实时荧光定量聚合酶链反应检测人锌指蛋白23方法的构建

目的建立检测人锌指蛋白23(human zinc finger 23,ZNF23)的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术。方法采用Primer Express Versions 3.0设计引物及TaqMan探针,检测ZNF23基因。将扩增的ZNF23基因片段纯化后与pMD19-T载体连接,克隆构建含ZNF23基因片段的重组质粒,作为定量检测ZNF23基因表达的标准品。结果 PCR扩增产物经测序分析证实为ZNF23特异性片段。本法灵敏度为650 copies/μL,线性范围为(6.50×102)-(6.50×107)copies/μL,相关系数R2为0.999,扩增效率E为97.28%,批间变异系数为0.78%～7.53%。结论成功建立了检测人ZNF23的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、通量高。     

2014年晴隆县布鲁氏杆菌病监测结果分析

目的 分析2014年晴隆县人间布鲁氏杆菌病(简称布病)监测结果,了解人间布病感染状况,为布病防控措施提供科学依据,也为晴隆县的草地畜牧业发展提供技术支持.方法 将晴隆县境内全部养殖场(指养羊的养殖场)、养羊农户中与羊密切接触及管理的人群列为布病血清学抗体监测对象,采用虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)监测布病抗体.结果 共监测出布病抗体阳性人群118例,阳性率为4.85％,118例布病抗体阳性人群分布在全县13个乡(镇)中的70个养殖场、养羊农户中,抗体阳性人员最多的养殖场高达11人,监测到2例以下抗体阳性的养殖场及养羊农户达63个,占90％.结论 晴隆县人间布病抗体监测阳性率较高,呈集中暴发和点多面广的流行态势,结合畜牧部门在畜(羊)间监测出点多面广的羊群布病抗体阳性结果,说明晴隆县农村养殖场和养羊农户的羊群及其环境中已广泛存在传染源,人间布病防控形势不容乐观.     

鉴定清道夫受体BI基因敲除突变小鼠的新方法

目的建立一种清道夫受体BI(SR-BI)基因敲除突变小鼠基因型的鉴定方法。方法参照碱基淬灭探针技术原理,设计鉴定野生型和突变型SR-BI基因的引物探针。反应体系经PCR扩增后,利用融解曲线功能判断小鼠基因型。结果新方法可在1h内完成基因型分析。野生型和突变型纯合子小鼠分别在(53.25±0.81)℃及(62.25±0.31)℃处出现单个融解谷;而杂合子小鼠在两处均出现融解谷。结论新方法简单、快速、准确,适用于鉴别SR-BI基因敲除突变小鼠的基因型。     

载脂蛋白M在大鼠体内清除及分布

目的研究载脂蛋白M（apoM）在大鼠体内的清除及分布。方法用^125I标记重组apoM,注入大鼠尾静脉,于不同时间点取血及各个器官,研究apoM在大鼠体内的清除和分布。结果^125I-apoM的标记率为98％,大鼠血液中清除过程曲线符合二房室开放型模型,分布相半衰期T1/2（α）=0．485h,消除相半衰期T1／2（β）：9．680h,分数清除率（FCR）=11．960／h。apoM在大鼠组织和器官的分布用每克组织放射性表示,胃分布最高,小肠、肝、肺、肾分布次之,脑分布最低,且每克组织放射性随时间增加逐渐降低。将每克组织放射性换算成总组织放射性时,小肠最高,胃和肝次之。结论ApoM在大鼠血液中清除过程曲线符合二房室开放型模型,在血液中FCR=11．960／h。^125I-apoM主要在胃、小肠和肝被结合摄取,小肠、胃和肝可能存在结合及摄取^125I-apoM的结合位点,胃、小肠及肝脏可能是参与apoM代谢的重要器官,存在着apoM的受体。     

载脂蛋白M在结直肠癌组织中的表达及其临床病理相关性

目的探讨载脂蛋白M（apoM）在结直肠癌组织中表达水平的变化及其临床相关性。方法采用荧光定量PCR检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织中apoM的mRNA表达：采用免疫组织化学方法检测7例正常肠黏膜、6例肠炎组织、10例肠息肉、20例结直肠癌及其癌旁组织中apoM的蛋白表达水平。结果apoMmRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中均有表达．前者相对表达量显著低于后者（0．05±0．01比0．19±0．05,P〈0．05）。无淋巴结转移者apoMmRNA表达水平显著低于有淋巴结转移者（P〈0．01）。结直肠癌组织中apoM蛋白表达中位分值为5．50．显著低于癌旁组织（10．5,P〈0．05）、肠炎组织（9．75,P〈0．05）、肠息肉组织（11．0,P〈0．01）及正常黏膜组织（10．5,P〈0．05）。未见结肠癌组织中apoM蛋白水平与患者临床病理特征有关（P〉0．05）。结论载脂蛋白apoM在肠癌组织中的mRNA及蛋白水平较正常组织及良性病变组织显著降低。结直肠癌组织中apoMmRNA表达水平与淋巴结转移有关。     

共刺激分子B7-H3 mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的研究B7家族的新成员B7-H3mRNA和B7-H3蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用荧光实时定量逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测38例胃癌患者癌组织及其邻近正常组织B7-H3mRNA的表达；免疫组织化学Elivision法检测B7．H3蛋白在胃癌组织中的表达。结果B7-H3mRNA在胃癌组织及其邻近正常组织中均有表达，其在胃癌组织中的表达明显低于邻近正常组织。B7-H3mRNA的表达与胃癌患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级和浸润深度无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白在胃癌组织中表达的阳性率为39、5％，其与患者性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、淋巴结转移和浸润深度也无关（P〉0.05）。B7-H3蛋白表达随肿瘤临床分期的递增而降低，各组间差异有统计学意义（P=0.022）；病理分级各组间差异也有统计学意义（P=0.039）。Kaplan—Meier生存分析显示，B7-H3阳性表达组无病生存期明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.009），B7-H3阳性表达组总生存期亦明显优于B7-H3阴性表达组（P=0.010）。结论B7-H3表达与胃癌预后有关，可以作为反映患者免疫状态和预后的一个新的指标．为制定临床治疗方案提供依据。     

组织因子在食管鳞癌中的表达及其临床意义

食管鳞癌是常见的上消化道恶性肿瘤,其死亡率高居恶性肿瘤死亡率第2位.食管鳞癌的治疗目前主要有外科、放射,药物及免疫治疗等.对于Ⅱ期以上的病例,单一的治疗方案往往效果不佳,故多采用综合治疗.组织因子又称凝血因子Ⅲ.是一相对分子质量为47×103的单链跨膜糖蛋白.由263个氨基酸残基组成,包括胞外区、跨膜区、胞内区三个结构域[1].     

重度子痫前期剖宫产产妇围术期液体治疗后的血液动力学变化

目的 研究重度子痫前期剖宫产产妇围术期中心静脉压（CVP）和动脉血压监测（ART）等血液动力学的变化,探讨围术期液体治疗的合理性和安全性.方法 选择重度子痫前期择期行剖宫产术的产妇40例,将其分为晶体组和胶体组,每组各20例,麻醉前给予晶体组乳酸林格液,给予胶体组6％羟乙基淀粉酶,均给予麻醉下行剖宫产术,监测麻醉前后两组患者的CVP值、ART及生命体征.结果 麻醉前,两组的CVP与麻醉后5、10 min时相比,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）;麻醉后10 min,胶体组CVP高于晶体组[（4.7±0.5）mm Hg比（5.3±0.5）mm Hg]（P＜ 0.05）;胶体组的ART高于晶体组[（115.0±13.5）mm Hg比（100.0±10.8）mm Hg,P＜0.05].结论 重度子痫前期剖宫产妇围术期,容量负荷的变化主要是麻醉后至胎儿娩出前,围术期液体治疗可以保障术中循环稳定,胶体液的应用是安全有效的,可适当应用于子痫前期患者,对围术期容量负荷的影响不大,对维持重度子痫前期患者围术期循环稳定有积极作用.