鉴定载脂蛋白M基因敲除小鼠的实时荧光定量PCR法的建立

目的建立新型的载脂蛋白M(apolipoprotein M,apo M)基因敲除小鼠的鉴定方法。方法根据荧光PCR原理,分别设计野生型和敲除型apo M基因的引物和探针,并通过6-羧基荧光素(FAM)和3H-吲哚菁染料(CY5)双荧光通道的扩增曲线判断小鼠的基因型。结果野生型小鼠仅在FAM通道有扩增曲线,敲除型小鼠仅在CY5通道有扩增曲线,杂合型小鼠则在FAM及CY5通道均有扩增曲线。结论建立的实时荧光定量PCR法经济、快速、简单、准确、易判断,适用于小鼠apo M基因型的鉴定。     

急性髓系白血病患者miRNA-181b表达特点及预后意义

目的 探讨微小RNA-181b(miR-181b)在急性髓性白血病(AML)中的表达特点及预后意义.方法 采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测158例初诊AML患者及20例健康供者骨髓单个核细胞中miR-181b的表达水平.同时采用基因组DNA-PCR结合测序方法检测158例AML患者核磷蛋白1(NPM1)基因第12号外显子突变和fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因内部串联重复(ITD)突变(FLT3-ITD).结果 AML中miR-181b表达水平较正常对照组显著升高(Z =-2.386,P=0.017),各FAB亚型中M1、M5及M6型miR-181b表达水平较对照组明显升高(P＜0.05).miR-181b高表达与低血红蛋白、高乳酸脱氢酶及NPMI野生型有关.miR-181b高表达完全缓解率较低(x2 =7.717,P=0.005)、总生存期较短(P＜0.05).结论 miR-181b在AML某些亚型中高表达,miR-181b高表达是AML患者不利的预后因素.     

实时荧光定量PCR检测人apoM方法的构建

目的 建立检测人载脂蛋白M(apoM)的实时荧光定量PCR技术.方法 采用Primer Express Versions 2.0设计引物及TaqMan探针,检测apoM基因.将扩增的apoM基因片段纯化后与pMD19-T载体连接,克隆构建含apoM基因片段的重组质粒,作为定量检测apoM基因表达的标准品.结果 PCR扩增产物经测序分析证实为apoM特异性片段.本法灵敏度为40 copies/μl,线性范围为4.00×10~1～4.00×10~8copies/μl,相关系数为1.000,扩增效率E为90.5%,批间变异系数为6.38%～17.9%.结论 成功建立了检测人apoM的实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好,灵敏度高.     

Real-time PCR法研究基质金属蛋白酶10在非小细胞肺癌中的表达

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMP)介导的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)及基膜的降解, 是肺癌细胞侵袭和转移的必要步骤.MMP-10是MMP家族中的重要成员之一,本文作者旨在使用Real-time PCR法研究MMP-10 mRNA在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及其癌旁正常组织中的表达及其与性别、年龄、分期、分级、肿瘤大小、淋巴结转移及病理类型之间的关系.     

雌激素通过雌激素受体上调载脂蛋白M表达

目的 研究雌激素对载脂蛋白M的影响.方法 采用RT-PCR法检测不同浓度、不同作用时间雌激素处理HepG2细胞以及雌激素和雌激素受体拮抗剂共同处理后,HepG2细胞载脂蛋白M mRNA的表达:将SD雌性大鼠分为5组:去卵巢组(0VX)；假手术组(Sham)；去卵巢+苯甲酸雌二醇(EB)组(OVX+EB)；正常大鼠组(对照组)；正常大鼠+EB组(EB组),术后给予不同剂量的EB.常规生化检测血液标本中血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL),RT-PCR和Western印迹检测鼠apoM表达.结果 雌激素上调HepG2细胞载脂蛋白M的表达,这种效应呈剂量和时间依赖性,可以被ER拮抗剂抑制.术后第1个月,OVX+EB组和EB组大鼠apoM mRNA水平以及血清apoM 、HDL、总胆固醇、甘油三酯和LDL水平分别较OVX组和对照组大鼠有显著性升高(P＜0.05).结论 雌激素通过ER途径上调载脂蛋白M的表达.     

沙库巴曲缬沙坦联合马来酸左旋氨氯地平治疗原发性高血压伴稳定型心绞痛的效果

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦联合马来酸左旋氨氯地平治疗原发性高血压伴稳定型心绞痛（EH+SAP）的效果。方法 选取2021年5月～2023年4月新疆生产建设兵团第一师医院EH+SAP患者128例,采用随机数字表法分为两组,各64例。两组均给予常规治疗,对照组采用奥美沙坦联合马来酸左旋氨氯地平治疗,观察组采用沙库巴曲缬沙坦联合马来酸左旋氨氯地平治疗。两组均连续治疗8周后进行疗效评估。比较两组治疗前、治疗8周血压、心绞痛情况、硝酸甘油用量变化,并检测中性粒细胞/高密度脂蛋白胆固醇比值（NHR）、心血管调节肽（salusin-β）水平。分析治疗8周NHR、salusin-β与血压、心绞痛情况、硝酸甘油用量的关系。统计两组治疗期间不良反应发生率。结果 观察组治疗总有效率高于对照组[92.19%(59/64)比78.13%(50/64),P<0.05];治疗8周后两组24 h平均收缩压（24 h SBP）[(124.26±8.58)mmHg比（129.15±9.04）mm Hg]、24 h平均舒张压（24 h DBP）[(84.46±6.21)mmHg比（88.12±6.77）mmHg]、收缩...     

耐药人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶的表达及意义

目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因在人乳腺癌细胞株(MCF-7)和耐阿霉素人乳腺癌细胞株(MCF-7/ADR)中的表达及意义。方法:采用MTT法检测阿霉素对MCF-7/ADR和MCF-7的半数抑制浓度(IC50),用不同浓度的GCS抑制剂PDMP预处理MCF-7/ADR不同时间后检测IC50;运用流式细胞术检测MCF-7及PDMP预处理MCF-7/ADR前、后GCS蛋白的表达水平;应用实时荧光定量PCR法检测MCF-7及PDMP作用前、后MCF-7/ADR中GCS基因的表达(GCSN)水平。结果:阿霉素对MCF-7/ADR和MCF-7的IC50分别为(18.95±0.54)、(0.84±0.07)μg·mL-1;MCF-7/ADR对MCF-7的耐药倍数为22.69倍,PDMP作用后阿霉素对MCF-7/ADR的IC50下降至(5.63±0.58)μg·mL-1。MCF-7/ADR中GCS蛋白及GCSN的表达均高于MCF-7(P<0.01),PDMP使MCF-7/ADR中GCSN表达水平从0.0048±0.0017下降至0.0021±0.0004。结论:GCS可能参与肿瘤耐药的发生过程,并在MCF-7/ADR多药耐药中起重要作用。     

救救你的唠叨

生活中,不少男人或是女人都有爱唠叨的习惯。男人唠叨妻子做的饭不熟、菜不香等等,当然也有不满对妻管束的种种微词。女人唠叨的话题就多了,包括吃、穿、用、行以及孩子、老人、感情等等都能成为唠叨的素材。 有人说,唠叨是需要、唠叨是爱,其实,翻来覆去的唠叨不仅让人烦,而且唠唠叨叨还是一种病态。 首先,唠叨是一个人自控能力差的表现,期望以自己的唠叨,达到心想事成的目的,这是很幼稚的想法。如果自控能力强一些,换一种方法解决问题,不仅事半功倍,还有助于增强亲情关系。 其次,唠叨还表现出一个人不太良好的素质。文化…     

ShineRoar探针技术检测单核苷酸多态性

目的建立一种低成本、高效率、操作简便的单核苷酸多态性（SNP）检测技术。方法采用自行设计的“ShineRoar探针”，结合融解曲线技术检测目的基因SNP。并根据其工作原理分别对肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNFRⅡ）和载脂蛋白M（apoM）的基因多态性进行检测；同时用DNA测序技术鉴定ShineRoar探针技术的准确性。结果融解曲线分析结果显示，某一基因的野生型及突变型纯合子分别在2个不同的融解温度出现融解谷。TNFRⅡ基因第6外显子196位突变（ATG→AGG）所产生的T和G等位基因的融解温度分别为（52．84±0．75）℃和（58．38±0．61）℃；apoM T-778C突变所产生的T和C等位基因的融解温度分别为（42．55±0．73）℃和（49．19±0．57）℃。一致性Kappa检验显示ShineRoar探针技术与DNA测序技术的SNP检测结果一致（Kappa=1，P=0．000）。结论ShineRoar探针技术简单、快速、准确，适用于大批量基因分型的研究。