p38丝裂原活化蛋白激酶对H2O2预处理的适应性细胞保护作用的影响

3580不影响H2O2预处理的适应性细胞保护作用.50 μmol/L H2O2具有比H2O2预处理更强的激活p38的作用,H2O2预处理能明显地抑制50 μmol/LH2O2对p38的激活作用.结论 H2O2预处理抑制高浓度H2O2对p38的激活可能是其适应性细胞保护机制之一.     

扁果绞股蓝皂甙对兔脑基底动脉氧自由基损伤的保护作用

１０ｍＡ恒定直流电电解Ｋｒｅｂ＇ｓ液１ｍｉｎ，引起兔脑基底动脉收缩，灌注压明显增高，脑基底动脉内皮松驰因子（ＥＤＲＦ）释放量明显减少，血管壁组织丙二醛含量升高，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性降低。扁果绞股蓝皂甙２５、５０、１００μｇ·ｍｌ－１可浓度依赖性地抑制电解产生氧自由基诱发脑血管收缩作用，此外在１００μｇ·ｍｌ－１时具有保护内皮细胞释放ＥＤＲＦ的作用，并抑制血管壁丙二醛的升高，保护ＳＯＤ的活性。     

硫化氢对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,甲氮甲唑蓝法检测细胞增殖状况;Hoechst荧光染色观察细胞形态和核形态;碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞凋亡.结果 硫化氢可明显减少H2O2诱导的PC12细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数;200和400 μmol/L硫化氢均可降低200和400 μmol/L H2 O2作用24 h后对PC12细胞生长的抑制率,明显抑制200和400 μmol/L H2O2作用24 h后对PC12细胞凋亡的诱导作用.结论 硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用.     

甲基莲心碱增强阿霉素对骨肉瘤的抑制作用及机制初探

目的　研究甲基莲心碱 (Nifeine ,Nef)与化疗药物合用时 ,对骨肉瘤的化疗增敏作用及其机制。方法　用MTT法测定药物的细胞生长抑制率 ,PI染色流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。间接免疫荧光流式细胞术和S P免疫组化检测蛋白表达。结果　 5 ,10 μmol·L-1Nef能降低ADM对Saos 2的IC50 。 10 μmol·L-1Nef增加了ADM诱导的Saos 2凋亡 ,增强了细胞的Rb蛋白表达 ,使G1期细胞增多。结论　Nef能增加ADM对Saos 2的化疗敏感性 ,其机制可能与增强Saos 2的Rb蛋白表达和G1期阻断有关     

重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

目的 利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin，并对其进行生物学活性鉴定。方法 采用RT—PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA，将其克隆入pGEM—T Easy克隆载体中；经全自动序列分析仪测序确证后，将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450—1，构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒；将该重组质粒转化入大肠杆菌TG1中进行诱导表达，表达产物经SDS-PAGE鉴定；表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果 成功获得549bp 人 endostastin基因，测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白，此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。结论 人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达，并具有抗血管生成活性，为采用抗血管生成方法治疗恶性实体肿瘤的研究奠定了基础。     

重组人内皮抑素在大肠杆菌中表达及其生物学活性鉴定

目的　利用大肠杆菌原核表达系统表达重组人内皮抑素Endostatin ,并对其进行生物学活性鉴定。方法　采用RT-PCR方法从人胚肝中钓取人内皮抑素cDNA ,将其克隆入pGEM-TEasy克隆载体中;经全自动序列分析仪测序确证后,将人内皮抑素cDNA亚克隆入原核表达载体pWR450-1 ,构建含人内皮抑素cDNA的重组质粒;将该重组质粒转化入大肠杆菌TG₁中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定;表达产物初步纯化复性后以鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和小鼠伤口愈合实验对其进行生物学活性鉴定。结果　成功获得549bp人endostastin基因,测序证实序列正确。经IPTG诱导的重组原核表达质粒表达出重组人内皮抑素的融合蛋白,此蛋白在SDS-PAGE凝胶上显示出一条约75KD的阳性条带。重组人内皮抑素融合蛋白的初纯物在体外能抑制鸡胚尿囊膜血管生成及延长小鼠伤口愈合时间。结论　人内皮抑素融合蛋白在大肠杆菌原核表达系统中高水平表达,并具有抗血管生成活性,为采用抗血管生成方法治疗恶性实体肿瘤的研究奠定了基础     

三脑室球形扩大作为重型颅脑损伤脑积水分流术指征的探讨

目的　探讨三脑室球形扩大作为重型颅脑外伤后脑积水分流术指征的意义。方法　重型颅脑损伤意识障碍患者 ,定期行头颅计算机体层摄影 (CT)或磁共震 (MR)检查 ,若发现三脑室呈球形持续性扩大且横径介于 10～ 15mm者 ,即予脑室腹腔分流术 ,术前术后观察患者意识障碍恢复以及脑积水所引起相关临床症状改善情况 ,对正常压力患者术前术后均行腰椎灌注试验检测脑脊液流出阻力。结果　手术 2 7例 ,2 3例意识恢复 ,因脑积水所并发的症状或体征如减压窗向外膨出、视神经乳头水肿或萎缩、头疼呕吐以及长期低热等均得到有效的控制和改善 ,4例昏迷无改善。随访 7～ 2 2个月 ,9例可行轻体力工作 ,10例生活自理 ,4例生活靠别人帮助 ,4例仍昏迷 ;三脑室的改变及脑脊液动力学检查有统计学意义。结论　三脑室呈球形持续扩大作为重型颅脑外伤后脑积水分流术的手术指征是有意义的     

硫化氢对抗过氧化氢对PC12细胞的损伤作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对PC12细胞的损伤作用及有关机制。方法应用H2O2在PC12细胞建立氧化应激损伤的实验模型;应用甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。应用硫化氢钠(sodium hydrosulfide,NaHS)作为H2S的供体。结果200μmol和400μmolH2O2作用PC12细胞24h均使细胞的存活率明显降低及凋亡率显著增加,200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP明显降低及ROS生成显著增多。当NaHS与H2O2(200或400μmol/L)共同作用于PC12细胞时,NaHS(100～400μmol/L)浓度依赖性的阻断H2O2引起PC12细胞的存活率降低及细胞凋亡率增加。400μmolNaHS明显地阻断200μmolH2O2引起PC12细胞的MMP降低及ROS增多。结论H2S能明显地保护PC12细胞对抗H2O2引起的损伤,阻断MMP降低及ROS生成可能是H2S的细胞保护机制之一。     

甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱(Nef)逆转耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测长春新碱(VCR)的细胞毒性;PI染色流式细胞计数测定VCR诱导细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞P-gp和MRP的表达。结果:Nef(5、10μmol·L^-1)对人胃癌细胞(SGC7901)和耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)无显著毒性作用,VCR对敏感株SGC7901的IC₅₀为0.06mg·L^-1,而对MDR细胞株SGC7901/VCR的IC₅₀为2.32mg·L^-1,SGC7901/VCR较SGC7901对VCR耐药39倍,Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC₅₀从2.32mg·L^-1依次下降至0.34、0.12、0.05mg·L^-1,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能降低SGC7901/VCR细胞对VCR的凋亡抗性,其作用强于维拉帕米(VRP)。SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达P-gp、MRP,Nef(10μmol·L^-1)处理24h后,SGC7901/VCR细胞P-gp、MRP的表达明显低下。结论:Nef具有逆转耐长春新碱人胃癌细胞的MDR作用,其作用机理与下调P-pg和MRP表达有关。     

绞股蓝总皂甙对兔实验性动脉粥样硬化斑块形成的影响

为了探讨绞股蓝总皂甙防止动脉粥样硬化的作用及其机制，在新西兰兔食饵性动脉粥样硬化模型上观察了绞股蓝总皂甙治疗性给药对主动脉壁粥样硬化斑块形成及脂质过氧化的影响。发同绞股蓝总皂甙（１２０ｍｇ／ｄ）治疗四周能减少主动脉壁块形成，苏丹Ⅳ当色及形态计量学分析显示绞股蓝总皂甙治疗组的斑块面积较之高脂组减少了３７％；主动脉壁脂质过氧化程度也明显减轻，丙二醛含量仅为高脂组的６７％。此外，还观察到绞股蓝总皂甙在减