Indirubin-3'-monoxime对人食管癌EC-1细胞Survivin表达的影响

目的:研究靛玉红衍生物Indirubin-3'-monoxime(IRO)对人食管癌EC-1细胞增殖、细胞周期和Survivin蛋白表达的影响.方法:分别采用1、5、10 μmol/L的IRO处理培养的食管癌EC-1细胞后,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,采用Western blotting检测Survivin蛋白水平表达.结果:IRO对EC-1细胞生长具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=12.39,P<0.05);以5 μmol/L的IRO作用EC-1细胞24、48和72 h后,G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期细胞比例未见明显改变(P>0.05),G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05),细胞周期向G2/M期阻滞,呈时间依赖性;IRO作用24 h后EC-1细胞内Sur-vivin蛋白的表达开始下调,在48 h和72 h时进一步下降.结论:IRO可抑制食管癌EC-1细胞增殖,诱导EC-1细胞阻滞于G2/M期,下调EC-1细胞中Survivin蛋白表达.     

互隔交链孢酚激活EC9706细胞DNA聚合酶β表达的信号通路初探

目的：研究互隔交链孢酚（AOH）对食管癌EC9706细胞株中DNA聚合酶β（DNA pol β）表达的影响．方法：以PKA激活剂Forskolin（40μmol／L）为阳性对照,采用免疫细胞化学,Western Blot方法检测20μmol／LAOH作用EC9706细胞16h后pol β蛋白水平的表达．以PKA特异性抑制剂H89（10μmol/L）预处理EC9706细胞1h,再以20μmol／LAOH作用细胞16h,观察H89阻断AOH激活pol β蛋白表达的作用．结果：免疫细胞化学结果显示,与溶剂对照组和I-189处理组相比较,AOH处理组,Forskolin处理组的细胞中pol β表达增高．Western Blot结果表明,AOH处理组,Forskolin处理组pol β表达分别是溶剂对照组的2．05和3．12倍（P〈0．05）,而H89组仅为对照组的1．32倍．结论：AOH可以激活食管癌EC9706细胞中pol β基因表达,这可能是通过PKA信号转导通路介导的．     

食管鳞癌组织中血管内皮生长因子mRNA的表达

目的:探讨食管癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平与肿瘤侵袭和转移的关系。方法:应用实时荧光定量RT-PCR及基因芯片技术对15例食管鳞癌组织和相应正常食管黏膜组织进行VEGFmRNA检测。结果:15例食管鳞癌组织中有8例VEGFmRNA上调表达,其平均表达水平,cDNA微阵列和实时荧光定量RT-PCR检测结果分别为(3.82±0.75)和(4.11±0.89);VEGFmRNA的表达与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤的部位、大小、形状、病理分化程度等临床病理特征无关,与临床分期、远处转移有关。结论:VEGF在食管癌浸润和转移过程中发挥重要作用,检测肿瘤组织中VEGFmRNA水平对预测食管癌的侵袭和转移具有重要的临床意义。     

实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片方法分析食管癌组织中基因的表达

目的:采用实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片2种技术分析食管癌细胞基因表达的特征。方法:应用cDNA基因芯片筛选15例食管癌基因表达谱,用实时荧光定量RT-PCR验证其中16个基因的表达变化。结果:实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片技术对16个基因的检测结果一致,不仅变化方向相同,而且表达值非常接近。结论:cDNA基因芯片和实时荧光定量RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而实时荧光定量RT-PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证。     

雷米普利对心肌缺血再灌注损伤的防治作用

在大鼠心肌缺血-再灌注模型上观察肾素-血管紧张素系统(RAS)和脂质过氧化物(LPO)二者之间的关系及雷米普利的影响,以探讨心肌缺血-再灌注损伤的发生机制及防治措施。结果:再灌后二者异常改变是一致性,提示心肌缺血-再灌注损伤;用雷米普利后二者改变亦呈一致性,RAS活性降低,而以血RAS为主(P<0.01),LPO代谢紊乱得到改善(P<0.01)。提示心肌缺血-再灌注损伤与RAS活性增高和LPO代谢紊乱有关,而雷米普利对缺血-再灌注心肌有保护作用。     

真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2的构建

目的：构建含人B7-2基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2。方法：应用RT-PCR、巢式PCR方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增出人B7—2 cDNA基闪片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM—T和pEGFP—C3上．结果与结论：酶切及测序证实成功构建了克隆载休pGEM—B7—2和真核绿色荧光表达载体pEGFP—C3—B7—2。     

阿魏酸钠对离体大鼠缺血心肌再灌注损伤的影响

为探讨缺血心肌再灌注损伤的防治措施，采用改良的Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ法建立离体大鼠缺血心肌再灌注模型，观察阿魏酸钠在缺血心肌再灌注过程中的作用。结果显示：阿魏酸钠能够抑制丙二醛及血栓素Ｂ２的产生，减轻心肌水肿及乳酸脱氢酶的释放，并能促进６－酮－前列腺素Ｆｌα的产生。结果初步提示：阿魏酸钠具有抗缺血心肌再灌注损伤的作用。     

PBCA纳米粒介导hTERT反义寡核苷酸对A549细胞的转染

目的：应用聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导或者寡核苷酸直接转染技术，研究聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导下端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对A549细胞的转染，探讨聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒对A549细胞摄入寡核苷酸的影响。方法：利用5’端FITC标记的反义寡核苷酸，以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导FASODN（FASODN—NP）或FASODN直接转染A549细胞，流式细胞仪测定细胞的胞内平均荧光强度，荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布。结果：转染24h后，与空白对照组和FASODN组相比，FASODN—NP组胞内荧光强度明显增加（P〈O．01）。结论：聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导能有效提高A549细胞对端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸的摄入。     

抑制Raf-MEK-ERK信号传导途径上调食管癌细胞株EC9706柯萨奇-腺病毒受体的表达

目的 研究Raf-MEK-ERK信号传导途径对食管癌EC9706细胞柯萨奇-腺病毒受体(CAR)表达的影响.方法 用ERK抑制剂PD98059 10、20、40 μmol/L作用EC9706细胞24 h,利用免疫荧光和RT-PCR、Western-blot检测各种浓度处理前、后CAR表达水平的变化.结果 与对照组比较,10 μmol/L PD98059组CAR表达水平差异无统计学意义;20、40 μmol/L PD98059处理组 CAR表达水平显著提高(P<0.05),且呈浓度依赖性.结论 用一定浓度的抑制剂抑制Raf-MEK-ERK信号传导途径可上调食管癌EC9706细胞膜表面CAR的表达.     

人直肠癌组织匀浆上清液对树突状细胞内皮化的影响

目的:观察人直肠癌组织匀浆上清液对人外周血来源的树突状细胞(DC)内皮化的影响.方法:用ELISA方法检测直肠癌组织、癌旁组织匀浆上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的含量.采集健康男性志愿者外周血单个核细胞,常规方法培养,分别在第1、3、7、10和14天收集细胞,流式细胞仪动态监测CD1a、CD31和CD34的表达.分3组培养DC细胞,分别在第3和7天加入直肠癌组织匀浆上清液、癌旁组织匀浆仁清液及等体积生理盐水(对照组).用免疫细胞化学方法检测3组细胞的CD1a、CD31及CD34双阳性和血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达.结果:直肠癌组织匀浆上清液VEGF-A的含量[(0.837±0.345)μg/L]高于癌旁组织匀浆上清液[(o.236±0.216)μg/L](t=4.668,P<0.001).不同培养时间收集的DC表面分子CD1a、CD31和CD34的阳性表达率差异均有统计学意义(F分别为1 832.478、20.410和49.137,P均<0.001).第3和7天,癌及癌旁组织匀浆上清液组CD1a+ CD31+、CD1a+CD34+的表达率均高于对照组(F分别为342.21、544.70、107.09和189.72,P均<0.001);且癌及癌旁组织匀浆上清组第3天CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达均高于第7天(t分别为13.110、25.480、9.115和21.550,P均<0.001).癌[(6.3 ± 1.1)个/HPF]、癌旁[(6.0 ± 0.6)个/HPF]组织匀浆上清组vWF的表达均高于对照组[(0.8 ± 0.1)个/HPF](F=176.57,P<0.001,但前2组差异无统计学意义(P>0.05).结论:直肠癌组织匀浆上清液可促使未成熟DC发生内皮化.