四环素调控的WT1基因表达系统在U937中的建立

目的：在白血病细胞系U937中建立四环素诱导的WT1基因表达系统。方法：运用脂质体将质粒pRevTet-On、pRevTRE-Luc和pRevTRE-WT1分别转染逆转录病毒的包装细胞PT67以产生逆转录病毒。将逆转录病毒RevTet-On感染U937细胞，经G418筛选，产生抗性细胞，用有限稀释法将U937/Tet-On抗性细胞单克隆化。14天后，克隆逐步形成，在显微镜下标记并移出。再将逆转录病毒RevTRE-Luc瞬时感染这些克隆，培养基中加入强力酶素(Dox)2mg/L或不加Dox，应用荧光素酶报告基因分析试剂盒检测荧光素酶的活性。挑选一株低背景和高诱导倍数的U937/Tet-On克隆，最后将逆转录病毒RevTRE-WT1感染这株克隆。结果：在U937中建立四环素调控的WT1基因表达系统。结论：建立逆转录病毒整合的U937细胞株，可用四环素及其衍生物精确调控WT1基因的表达，为研究WT1在白血病细胞系的功能提供一种有力的实验手段。     

母婴同室环境卫生学监测结果报告

母要同室是医院感染监控的重要部门，属医院感染的高危科室。对母要同室定期进行环境卫生学监测，可发现造成母要医院感染的危险因素。为此，我们于2000～2004年连续5年对母要同室环境进行卫生学监测。     

探讨综合性重症监护室医院感染的临床特点与护理干预

目的探讨综合性重症监护室(ICU)医院感染的临床特点和护理干预措施。方法对我院2002年1月~2003年12月综合性ICU医院感染患者233例进行回顾性分析。结果综合性ICU医院感染中以老年患者居多;感染部位以泌尿道、下呼吸道为主;基础疾病则为以恶性肿瘤、损伤性疾病及脑血管意外的感染率最高;并与侵袭性操作、患者的机体免疫力、抗菌药物和免疫抑制剂的使用有关。结论预防和降低综合性ICU医院感染的发生率可采用预见性护理,树立无菌观念;严格无菌操作,切断感染途径;早期发现感染征象;提高患者机体免疫力和合理使用抗菌药物。     

乙酸钙-鲍曼不动杆菌临床感染率与耐药性的7年监测

乙酸钙-鲍曼不动杆菌是医院感染的重要病原菌之一,广泛存在于周围环境中。近年研究表明,乙酸钙-鲍曼不动杆菌临床上的分离率与铜绿假单胞菌相当,并有逐年上升的趋势,已成为院内感染的重要条件致病菌[1],对多种抗菌药物有较高耐药性[1,2],为此,我们监测并统计分析了我院1998年至2004年七年间乙酸钙-鲍曼不动杆菌的临床感染情况,对14种抗菌药物的耐药性及耐药趋势,现总结报道如下。1材料与方法1.1基本资料所有资料均来自于1998年1月1日至2004年12月31日我院门诊和住院病人的送检标本,经临床微生物学实验室培养并经鉴定为乙酸钙-鲍曼不动杆菌感…     

成年大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞的分离培养及鉴定

目的:已证实来自嗅球及鼻腔嗅黏膜的嗅鞘细胞均能够促进中枢神经系统轴突再生.目前用于移植的嗅鞘细胞多来源于嗅球,因嗅黏膜在取材上更加快捷、安全且易于临床应用,本实验拟进一步验证改良Nash差速贴壁法分离培养鼠鼻腔嗅黏膜细胞后,获取嗅鞘细胞的情况.方法:实验于2007-01/09在新疆医科大学第一附属医院实验动物科学研究部完成.①动物:清洁级SD大鼠4只,由新疆医科大学动物实验中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:大鼠麻醉后断头,去除额骨和鼻骨,完整取下包含嗅黏膜和骨质的鼻中隔,中性蛋白酶Ⅱ 胰酶联合消化,离心去上清,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12完全培养液,种植于无多聚赖氨酸包被处理的培养皿,18 h后将培养液吸出过滤,种植于另一个无多聚赖氨酸包被处理的培养皿,继续培养36 h后,加入适量培养液与原培养液混匀,重新种植于包被多聚赖氨酸的24孔细胞培养板.③实验评估:倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,于体外培养第5,7,10,14天进行免疫细胞化学鉴定.通过活细胞镜下观察和免疫细胞化学染色相结合,计算嗅鞘细胞纯度.结果:①细胞形态学观察:培养的嗅鞘细胞主要呈双极(梭形)、三极及扁圆形,其中以双极(梭形)细胞为主.②免疫细胞化学特征:大部分双极(梭形)、三级细胞呈胶质纤维酸性蛋白或神经生长因子受体p-75免疫反应阳性,少量扁圆细胞也呈胶质纤维酸性蛋白或神经生长因子受体p-75阳性.③嗅鞘细胞数量与纯度:随着培养时间的延长,嗅鞘细胞数量逐渐增多,14 d左右可达平台期.培养6～10 d的细胞纯度约为80%.结论:采用改良Nash差速贴壁法成功分离培养出嗅黏膜嗅鞘细胞,简单实用,嗅鞘细胞纯度较高.     

血液病患者院内感染危险因素分析及护理对策

目的探讨血液病患者医院感染发生原因以及应采取的护理对策.方法采用前瞻性监测结合回顾性调查的方法,对近2年来住院治疗的660例血液病患者进行医院感染危险因素分析.结果血液病患者医院感染发生率为14.5%,明显高于我院平均医院感染发生率（3.2%）.其特点为：反复住院患者多,重复感染患者多;多数医院感染发生在入院20～40 d内,以呼吸道感染和血液感染为多见;化疗、免疫抑制剂和抗菌药物的使用,导致机体抵抗力下降而诱发感染,其中以白血病、恶性淋巴瘤发生率最高.结论血液病患者医院感染发生率高,应重视多重危险因素的影响,重视改善环境卫生、无菌操作、消毒隔离等防护措施.     

C57胎鼠、乳鼠及成年小鼠心室肌细胞分离、培养及鉴定

背景:培养的心肌细胞被广泛应用于心肌细胞的生理特性、毒性实验、基因工程、疾病模型和药物筛选等方面的研究。获得纯度较高活性良好的品系小鼠心肌细胞是研究的关键前提。目的:分离和培养C57小鼠胎鼠、乳鼠及成年小鼠心室肌细胞。方法:应用机械切碎心室肌后,胰蛋白酶消化不同发育阶段的C57小鼠心室肌细胞,差速贴壁1h纯化心室肌细胞,锥虫蓝染色判定心肌细胞活力,体外分别培养48～72h后分别行倒置显微镜、扫描及透射电镜观察细胞形态,微电极阵列评价细胞电生理指标,免疫组化鉴定。结果与结论:经3～6次消化后,心室组织消化完全,即刻细胞存活率大于85%。倒置显微镜下观察,细胞呈梭形、多角形。12h有少部分细胞搏动,48h细胞交织成网,搏动呈同步性,搏动频率30～90次/min。说明用胰蛋白酶组织消化法可以成功地分离、培养,并获得形态、活力良好的胎鼠、乳鼠及成年C57小鼠心室肌细胞。     

BMP-2体外诱导OPG-/-小鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

目的 探讨骨形成蛋白-2(BMP-2)对OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性.方法 取OPG-/-小鼠股骨,分离骨髓基质细胞进行体外培养,传至P1代时改用条件培养基,在15％FBS培养条件下培养基中分别加入浓度为0.3 μg、0.2 μg、0.1 μg、0.05 μg、0μg的BMP-2,并依次记为A、B、C、D和E组.细胞培养至1、3、5、7d,PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)、钙试剂盒测定细胞钙含量、酶联免疫法测定细胞上清中抗酒石酸酸性膦酸酶5b(TRACP5b)的表达,检测不同浓度BMP-2活性多肽体外诱导成骨的能力.结果 ALP活性和钙含量检测显示,A组和B组较其他组增加明显(P＜0.05),但A、B组间比较差异无统计学意义( P＞0.05).TRACP5b检测显示,A、B、C组第3、5和7日TRACP5b表达均低于D、E组(P＜0.05),但A和B组差异不显著(P＞0.05).结论 BMP-2活性多肽能有效地促进OPG-/-小鼠BMSCs向成骨方向分化,其诱导作用存在剂量依赖关系,最佳诱导剂量为0.2 μg/ml.     

类风湿关节炎合并肾损害六例临床分析

<正>类风湿关节炎(RA)是一种累及关节滑膜组织的慢性炎症性疾病,目前病因不明,临床较常见。该病合并肾损害报道并不少见。本文收集我院收治的6例RA合并肾损害患者,均进行肾活检,进行了回顾性分析研究,现总结如下。1对象与方法1.1研究对象:收集2006年1月至2010年11月我院风湿科住院RA患者6例,所有病例均符合1987年美国风湿病协会制定的RA标准。男性1例,女性5例,年龄26～57岁,平