STI571及As2O3诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：探讨比较STI571和As₂O₃诱导K562细胞凋亡及抑制其生长的可能机制，为进一步揭示慢性粒细胞白血病（CML）的发病机制及STI571和As₂O₃的临床应用提供理论依据。方法：采用细胞培养、台盼蓝染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、Western blot等方法研究STI571和As₂O₃分别对K562细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用，检测两种药物在诱导K562细胞凋亡的过程中某些凋亡相关蛋白的表达。结果：STI571和As₂O₃均可抑制K562细胞的增殖、诱导其凋亡。两种药物均可下调Bcl-XL的表达，并裂解caspase-3。As₂O₃作用浓度为2 μmol/L时其下调Bcl-XL的作用与1 μmol/L时没有明显的差别，但是其裂解caspase-3的作用较后者更加明显。结论：STI571作为凋亡诱导剂，可通过抑制Bcl-XL的表达从而激活caspase-3，诱导K562细胞凋亡；As₂O₃诱导K562细胞凋亡过程中伴有caspase-3的激活，但其作用并非完全是通过下调Bcl-XL蛋白水平而实现的。     

EC109细胞cDNA微矩阵基因芯片的建立及其方法学分析

目的:建立食管癌EC109细胞cDNA微矩阵基因芯片,并对其可靠性进行验证.方法:提取正常食管上皮细胞和EC109细胞的mRNA,逆转录得cDNA,再逆转录得cRNA,用Cy3-dUTP标记EC109细胞cRNA,用Cy5-dUTP标记正常食管上皮细胞cRNA,制备表达谱探针,利用该探针对EC109细胞与正常食管上皮细胞进行杂交.荧光扫描基因芯片,筛选表达谱.利用自身比较实验、重复实验和R2、一致率(CR)及假阳性率(FPR)等指标对该基因芯片系统进行方法学分析.结果:该基因芯片系统2次实验结果的符合率达85%,R2=0.7329,CR=100%.该系统的FPR为0.45%,扩增样品与无扩增样品的基因表达谱表现出较好的吻合性.结论:该芯片系统具有良好的稳定性、可靠性及低误差率等特点,可用于基因差异表达谱的分析.     

稳定表达野生型DNA聚合酶β的细胞系的建立

目的建立稳定表达野生型DNA聚合酶β的细胞系。方法将已构建的野生型DNA聚合酶β的真核表达载体用脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞,经G418筛选后得到稳定转染的细胞株,用免疫印记方法鉴定野生型DNA聚合酶β蛋白水平的表达。结果成功转染和筛选出表达外源性DNA聚合酶β基因的中国仓鼠卵巢细胞株,并检测到该基因蛋白水平的高表达。结论建立稳定表达DNA聚合酶β的细胞株,为进一步研究DNA聚合酶β高表达对细胞生物学特性的影响奠定基础。     

牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤能力的影响

目的:研究牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗肿瘤能力的影响.方法:正常小鼠骨髓来源单个核细胞通过粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)体外诱导生成DC,细胞培养第3天加入3种质量浓度的牛膝多糖(200、300和400 mg/L),第5天负载EC9706细胞制备的冻融抗原,流式细胞术检测DC表面CD86和CD11a的表达和成熟情况.提取培养第8天的DC和T淋巴细胞再混合培养3 d,流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖分化情况及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对EC9706细胞的杀伤活性.以上均以生理盐水培养作为对照组,各组均设4个复孔.结果:与生理盐水组相比,低中剂量牛膝多糖在有异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓来源DC的分化、成熟及表面标记CD86(F=9.788,P=0.012)、CD11a(F=10.220,P=0.016)的表达,增加DC致敏的T淋巴细胞增殖指数(F=9.807,P=0.012),DC诱导的CTL对EC9706细胞的杀伤活性增强(F=9.923,P=0.015),且在一定范围内存在量效关系.400 mg/L的牛膝多糖可使这些方面的效应明显降低.结论:适当质量浓度的牛膝多糖能够提高DC的抗原递呈能力,进而提高DC的抗肿瘤作用.     

地塞米松和1,25-(OH)2D3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌ECl细胞增殖及周期的影响.方法:分别用10-7 mol/L DEX与10-7 mol/L 1,25-(0H)2D3以及同种浓度2药联合处理ECl细胞48、72和96h,并设溶剂对照组.采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变...     

提高研究生助教的病理生理学实验教学效果探讨

研究生担任助教已成为解决师资缺乏和培养研究生教学实践能力的一条有效途径,通过强调病理生理学实验课的重要性,建立考核制度;建立听课制度,加深对病理生理学课程的理解及教学经验的积累;抓好预试及试讲环节;强调学生的团队协作及任课教师的团队协作意识等环节,以提高研究生助教的病理生理学实验课教学效果。     

枸杞多糖对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响

目的:观察枸杞多糖(LBP)对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响.方法:昆明小鼠40只,分成4组(n=10),腹腔注射200μL的H22肝腹水瘤细胞(10<,6>mL<'-1>),24 h后分别以5、10或20 mg/(kg·d)的LBP和等体积生理盐水灌胃,记录各组小鼠成瘤期和生存期.另取40只,随机分成4组(n=1...     

诱导分化的人食管癌细胞DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的改变

目的：了解诱导分化的食管癌细胞中DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的变化.方法：采用全反式维甲酸（ATRA）和二甲亚砜（DMSO）诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用原位杂交、碱基切除修复功能（BER）测定方法分别检测细胞po1B基因的表达和BER功能的变化.结果：ATRA、DMSO作用5 d后可以诱导Eca109细胞分化.随着Eca109细胞的分化,polβ基因的表达降低,BER恢复.结论：ATRA、DMSO可下调Eca109细胞polβ基因的表达,恢复BER活性使其趋向正常细胞分化.     

RT-PCR检测癌胚抗原基因转染树突状细胞的表达

目的 :通过向人DCs转染含人CEA真核表达质粒 ,使DCs特异性的表达和提呈CEA。方法 :RT -PCR检测转染人CEA真核表达质粒DCs的表达。结果 :转染CEA质粒的DCs,RT -PCR检测有一特异性扩增带。结论 :用脂质体能成功将人CEA真核表达质粒转入DCs并表达     

互隔交链孢酚通过PKA-CREB信号通路激活NIH3T3细胞中DNA聚合酶β表达

目的： 探讨互隔交链孢酚（AOH）诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3中DNA聚合酶β（DNA polβ）表达增高的分子信号通路。方法: ①15 μmol/L AOH作用NIH3T3细胞16 h,利用Western blotting 方法检测细胞中DNA polβ的表达,并利用磷酸化CREB抗体检测AOH作用后NIH3T3细胞中CREB信号分子是否被激活。②利用PKA-CREB信号通路特异性抑制剂H89预处理NIH3T3细胞1 h,再加入AOH作用,分别检测磷酸化CREB和DNA polβ表达的变化。结果: ①与溶剂对照组相比,AOH诱导NIH3T3细胞中DNA polβ表达明显增高,而且磷酸化CREB蛋白含量也明显增加,差异均显著。②用PKA特异性抑制剂H89预处理,可部分抑制NIH3T3细胞中CREB蛋白的磷酸化,并且降低了AOH引起的NIH3T3细胞中DNA polβ的表达增加。结论: PKA-CREB信号通路在AOH诱导的 NIH3T3细胞中DNA polβ表达起重要作用。