LVSP较对照组均明显升高(P<0.05),而且可使-dp/dt-max、LVSP较单用等客血液稀释或静滴GIK溶液组明显升高(P<0.05)。提示:①等容血液稀释或静滴GIK溶液对AMI早期左心室收缩功能均有显著改善作用;②前者发挥作用较快;③二者联合应用不仅能进一步改善AMI后左心室收缩功能,且对舒张功能也有显著改善作用,表现出良好的协同效应。