应用流式细胞术动态观测小鼠树突状细胞诱导的T细胞增殖的变化

目的：运用流式细胞术（FCM）分析小鼠混合淋巴细胞反应（MLR）中T细胞增殖的动态变化。方法：把分别经脂多糖（LPS）和生理盐水（NS）刺激的小鼠树突状细胞（DC）经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后，以1：50的比例与小鼠T细胞（TC）进行同种MLR，分别作为LPS＋DC＋TC组和NS＋DC＋TC组，同时设LPS＋TC组和空白TC对照组。经体外培养，分别于反应的第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d收集TC，FCM检测TC细胞周期。结果：随培养时间的延长，LPS＋DC＋TC组、NS＋DC＋TC组S期细胞及细胞增殖指数均先增后减、LPS＋TC组和空白TC对照组则呈下降趋势（P〈0．05），各组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：FCM可以从单细胞水平客观、准确地反映淋巴细胞增殖的动态变化。     

体外研究CpG基序对人食管癌疫苗的佐剂效应

目的:探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗研究中的佐剂效应.方法:以Eca-109细胞膜表面小肽刺激DC作为食管癌疫苗,HL-60细胞膜表面小肽刺激DC作为对照疫苗.以CpG基序作为佐剂,以CBPw作为对照佐剂,测定各组的T细胞增殖试验和CTL活性.结果:佐剂组的T细胞活性明显高于其余各组(P＜0.01);人食管癌疫苗组的T细胞活性明显高于其余各组(P＜0.01);与Eca-109细胞匹配的HLA也影响了T细胞活性的发挥.结论:CpG基序是人食管癌疫苗的有效佐剂,HLA对T细胞功能有影响.     

息痛颗粒对血瘀型动物微循环的影响

息痛颗粒是治疗偏头痛的中药复方制剂,我室对其药效学进行了研究,现将息痛颗粒对血瘀型小鼠微循环的影响报道如下:     

灵芝孢子粉对荷瘤小鼠树突状细胞的影响及其抗瘤效应

目的通过研究灵芝孢子粉对荷H22肝癌小鼠髓源性树突状细胞(DC)的影响及其抗肿瘤效应,探讨其抗肿瘤机制。方法应用不同浓度灵芝孢子粉(1、2、3g·kg-1·d-1)连续14d灌胃荷瘤小鼠后,处死小鼠,无菌获取骨髓细胞,粒细胞巨噬细胞刺激因子(GMCSF)和白细胞介素(IL)4体外诱导骨髓细胞生成DC,同时培养液中继续加入不同浓度灵芝孢子粉(0.8、3.2、12.8mg/L)。通过显微镜、流式细胞仪检测技术及细胞毒性实验观察不同浓度灵芝孢子粉对DC的影响,并通过脾指数、胸腺指数及肿瘤抑制率来观察其抗肿瘤效应。结果灵芝孢子粉能够促进荷瘤小鼠髓源性DC的分化、成熟及表面分子CD11a、CD86的表达,增强DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞反应;灵芝孢子粉能够使荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺的重量增加,并明显抑制肿瘤的生长,存在量效关系。结论本实验表明灵芝孢子粉能够通过刺激DC的分化成熟,提高其抗原提呈能力,进而起到提高机体细胞免疫,抑制肿瘤生长的作用。     

牛膝多糖与锌对小鼠树突状细胞增殖分化和抗原提呈能力的影响

目的研究牛膝多糖与锌单用及合用在异源性抗原负载的条件下对小鼠树突状细胞(DC)增殖分化和抗原提呈能力的影响,并通过体内实验证实其对荷瘤小鼠的免疫效应,探讨其发生机制。方法无菌处死正常小鼠获取其骨髓细胞,粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导骨髓细胞生成DC,同时培养液中加入不同质量浓度的牛膝多糖(200、300、400μg/mL)、锌(0.02μg/mL)。通过显微镜、流式细胞检测技术观察牛膝多糖、锌单用与合用在异源性抗原负载的条件下对DC的影响,并通过体内实验观察对H22荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数及肿瘤质量的影响。结果牛膝多糖和锌单用在异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓源性DC的分化、成熟及表面标记CD86、CD11a的表达,增强DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞反应,能够使荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺的质量增加,明显抑制肿瘤的生长,并存在明显量效关系;中剂量为正性效应,高剂量为负性效应;但牛膝多糖和锌合用并不协同增强效应。结论牛膝多糖和锌在异源性抗原负载的条件下能够通过刺激DC的分化成熟,提高其抗原提呈能力,进而起到提高机体细胞免疫的作用。     

人B7-2和增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建

目的构建含人B7-2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体pEGFP-N3-B7-2.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7-2cDNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM-Teasy和pEGFP-N3上.结果通过酶切和序列分析证实插入片段序列正确.结论应用基因工程技术构建成功pEGFP-N3-B7-2融合基因表达载体,为增强型绿色荧光蛋白作为人B7-2生物标记分子,转染肿瘤细胞及树突状细胞制备疫苗奠定了基础.     

人食管鳞状细胞癌基因表达变化的cDNA芯片研究

目的 利用TaKaRa人癌基因芯片研究食管鳞状细胞癌（ESCC）和相应正常组织差异表达基因．分析基因差异表达谱,以期找到更快捷、高通量的方法来筛选与原发性食管癌发生、发展以及与食管癌临床进展相关的分子标记物。方法 应用基因芯片技术及激光捕获微切割术、T7RNA聚合酶扩增技术,对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测,并用生物信息学对检测结果进行分析。结果 在886个目的基因中有110条（12．42％）至少2次出现差异表达．其中56条（6-32％）基因表达上调幅度〉2．0倍,54条（6．09％）基因表达下调幅度〈0．5。结论 高通量的基因芯片技术可筛选出大量ESCC相关基因,对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路。     

食管鳞癌分化相关基因表达谱及其染色体精确定位

基因表达谱,结合临床病理资料筛选食管癌分化相关基因,并在染色体上精确定位。结果:与食管鳞癌分化直接相关的基因有16条,包括MET,KRT4,EGFR,KRT13,CSK,EGR1,CCND1,EPHA2,CEACAM1,PTPN2,HSPBP1,CD-KN1B,BCL2L2,SDC1,CDH1,CTNNA1;主要集中在染色体1p,2p,5q,7p,7q,11q,12p,12q,14q,15q,16q,17q,18p,19q。结论:食管鳞癌发生和演变涉及多条染色体异常的积累。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨酪氨酸激酶(TPK)抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响. 方法:取对数生长期K562细胞,分4组培养.Ⅰ组不加任何药物,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别加0.5 μmol/L、1 μmol/L和2 μmol/L 的STI571,继续培养5 d.每d行细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,连测5 d.培养36 h时,取细胞,双缩脲法检测细胞蛋白含量,采取蛋白免疫印迹法进行Procaspase-3及Bcl-xL检测.结果:Ⅱ组、Ⅲ组细胞数低于同-时间段Ⅰ组细胞数(P＜0.05),但高于Ⅳ组细胞数(P＜0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组Procaspase-3和Bcl-xL蛋白表达降低(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比,Ⅳ组2者表达量更低(P＜0.01).结论:STI571通过下调Bcl-xL,激活Procaspase-3,诱导K562细胞凋亡,从而抑制K562细胞的生长.     

互隔交链孢霉素对NIH/3T3细胞毒性的作用

目的 研究互隔交链孢霉素(altenuene,ALT)对NIH/3T3细胞的毒性作用,为互隔交链孢霉的致癌机制提供理论依据.方法 以互隔交链孢酚(alternariol,AOH)为阳性对照,采用形态学观察,噻唑蓝法,生长曲线,流式细胞术(FCM)等方法检测不同浓度的ALT对NIH/3T3细胞生长的影响及细胞周期的改变.结果 ALT对NIH/3T3细胞的半数抑制率为76.4、50和100 μmol/L的ALT染毒24 h可使NIH/3T3细胞生长曲线明显下降,并有明显的形态学改变;以10.0、20.0和50.0 μmol/L的ALT染毒24 h后,与对照组比较,G2/M期细胞比例增加,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 ALT对NIH/3T3细胞有毒性作用,可抑制细胞增殖并诱导G2/M期细胞阻滞,其细胞抑制作用可能与细胞周期阻滞有关.