稳定阻断前列腺癌细胞中p65的shRNA基因序列的获得及蔓病毒载体的构建

目的 获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中核因子[NF-κB(p65)]表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3 3条针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补的单链DNA,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH Ⅰ)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19 bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR Ⅰ).将合成的序列插入空载体pSI H1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time聚合酶链反应(PCR)检测不同序列片段对p65的mRNA抑制效果,通过Western blot检测对p65蛋白表达的抑制效果.从而获得可以稳定高效抑制前列腺癌细胞中p65表达的shRNA序列.结果 设计的3条针对p65的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于p65(NM_021975)的1096～1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中p65的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株Lncap中p65表达的shRNA序列,并构建蔓病毒载体.     

非酒精性脂肪肝患者心脏舒张功能与肝功能的相关性

目的:采用彩色多普勒超声心动图方法了解NAFLD患者心脏舒张功能.分析肝功能与心脏舒张功能不全的相关性.方法:收集2005-07/2008-06我院非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者120例和健康对照者120例.检测肝功能ALT、AST、GGT、TBIL、1BIL、DBIL水平.采用B超对患者进行脂肪肝诊断,应用彩色多普勒超声心动图技术评价心脏的舒张功能,E/A比值小于1被定义为心脏舒张功能不全(diastolic cardiac dysfunction,DCD).结果:NAFLD患者DCD的发生率为26.7%,显著高于正常对照组的5.0%(P<0.01).随着脂肪肝的发展,患者的E/A的比值逐步降低(P<0.01).NAFLD患者中,合并DCD的患者ALT、AST、GGT及年龄明显高于舒张功能正常组(P<0.01).TBIL与DBIL在正常对照组与NAFLD重度及中度比较差异有统计学意义(均P<0.01):IBIL在正常对照组与各级NAFLD组两两比较,差异有统计学意义(P<0.01);Logistic回归分析显示,血清GGT水平是E/A比值的独立危险因素(OR=1.050,P<0.01).结论:NAFLD患者常伴有DCD,NAFLD并DCD患者中,ALT、AST、GGT显著升高.升高的血清GGT水平可能是DCD或冠心病新的危险因素.     

非酒精性脂肪性肝炎患者心脏舒张功能变化及其与肝功能的相关性研究

目的了解NASH患者心脏舒张功能。方法采用彩色多普勒超声心动图检查64例单纯性脂肪肝(SFL)、56例脂肪性肝炎(NASH)患者和120例正常对照者。应用E/A比值评价心脏的舒张功能。结果 NASH组心脏舒张功能不全(DCD)的发生率为44.6%,显著高于SFL组的10.9%及正常对照组的5.0%(P0.01);正常对照组、SFL组及NASH组E/A比值分别为1.3±0.2、1.3±0.2和1.0±0.3(P0.01);NASH组ALT、AST和GGT水平比SFL组及正常对照组显著升高(P0.01)。结论 NASH患者常伴有DCD和血清GGT显著升高。     

人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流和瞬时外向钾电流的调控作用

目的 研究参松养心胶囊的药物单体-人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica,L)和瞬时外向钾电流(Ito)的调控作用.方法 Langendroff灌流装置、胶原酶和蛋白酶混合急性分离大鼠心室肌细胞,用含40μmol/L的人参皂苷Rb1的细胞外液灌流心室肌细胞,每个细胞采用给药前后自身对照,标准的全细胞膜片钳技术记录Ica,L,Ito,所有数据均在细胞破膜后20min内完成,观察人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道电流的影响.结果 40 μmol/L的人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito均有抑制作用.在-10mV测试电压下,40 μmol/L的人参皂苷Rb1可使Ica,L的最大激活峰值电流密度从(- 11.423±-3.125)pA/pF下降至(-5.786±-2.976)pA/pF,抑制率为49.34％±9.78％(n=7,p＜0.05),电流密度-电压(I-V)曲线上移,但不改变激括电位、峰电位、反转电位以及曲线的形状;在+60mV测试电压下,40μ mol/L的人参皂苷Rb1 可使Itof的最大激活峰值电位从 35.342±3.126pA/pF下降至26.783±4.153pA/pF,抑制率为24.21％±8.35％ (n=8,p ＜0.05),I-V曲线下移.两通道电流经Boltemann方程拟合的稳态激活曲线给药前后无明显影响,但药物可使稳态失活增快以及失活后恢复减慢(n=7,p＜ 0.05),且人参皂苷Rb1主要抑制Ito的快速电流成分Itof(峰电位),对慢电流成分Itos(维持电位)无明显影响.结论 人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道的电流有显著抑制作用,但不改变Ica,L的通道动力学.     

血清AGR2、PGK1、MRP8/14表达情况与前列腺癌患者术后疗效评估及生存情况的相关性

目的:探讨血清前梯度蛋白2(AGR2)、磷酸甘油酸激酶1(PGK-1)、髓样相关蛋白8/14(MRP8/14)表达情况与前列腺癌(PCa)患者术后疗效评估及生存情况的相关性.方法:选取2016年1月至2017年1月收治的83例PCa患者为PCa组,另选取64例良性前列腺增生(BPH)患者为BPH组,50例健康男性为对照...     

下尿路腹腔镜手术——术式改进及手术技巧介绍

膀胱、前列腺等下尿路腹腔镜手术在体位、入路及操作技巧上有着相似之处,近年来在手术方式及操作技巧方面有不少的改进。在腹腔镜下前列腺癌根治术方面,有从经腹入路向经腹膜外入路发展的趋势,其手术技巧主要包括阴茎背深静脉的处理,膀胱颈位置的判断及离断,输精管壶腹部及精囊的游离,前列腺侧血管蒂的处理及膀胱颈尿道吻合等等,正确掌握操作技巧可减少术中出血,避免直肠损伤及输尿管损伤。在腹腔镜下膀胱全切除方面,盆腔淋巴结清扫对提高生存率的作用受到重视。切除膀胱的主要技巧与前列腺癌相似。形成新膀胱的方法以回肠拉出腹壁外形成新膀胱较为合理,腹腔镜下形成去带乙状结肠膀胱也是一种较好的选择。插入式输尿管吻合方法,具有手术操作简单,狭窄率低、有一定的抗反流作用等优点。     

46例Ph染色体阳性急性白血病临床分析

Ph染色体阳性急性白血病(Ph~+AL)在免疫学、细胞遗传学上都有特殊表现,其对治疗反应差,缓解率低,生存期短.为了更好地了解Ph~+AL的临床特点及寻找更有效的治疗方案,延长生存期,现将我院收治的46例Ph~+AL资料总结如下.     

重组人促红细胞生成素纯化工艺

目的:建立适合大规模生产重组人促红细胞生成素(rhEPO)的纯化工艺.方法:采用无血清培养分泌rhEPO工程细胞株,收集培养基上清,经过滤、染料亲和层析,离子交换层析、分子筛层析纯化.结果:所纯化的rhEPO纯度达99%以上,比活(包括体内、体外)为2.0×105IU/mg以上,活性回收率为40%,相对分子量为38000左右,等电点为3.7～4.2.结论:该纯化工艺简便、重复性好、产品质量高,适合大规模生产.     

我院2004～2006年口服降血糖药应用分析

目的:了解并分析我院口服降糖药的使用情况,为临床合理用药提供参考依据.方法:对我院2004-2006年口服降糖药的品种、销售金额、用药频度、日均费用等进行统计、分析.结果:口服降糖药品种有15种,销售金额平均增长率达14.14%.用药频度居前3位的依次是磺酰脲类、双胍类、中成药,前3类中用药频度最高的品种是格列吡嗪(5 mg)、二甲双胍肠溶片、消渴丸;偏低的是瑞格列奈、罗格列酮.日均费用偏高是阿卡波糖、瑞格列奈、罗格列酮,最低的是格列本脲.结论:我院口服降糖药应用日益趋于合理,但仍需加强管理.     

siRNA封闭IGF1R增加人肝癌细胞对丝裂霉素敏感性的研究

目的:探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor receptor,IGF1R)的短发夹环RNA质粒(pSUPER-siRNA-IGF1R)增加人肝癌细胞株SMMC7721对丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用及可能的机制。方法:设计并合成特异性靶向IGF1R的siRNA片段并构建pSUPER-siRNA-IGF1R表达质粒,将其转染SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株。丝裂霉素处理后,通过CCK-8法检测肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,Western印迹检测凋亡相关基因的变化。结果:丝裂霉素诱导细胞凋亡的作用明显增强,凋亡指数明显升高(P<0.05)。实验组野生型p53蛋白,bax蛋白表达比对照组明显上调,而bcl-2蛋白表达明显下降。结论:构建的pSUPER-siRNA-IGF1R具有RNA干扰作用,并能增强丝裂霉素诱导的细胞凋亡。