重组人血小板生成素对体外培养基质细胞的影响

本研究观察rhTPO有无促进骨髓纤维化的作用。用改良Dexter培养法进行体外不同浓度rhTPO作用下的基质细胞培养，在培养的不同时间用MTT法检测细胞增殖活性，用光学显微镜和扫描电子显微镜观察细胞形态变化，用细胞化学方法观察细胞ALP、PAS、AS—DNCE及纤维染色的变化，用免疫组织化学方法检测纤维连接蛋白，及层黏蛋白和Ⅳ型胶原的变化，用流式细胞术检测细胞表面抗原。结果表明：rhTPO可刺激基质细胞增殖，且随浓度增加而增高；细胞增殖活性随浓度增加而增强，但不随作用时间延长而增加；培养第3天，各组细胞明显贴壁，细胞呈椭圆形，第7天可见散在分布的梭形细胞，第12—14天，细胞排列呈一定的方向性，似漩涡状，细胞为长梭形，70％-80％的瓶底被细胞覆盖。第16—18天细胞覆盖达90％以上，细胞形态均为螺旋状排列的长梭形，类似成纤维细胞形态，瑞氏-姬姆萨染色显微镜下观察主要为成纤维细胞，还有极小部分巨噬细胞，内皮细胞和脂肪细胞，对照组与实验组之间无明显差异。培养14—42天的贴壁细胞，PAS显示为阳性，ALP染色和氯醋酸AS—D萘酚酯酶染色显示为弱阳性，对照组与实验组之间无明显差异；用Masson氏三色和Gomori染色法染色，胶原纤维和网状纤维显示均为阴性；纤维连接蛋白，层黏蛋白和Ⅳ型胶原染色在对照组与实验纽均显示为阳性，但实验组阳性均似稍强，这种阳性并没有随着培养时间的延长而增强；在扫描电镜下观察到随着培养时间延长，细胞表面的绒毛、纤维从无到有，细胞从单层到多层，并逐渐出现新生成的纤维细胞，但对照组与实验各组之间未见明显差异；rhTPO对CD34、CD45、CD105、CD106、CD166的表达无明显影响。结论：rhTPO不影响基质细胞的组织化学特性，纤维染色和扫描电镜观察也未发现有促进纤?     

慢性中性粒细胞性白血病转化为极低分化急性髓细胞白血病的观察1例报告并文献复习

慢性中性粒细胞白血病 (ＣＮＬ)为骨髓增殖性疾病 (ＭＰＤ) ,Ｔｕｏｈｙ于 192 0年首次报道 ,我国郑氏 1987年收集国内 13例 ,作了全面介绍。一般认为ＣＮＬ呈慢性过程 ,很少发生急变 ,我们观察到 1例ＣＮＬ发生极低分化急性髓细胞白血病 (ＡＭＬ Ｍ0 )变的病例 ,报告如下。1　临床资料女性 ,6 4岁。本院住院病人。患者因鼻出血就医 ,在就医前 2个月内 ,血中白细胞多次大于 2 0×10 9/Ｌ。首次入院时 ,体检见脾肋下 4ｃｍ ,余均阴性。血红蛋白 (Ｈｂ) 10 0～ 136ｇ/Ｌ ,白细胞 (15～ 2 0 4 )×10 9/Ｌ ,中性分叶 (0 76～ 0 94 ) ,血小板 …     

造血干细胞低温保存与复温操作规程（讨论稿）

The efficacy of cryopreservation of hematopoietic stem cells was influenced by a lot of factors, such as temperature, cooling rate, cell concentration, cryopreservative, thawing procedure, preserved period and measurement of cell functionalities. There were some differences in technology and methodology between research centers in the world, so the results from their publications could be poorly compared with each other and had a weak potency in evidence based medicine. Except for the established protocol for cryostorage of mobilized peripheral blood （MPB） hematopoietic stem cells/hematopoietic progenitor cells （HSC/HPC） and bone marrow （BM） HSC/HPC in Joint Accreditation Committee of International Stem Cell Transplantation （ISCT） Europe and European Bone Marrow Transplantation （EBMT) （JACIE） guidelines, there was no guideline in China and the world. With the help of our experiences (for many years in cryomedical field) and related literatures we have drawn up this protocol for cryopreservation and thawing of hematopoietic stem cells suited for petty bank in hospital. Any comments or revisions will be welcome.     

造血干细胞低温保存与临床应用

目的观察低温保存造血于细胞（hematopoietic stem cell,HSC）的效率及冻存HSC的临床应用情况。方法25例骨髓造血干细胞（bone marrow stem cell,BMSC）以10％二甲基亚砜加10％自体血浆为冷冻保护剂,采用程控降温液氮保存。21例外周血于细胞（peripheral blood stem cell,PBSC）采用CP1（cryopreservativesl）加4％人血白蛋白为冷冻保护剂,非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存。检测复温后单个核细胞（MNC）回收率、粒-单细胞集落形成单位（CFU—GM）回收率、台盼蓝拒染率（TBR）,并行细菌学培养,移植后观察输注反应及植入情况。结果BMSC冻存时间为1～3个月,中位时间1个月。复温后MNC回收率为（97．74±0．85）％,TBR为（96．74±0．91）％,CFU—GM回收率为（72．04±1．87）％。PBSC冻存时间为1～20个月,中位时间2个月。复温后MNC回收率为（97．75±1．34）％,TBR为（96．28±2．16）％。复温后46份标本细菌学培养均为阴性。实施自体骨髓造血干细胞移植（ABMSCT）25例,中性粒细胞绝对值（ANC）〉0．5×10^9／L的时间为（10．79±0．93）d,血小板计数（PLT）〉20×10^9／L的时间为（12．88±0．95）d。实施自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）21例,ANC〉0．5×10^9／L的时间为（10±1．14）d,PLT〉20×10^9／L的时间为（12．04±2．13）d。两组间MNC回收率和TBR比较均无显著性差异,移植后APBSCT组ANC〉0．5×10^9／L的时间早于ABMSCT组,有显著性差异（P〈0．05）,但PLT〉20×10^9／L的时间两组无显著差异。出院前所有患者复查骨髓均示增生活跃或明显活跃。BMSC输注出现的不良反应明显多于PBSC输注。结论采用联合冷冻保护剂、非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存来冻存HSC是切实可靠的,这种方法操作简便、价格低廉、安全有效;建议今后冻存BMSC前应去除红细胞。     

益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响

目的:观察益肺活血复方对人肺动脉内皮细胞微结构及内分泌功能的影响。方法:建立人肺动脉内皮细胞低氧高二氧化碳模型;制备益肺活血复方不同给药剂量(生药10、20、40 g/kg)的含药血清;在细胞培养液中共同孵育12 h后,利用透射电镜观察细胞微结构变化,采用放射免疫法测定各组细胞培养液上清中内皮素-1(ET-1)及前列环素(PGI2)的含量,采用硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量。结果:低氧高二氧化碳条件下,人肺动脉内皮细胞微结构损伤,而中、高剂量益肺活血复方组细胞微结构损伤减轻。各组细胞培养液或培养液上清中ET-1、NO、PGI2的含量比较,差异有统计学意义(F=121.870、60.040、49.060,P均<0.001);模型组ET-1含量高于空白对照组,NO、PGI2含量低于空白对照组(P均<0.01);中、高剂量益肺活血复方组ET-1含量低于模型组,NO和PGI2含量高于模型组(P均<0.01)。结论:低氧高二氧化碳导致人肺动脉内皮细胞微结构及功能障碍,而中、高剂量益肺活血复方可减轻其结构及功能损伤的程度。     

多药耐药基因作用的新发现

目的：观察被照射的小细胞肺癌细胞系在外照射前后其总RNA（核糖核酸）、MDR1 mRNA（多药耐药基因的信使核糖核酸）、药物敏感性和放射敏感性的变化,从而探讨多药耐药基因是否还有其他未被揭示的新作用。方法：采用GWGP80型远距离60Co治疗机对进入指数生长期的NCI-H446小细胞肺癌细胞系进行分次外照射。用Trizol分别提取未照射细胞（S-cell,Sc）和已完成全部外照射剂量的NCI-H446细胞（R-cell,Rc）的总RNA。采用RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）法来确定两组细胞MDR1 mRNA表达的高低。通过加入丝裂霉素和逆转剂维拉帕米后的干扰来分别观察外照射前后NCI-H446细胞系存活率的变化。然后对Sc和Rc再给予不同剂量的外照射,1周后计算它们各自的集落形成率（PE）和存活率（S）。结果：在相同细胞数和相同体积的条件下,未照射组和照射组细胞总RNA的浓度分别为25.9 mg/L和16.6 mg/L;未照射组细胞其MDR1 cDNA（多药耐药基因的逆转录脱氧核糖核酸）/β-actin cDNA为1.078,照射组为1.338。在相同浓度的化疗药丝裂霉素的干扰下,照射组细胞的存活率均明显高于未照射组（P〈0.01）;再加入逆转剂维拉帕米后,两组细胞的存活率则变化不大（P〉0.05）。在分别给予2 Gy和4 Gy的外照射后,照射组细胞的存活率（S）分别为（79.67±34.48）%和（23.73±8.62）%,而未照射组的分别为（51.24±11.88）%和（19.40±5.59）%,其差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：化疗药以外的损伤因素也可以使多药耐药基因表达增强,而这些损伤因素所引起的多药耐药基因的高表达均可以使细胞对后来的其他损伤因素产生耐受。因此,多药耐药基因应改称耐多种损伤基因似乎更能体现其内涵。     

Effect of Yifei Huoxue Granule (益肺活血颗粒) on the proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells upon exposure to chronic hypoxic conditions in vitro

Objective:To investigate the inhibitory effect of Yifei Huoxue Granule （益肺活血颗粒,YFHXG） on the hypoxia-induced proliferation of rat pulmonary artery smooth muscle cells（PASMCs） and its mechanism of decreasing pulmonary arterial pressure.Methods:Twenty male Sprague-Dawley（SD） rats were randomly divided into four groups:saline,and 0.66,3.30 and 16.50 g/kg of YFHXG groups,the saline and different concentrations of YFHXG were given twice daily for 7 days,respectively.Serum-pharmacology method was used in the preparation of YFHXG serum.Tissue block anchorage was employed in the primary culture of rat PASMCs.The PASMCs were randomly divided into normoxia group,hypoxia group,and hypoxia+YFHXG group （0.66,3.30 and 16.50 g/kg doses of YFHXG-treated serum groups,exposed to hypoxic condition）.PASMCs in normoxia and hypoxia group were cultured with saline serum,hypoxia+YFHXG groups were cultured with different concentrations of YFHXG serum.Cell viability was assessed with 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5- diphenyltetrazolium bromide（MTT） assay.Cell cycle was analyzed using flow cytometry.In addition,hypoxia inducible factor-1-alpha（HIF-1α） protein expression was evaluated by immunocytochemistry analysis,the concentration of intracellular reactive oxygen species（ROS） and Ca²⁺ were determined by laser scanning confocal microscopy（LSCM）.Results:MTT assay and flow cytometry showed that hypoxia could directly activate the proliferation of PASMCs,while YFHXG dose-dependently inhibited hypoxia-induced proliferation of rat PASMCs.Immunocytochemistry showed that hypoxia enhanced HIF-1αprotein expression,and LSCM showed that hypoxia significantly increased intracellular ROS and Ca²⁺,while YFHXG decreased the expression of HIF- 1αand attenuated the hypoxia-induced increase in intracellular concentration of ROS and Ca²⁺.Conclusions: YFHXG could inhibit hypoxia-induced proliferation of rat PASMCs,which may decrease pulmonary arterial pressure and vascular remodeling.The anti-hypoxia effect of YFHXG may be explained by its regulation of HIF-1α expression and of the levels of intracellular ROS and Ca²⁺.     

脐血移植治疗儿童恶性或非恶性疾病的死亡原因分析

目的 探讨脐带造血干细胞移植治疗儿童恶性或非恶性疾病后患儿的常见死亡原因.方法 对采用脐带造血干细胞移植治疗的28例儿童恶性或非恶性疾病患儿的临床资料进行回顾性分析.结果 移植后共死亡12例(42.9%),分别死于感染7例(肺部间质性肺炎3例、霉菌感染3例、病毒性肺炎1例),复发3例,急性移植物抗宿主病2例.结论 原发病复发和感染是脐带造血干细胞移植后患儿最常见的死亡原因.     

血友病丙1例报告

患者,男,42岁,吉林籍,因鼻衄3天于1981年9月23日入院。失血约1,000毫升,伴头晕,乏力。曾有皮下出血、鼻衄、齿龈出血史,1969年拔牙后出血不止,无关节肿胀史。家族中仅一外甥有经常出血史。体检除轻度贫血貌外,无其它阳性发现。束臂试验阴性。入院后输全血400毫升,用一般止血药,口服铁剂等,鼻衄渐止,血红蛋白升至12.9克%。     

成人脂肪来源间充质干细胞的分离培养与鉴定

1实验资料试剂均购自Sigma公司,荧光标记单抗购自BD公司,DMEM购自Gibco公司.成年女性48岁行吸脂术时用无菌针管从臀上方吸取深层脂肪组织20mL.在1h内将其移至离心管内,加入等量PBS缓冲液,充分振荡后低速离心800r/min×10min.反复冲洗3次后加入等量15g/L I型胶原酶.37℃水浴中充分振荡30min,再加入等量胎牛血清(FBS)中止.低速离心10min后弃去上清.将下层细胞用PBS悬浮后加入16mmol/L NH4Cl37℃水浴中10min以裂解红细胞.低速离心10min后再用PBS冲洗3次.最后将瞎胞用含100mL/L FBS+10g/L青霉素的DMEM悬浮后移入培养瓶中,37℃,50…