Indirubin-3'-monoxime对人食管癌EC-1细胞Survivin表达的影响

目的:研究靛玉红衍生物Indirubin-3'-monoxime(IRO)对人食管癌EC-1细胞增殖、细胞周期和Survivin蛋白表达的影响.方法:分别采用1、5、10 μmol/L的IRO处理培养的食管癌EC-1细胞后,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,采用Western blotting检测Survivin蛋白水平表达.结果:IRO对EC-1细胞生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=12.39,P<0.05);以5 μmol/L的IRO作用EC-1细胞24、48和72 h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变(P>0.05),G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),细胞周期向G2/M期阻滞,呈时间依赖性;IRO作用24 h后EC-1细胞内Sur-vivin蛋白的表达开始下调,在48 h和72 h时进一步下降.结论:IRO可抑制食管癌EC-1细胞增殖,诱导EC-1细胞阻滞于G2/M期,下调EC-1细胞中Survivin蛋白表达.     

互隔交链孢酚激活EC9706细胞DNA聚合酶β表达的信号通路初探

目的：研究互隔交链孢酚（AOH）对食管癌EC9706细胞株中DNA聚合酶β（DNA pol β）表达的影响．方法：以PKA激活剂Forskolin（40μmol／L）为阳性对照,采用免疫细胞化学,Western Blot方法检测20μmol／LAOH作用EC9706细胞16h后pol β蛋白水平的表达．以PKA特异性抑制剂H89（10μmol/L）预处理EC9706细胞1h,再以20μmol／LAOH作用细胞16h,观察H89阻断AOH激活pol β蛋白表达的作用．结果：免疫细胞化学结果显示,与溶剂对照组和I-189处理组相比较,AOH处理组,Forskolin处理组的细胞中pol β表达增高．Western Blot结果表明,AOH处理组,Forskolin处理组pol β表达分别是溶剂对照组的2．05和3．12倍（P〈0．05）,而H89组仅为对照组的1．32倍．结论：AOH可以激活食管癌EC9706细胞中pol β基因表达,这可能是通过PKA信号转导通路介导的．     

急性心力衰竭实验的改进与探索

急性心力衰竭综合实验是病理生理学实验教学中的重要内容，对于深入理解和掌握心力衰竭的理论内容具有重要意义。由于实验课教学对学生进行能力培养比理论课更具有优势^[1]，笔者改进该实验并不断总结教学中出现的问题，对增强学生的动手和临床思维能力具有重要意义。     

食管鳞癌组织中血管内皮生长因子mRNA的表达

目的:探讨食管癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:应用实时荧光定量RT-PCR及基因芯片技术对15例食管鳞癌组织和相应正常食管黏膜组织进行VEGFmRNA检测。结果:15例食管鳞癌组织中有8例VEGFmRNA上调表达,其平均表达水平,cDNA微阵列和实时荧光定量RT-PCR检测结果分别为(3.82±0.75)和(4.11±0.89);VEGFmRNA的表达与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位、大小、形状、病理分化程度等临床病理特征无关,与临床分期、远处转移有关。结论:VEGF在食管癌浸润和转移过程中发挥重要作用,检测肿瘤组织中VEGFmRNA水平对预测食管癌的侵袭和转移具有重要的临床意义。     

小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用

目的：将pcDNA3-hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞（dendritic cell,DC），观察内源性抗原提DC疫苗诱导BALB／C小鼠对CT26－hCEA^ 的抗肿瘤免疫效应。方法：采用细胞因子rmGM-CSF和rmIL-4诱导培养法制备小鼠骨髓DC，利用Lipofectamine将pcDNA3-hCEA和肿瘤来源的RNA分别转染DC，制备能够内源性表达CEA的DC疫苗。使用DC疫苗预防免疫BALA／C小鼠，观察其对于荷CT26－hCEA^ 小鼠的抗肿瘤效应。结果：内源性抗原提呈DC疫苗明显延长荷CT26－hCEA^ 瘤小鼠生存期；与其他方法制备的DC疫苗相比，有较强的针对性抗肿瘤免疫效应和较长的持续效应。结论:地于免疫逃逸的肿瘤，内源性抗原提呈DC疫苗更具有免疫预防效应。     

EC9706肿瘤条件培养基对树突状细胞的影响

目的:探讨食管癌EC9706细胞肿瘤条件培养基模拟的体外肿瘤微环境对人单核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响.方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含rhGM-CSF和rhIL-4的RPMI 1640培养液诱导DC.第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入含rhGM-CSF、rhIL-4的EC9706肿瘤条件培养基;第4天加入超声破碎法制备的EC9706抗原;第6天加入脂多糖.第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC),显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a基因的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其诱导的细胞毒T细胞(CTL)的增殖能力及对EC9706细胞的杀伤能力.结果:第8天,与正常成熟DC相比,TADC细胞呈发育迟缓状态,CD86、CD1a及CD11c表达降低(P<0.01),CD1a基因不表达(正常DC较强表达),TADC体外刺激形成的CTL增殖率及对EC9706细胞的杀伤率均降低(P<0.01).结论:EC9706肿瘤条件培养基所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.     

胃肠道间质瘤免疫表型及预后分析

目的:探讨胃肠道间质瘤(GIST)的免疫表型特征及其与侵袭危险性和预后的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测59例GIST(良性19例,恶性19例,交界性21例)组织CD117、CD34、Vimentin、Desmin、SMA、MSA、S-100、NSE和NF的表达.38例获随访12～72个月,按Fletcher等GIST生物学行为评价标准进行侵袭危险性评估,极低度(Ⅰ)2例,低度(Ⅱ)11例,中度(Ⅲ)11例,高度(Ⅳ)14例,分析生存率与侵袭危险性的关系.结果:59例GIST中,平滑肌源性22例,神经源性22例,神经和平滑肌双源性10例,狭义GIST 5例;4类GIST CD117、CD34、Vimentin阳性率、不同恶性程度GIST上述几种免疫表型阳性率差异均无统计学意义(P>0.05).生存率随侵袭危险性增大而降低(P<0.05).结论:CD117、CD34有助于GIST的诊断.GIST侵袭危险性与预后有关.     

人食管癌顺铂耐药细胞系DNA聚合酶β的表达

目的:建立人食管癌顺铂(cDDP)耐药细胞系,测定耐药细胞系DNA聚合酶β(polβ)的表达。方法:以临床食管磷癌化疗用药的最低剂量换算终浓度,采用cDDP(10mg/L)反复间歇 24h暴露法作用于食管癌细胞系ECa -109,建立cDDP耐药细胞系ECa 109 /cDDP;MTT法测定药物敏感性,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞的周期分布,Westernblot测定细胞内DNApolβ表达水平。结果:与ECa- 109细胞比较,ECa -109 /cD DP细胞形态发生了改变,对cDDP的耐药指数为 1. 56;细胞周期发生了变化,S期细胞增多,G0 /G1 期细胞减少,细胞内DNApolβ表达水平增高(P<0. 05或 0. 01)。结论:ECa-109 /cDDP具有耐药表型,其耐药性产生可能与细胞内DNApolβ表达增高有关。     

真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2的构建

目的：构建含人B7-2基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2。方法：应用RT-PCR、巢式PCR方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增出人B7—2 cDNA基闪片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM—T和pEGFP—C3上．结果与结论：酶切及测序证实成功构建了克隆载休pGEM—B7—2和真核绿色荧光表达载体pEGFP—C3—B7—2。