吡咯烷二硫代氨基甲酸对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:用不同剂量PDTC(1、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞24、48和72 h后,MTT法观察细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率.用不同剂量PDTC(0、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞48 h后,测定细胞凋亡率和细胞周期.结果:PDTC可剂量依赖性和时间依赖性地抑制EC1细胞的增殖(F剂量=8.950,P=0.005;F时间=30.718,P<0.001;F交互=60.504,P<0.001).不同剂量PDTC作用48 h后,随着PDTC剂量的增加,EC1细胞凋亡率增加(F=7.020,P=0.001),G0/G1期细胞比例降低(F=771.064,P<0.001),G2/M和S期细胞比例增加(F=963.002、309.332,P均<0.001).结论:PDTC可以抑制食管癌细胞系EC1的增殖,诱导其发生凋亡,并将其阻滞在S期.     

高温预处理防止大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

近年来 ,研究发现应激预处理能诱导细胞合成应激蛋白 (ｓｔｒｅｓｓｐｒｏｔｅｉｎ ,ＳＰ) ,亦称热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏ ｔｅｉｎ,ＨＳＰ) ,可提高细胞的抗损伤能力[1 ] 。我们在大鼠心脏缺血再灌注损伤模型上 ,观察了高温预处理对心功能、心律失常及心肌抗脂质过氧化能力等的影响 ,以期为临床防治心肌缺血再灌注损伤提供依据。一、材料与方法1 .实验动物 :健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,雌雄不拘 ,4个月鼠龄 ,体重 2 50～ 30 0 ｇ ,由本校实验动物中心提供。2 .实验材料 :上海医疗器械仪器厂生产的ＳＪ 42型多道生理记录仪 ;浙江医…     

等容血液稀释和超氧化物岐化酶对兔缺血/再灌注心肌的保护

结扎兔冠脉左室枝４５ｍｉｎ，再灌注１８０ｍｉｎ，复制急性心肌缺血／再灌注模型，观察等容血液稀释和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）对兔心肌缺血／再灌注损伤保护的协同作用并探讨其可能的机制。４０只动物随机分为４组:Ⅰ组（对照组）、Ⅱ组（稀释组）、Ⅲ组（ＳＯＤ组）和Ⅳ组（稀释＋ＳＯＤ组）。结果:与Ⅰ组比，Ⅱ，Ⅲ组左室收缩功能（最大收缩压、＋ｄｐ／ｄｔｍａｘ）显著改善，Ⅳ组较Ⅱ，Ⅲ组又有显著改善。与Ⅰ组梗塞面积（左室梗塞面积占左室总面积的百分比为１８．１±２．３％）比，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组梗塞面积显著缩小（分别为１１．４±２．１％，１３．８±２．２％，８．３±２．９％），Ⅳ组梗塞面积较Ⅲ组又有进一步缩小（Ｐ＜０．０５）。提示:等容血液稀释和ＳＯＤ对兔缺血／再灌注心肌均有保护作用；两者联用可进一步改善左室收缩功能和缩小梗塞面积。     

DNA聚合酶β过表达对食管癌EC9706细胞的影响

目的:观察过表达的DNA聚合酶β对食管癌EC9706细胞系的影响.方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出野生型和突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,定向克隆至pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体,获得野生型和突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-polβ.分别将野生型和突变型的pEGFP-C3-polβ转染EC9706细胞,荧光显微镜观察其定位,绘制生长曲线,测定细胞周期.结果:DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列正确,荧光显微镜结果显示野生型的DNA聚合酶β表达以细胞核为主,突变型的DNA聚合酶β则表达在整个细胞中,明显与野生型的DNA聚合酶β的核定位不同.而且,野生型的细胞生长较对照组缓慢(P＜0.05),野生型的还能抑制EC9706细胞的生长和使S期细胞减少(22.11±0.12 vs 44.86±0.03,P＜0.05),而突变型的则不能促进EC9706细胞的生长,S期细胞增殖不明显(P＞0.05).结论:过表达的野生型食管癌DNA聚合酶β可以降低EC9706细胞的增殖.     

血液稀释对心肌缺血和缺血再灌注心室功能及血液流变学的影响

用四道生理记录仪和血液粘度检测法观测右旋糖酐４０等容稀释血液对犬心肌缺血和缺血再灌注后左心室功能（ｐＬＶＳ、ｐ±ｄｐ／ｄｔ－ｍａｘ）和血液流变学状态的影响。２４只犬随机均分为４组：１组为缺血组；２组为缺血再灌注组；３组为缺血＋稀释组；４组为缺血再灌注＋稀释组。结果：①血液流变学指标的改变：２组血液流变学状态于再灌注后较１组明显恶化，３、４组各项血液流变学指标在行血液稀释后较同期１、２组均明显改善（Ｐ＜０．０５）。②心功能的改变：２组于再灌注后各项心功能指标较１组显著降低；３组稀释后ｐＬＶＳ、ｐ＋ｄｐ／ｄｔ－ｍａｘ较１组明显升高；４组稀释后ｐＬＶＳ、ｐ＋ｄｐ／ｄｔ－ｍａｘ较２组显著升高（Ｐ＜０．０５），较３组有升高的趋势，但无明显差异（Ｐ＞０．０５），而ｐ－ｄｐ／ｄｔ－ｍａｘ较２、３组均明显升高（Ｐ＜０．０５）。提示：①缺血再灌注后血液流变性将进一步恶化，这可能是再灌注后心功能损伤加重的原因之一；②等容血液稀释对心肌缺血和缺血再灌注后左心功能均有保护作用，但对后者改善作用更明显。     

小鼠一体多瘤模型复制与S180脉冲致敏树突状细胞抗瘤特异性观察

目的 :复制一种新的荷瘤动物模型 ,同一小鼠皮下 ,不同部位荷 3种不同类型肿瘤 (S180、H2 2、EAC瘤株 ) ,继之以一种肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激的树突状细胞 (DC)免疫治疗 ,观察其效应。方法 :昆明小鼠随机分为 5组 ,6只 /组 ,1、2、3组分别荷单一瘤株S180、H2 2和EAC瘤细胞 ;4、5组荷以上 3种瘤株 ;所接种的 3种瘤细胞数均为 6× 10 6,接种部位二侧后腿腋下和背部 ,分别交替接种 3种瘤细胞株 ,其中每 2只接种部位相同 ,第 5组另接受肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激DC行免疫治疗。观察接种后瘤体大小和特异的淋巴细胞毒杀伤活性(CTL)。结果 :1～ 4组组间相比 ,单一荷瘤与复合荷瘤的相同瘤株在肿瘤生长速度上基本相同 (P >0 .0 5 ) ,4组荷瘤鼠生存期相近 (P >0 .0 5 )。与 1～ 4组荷同一瘤株鼠比较 ,脉冲DC免疫治疗鼠 (第 5组 ) ,S180、H2 2和EAC瘤株的增生速度明显减缓 ,荷瘤第 3周时 ,S180、H2 2增生减缓更为明显 (P <0 .0 1) ;EAC瘤株亦呈同样变化趋势 ,但幅度较小。CTL结果显示 ,T淋巴细胞对S180和H2 2瘤细胞株均有很强杀伤活性 (78% ,72 % ) ,而对EAC瘤株杀伤活性较弱 (34% )。结论 :同一小鼠体内同时荷 3种移植瘤株即一体多瘤动物模型可行 ;S180致敏的DC介导T细胞既可杀灭S180又可杀灭H2     

树突状细胞对去脾小鼠荷S180瘤的治疗效果

目的 :观察在无脾状态下小鼠荷S180骨肉瘤时 ,对脉冲树突状细胞 (dendriticcell,DC)的治疗反应 ,初步探讨脾脏与DC在抗肿瘤免疫中的关系。方法 :33只昆明小鼠 ,分为手术对照组、去脾组、去脾 +DC治疗组 3个大组 ,每大组内 5只皮下荷瘤 ,6只腹腔荷瘤。实验开始 8周后 ,每只皮下荷瘤鼠均于右后腿腋下注射S180 2× 10 6,腹腔荷瘤鼠每只腹腔注射S180 1× 10 6。用冻融S180细胞冲击致敏DC后 ,腹腔注射脉冲致敏的DC每只 4× 10 4,1周后重复 1次。检测皮下瘤体大小和称重。结果 :DC对去脾腹腔荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,3组间肿瘤腹水增长速度和死亡时间接近 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;DC对去脾皮下荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,去脾组肿瘤发生率与手术对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但多数鼠 (4/ 5 )死亡时间短于对照组 ;去脾 +DC治疗组鼠荷瘤生存期明显延长 ,80 % (4/ 5 )荷瘤生存时间超过 6 0d ,而手术对照组和去脾组鼠分别为 4 0 % (2 / 5 )和 2 0 % (1/ 5 )。结论 :去脾小鼠荷瘤生存时间缩短 ;DC对去脾后一定时间内的皮下荷S180小鼠可介导抗肿瘤免疫反应。     

互隔交链孢酚对NIH3T3细胞PKA-CREB信号通路的影响

目的：探讨互隔交链孢酚（Alternariol,AOH）对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中PKA-CREB信号通路的影响.方法：20μmol/L AOH作用NIH3T3细胞1 h,或用PKA特异性抑制剂10μmol/L H89预处理1 h,再进行20μmol/L AOH刺激实验,同时设溶剂对照组.用免疫荧光和免疫细胞化学染色法检测磷酸化PKA催化亚基表达情况,用免疫细胞化学染色法检测磷酸化CREB表达水平.结果：与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中磷酸化PKA催化亚基和磷酸化CREB水平明显增加（P〈0.05）;用PKA特异性抑制剂H89预处理,降低了AOH激活的PKA催化亚基和CREB的磷酸化水平.结论：AOH能够激活NIH3T3细胞中PKA-CREB信号转导通路,这为探讨AOH致癌的分子机制提供依据.     

肿瘤多基因研究

人类基因组计划的完成,使我们对基因的研究从理论研究阶段进入到实际应用阶段即开发性研究阶段。概括地说,一是由结构研究转向功能研究;二是由单基因研究转向多基因研究。人类基因组的全部DNA序列的报道标志着人们试图了解人类所有疾病的分子机制这一时代的开端。随着人们对分子医学的逐步了解,临床将从对疾病进行传统的治疗转向以分子分类为基础的治疗。届时,医生会开出既可提高疗效又能减轻毒性作用的理性设计的药物。尽管人们早就认识到了癌     

稳定表达缺失型DNA聚合酶β的CHO细胞系的建立

目的：建立稳定表达缺失型DNA聚合酶β（polβ）的细胞系。方法：将已构建的缺失型polβ的真核表达载体pcDNA3．1-polβ用脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO），经G418筛选后得到稳定转染的细胞株，用RT—PCR方法鉴定细胞缺失型polβmRNA的表达。结果与结论：成功转染和筛选出表达缺失型polβ细胞株CHO—polβ，建立了稳定表达缺失型polβ的CHO细胞株。