SEQUENCE ANALYSIS OF THE NS5 REGION OF GBV-C／HGV AND DETECTION OF THE VIRUS BY REVERSE TRANSCRIPTASE PCR

GBV-C/HGV is a newly identified virus associated with human hepatitis.In this study,the nucleotide sequences of the partial NS5 gene of GBV-C/HGV derived from sera of 8 Chinese patients were determined.The nucleotide homology among the 8 isolates were 92% on average.On the basis of sequence analysis,two sets of oligonucleotide primers derived from highly conserved region of GBV-C/HGV NS5 gene were designed to establish both sensitive and specific nested PCR for detection of GBV-C/HGV RNA.253 Chinese patients were examined for the virus RNA.GBV-C/HGV RNA positive rates in patients infected with HBV,HCV and patients with chronic non-B,non-C hepatitis were 18.4%,19.8% and 8.9% respectively.This result suggested that HBV,HCV and GBV-C/HGV shared the same transmission risk factors.8 patients with GBV-C/HGV and HCV coinfection were retrospectively observed for the response to interferon.Coinfection with GBV/HGV did not negatively influence the responsiveness of HCV,and GBV-C/HGV was sensitive to interferon to a certain degree.     

非典型流行性出血热的临床分析

本文报道88例非典型出血热,并与83例典型出血热对比。结果表明临床上非典型出血热并非少见。根据它的临床表现不典型出血热可分为4种类型。虽然未发现有诊断价值的特征性临床表现,但是非典型出血热轻型病例显著多于典型组,其病死率低,出血、肾脏损害、低血压休克少见,与斯堪的那维亚轻型出血热相似。检测出血热特异性抗体对避免误诊是有价值的。     

2a型丙型肝炎病毒非结构基因5区(NS5)全长克隆的构建

目的 构建2a型丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因(NS)5区全长克隆质粒。方法 用聚合酶链反应(PCR)从HCV NS5A和NS5B质粒中扩增出NS5A和NS5BPCR片段，再采用融合PCR技术扩增出全长NS5的cDNA片段，克隆后RFLP和序列分析鉴定重组子。结果 融合PCR获得约2．8kb全长NS5序列，同源性分析表明：与HC-J6的核苷酸同源性为91．2％，推导的氨基酸同源性为95．5％。结论 利用融合PCR技术简单方便，利用该技术获得了2a型HCV NS5全长序列，构建了全长基因克隆质粒。     

SNaPshot技术检测乙型肝炎病毒基因组P基因区单核苷酸多态性的研究

目的　建立SNaPshot技术对乙型肝炎病毒(HBV)基因组P基因区单核苷酸多态性(SNP)的分析。方法　针对HBVYMDD变异位置的上、下游设计引物,用PCR方法进行DNA扩增,产物直接测序或克隆测序。再针对变异位点74 1A G变异型(YVDD)和74 3G T变异型(YIDD)的紧邻上游设计高度特异的SNaPshot检测引物,用不同荧光标记的ddNTP对PCR产物进行一步延伸,然后置于310型DNA测序仪上观察荧光信号,可直观的检测上述两位点的单核苷酸多态性。结果　在拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者中,经测序证实P基因区不仅存在74 1、74 3位点的变异,还存在5 14C A、5 2 3C A、5 6 2T A、6 6 7C A等位点的变异。对已证实P基因区变异的13例患者血清用SNaPshot技术检测YMDD结果与测序结果完全相同,显示SNaPshot技术高度的特异性。结论　SNaPshot技术检测HBV基因组SNPs具有快速、简便、准确特异的特点,还检测到野生株和变异株的混合存在。     

注射用免疫核糖核酸II的免疫调节及对顺铂的增效减毒作用

 目的 研究干扰素刺激基因因子3（ISGF3）在干扰素α（IFN-α）抑制乙型肝炎病毒（HBV）复制机制中的作用。 方法 应用定量PCR技术检测IFN-α处理前后人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞上清HBV DNA含量，DNA印迹法检测IFN-α处理前后HepG2.2.15细胞内HBV复制中间体的变化，蛋白质印迹法检测IFN-α处理前后HepG2和HepG2.2.15细胞中ISGF3的3个组分即信号转导和转录活化因子（STAT）1、磷酸化STAT2和ISGF3γ以及双链RNA依赖蛋白激酶(PKR)蛋白质表达水平的改变。用酪氨酸酶抑制剂染料木黄酮抑制IFN-α作用后，再次进行上述检测。 结果 IFN-α处理后，HepG2.2.15细胞上清HBV DNA和细胞内HBV复制中间体减少，HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达水平均升高。加染料木黄酮抑制IFN-α后，HepG2.2.15细胞上清HBV DNA和复制中间体无减少，而HepG2和HepG2.2.15细胞中STAT1、磷酸化STAT2、ISGF3γ和PKR蛋白质表达均减少。 结论 ISGF3是IFN-α抑制HBV复制的关键因子。     

ISGF3:IFN-α抗乙型肝炎病毒信号转导机制的重要因子

目的　研究干扰素 α(IFN α)抗乙型肝炎病毒(HBV)的信号转导机制。方法　用定量聚合酶链反应(PCR)检测IFNα2b处理前、后的HepG2 2 15细胞上清的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测IFNα2b处理后不同时点的HepG2 2 15细胞和其母源细胞HepG2 细胞内信号转导和转录活化因子1(STAT1)、STAT2、干扰素刺激基因因子3γ(ISGF3γ)、2′5′寡腺苷酸合成酶(2′5′OAS)、RAN依赖蛋白激酶(PKR)的mRNA表达水平。WesternBlot检测ISGF3γ的蛋白质表达水平。并用染料木黄酮阻断IFNα2b信号转导后再次检测上述指标。结果　IFNα2b处理8h后,HepG2 2 15细胞上清HBVDNA平均减少0 72log 10copies ml,而加染料木黄酮后则无减少。IFNα2b处理后,HepG2 和HepG2 2 15细胞中STAT1、STAT2、ISGF3γ、2′5′OAS和PKRmRNA水平明显升高;加染料木黄酮后前3个因子mRNA水平仍然能检测到,而2′5′OAS和PKRmRNA则受到抑制。WesternBlot检测也提示IFNα2b处理后ISGF3γ蛋白质水平升高,加染料木黄酮后其表达受到抑制。结论　Janus酪氨酸激酶(JAK) STAT途径在IFN α抗HBV中发挥主要作用,而ISGF3是该途径的一个重要因子。     

环孢素A促进HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒核心蛋白入核的研究

目的观察磷酸脂酶抑制剂环孢素A（CSA）对HBcAg表达和定位的影响，了解HBV生活的周期。方法以30μg/ml的CSA处理HepG2．2．15细胞2d或4d；共聚集显微镜观察细胞内HBcAg和HBsAg亚细胞定位；TUNEL方法检测细胞凋亡。结果对照组HepG2．2．15细胞中HBcAg主要定位于胞质。CSA处理2d后可使胞质中HBcAg和HBsAg水平下降，细胞核内HBcAg水平升高，可见约5％细胞发生凋亡。CSA处理4d后细胞核内HBcAg水平进一步提高，约25％细胞核内表达强度明显高于胞质，并约有30％细胞发生凋亡。结论CSA可促使HepG2．2．15细胞内HBcAg进入细胞核。HBcAg的核内表达定位增强可能与蛋白磷酸化水平增高，及细胞衰老或者凋亡有关。     

番茄红素抗氧化和调节血脂作用的研究进展

目的:介绍番茄红素在抗氧化和调节血脂方面的研究成果,为其开发利用提供参考.方法:依据近几年国内外相关研究报道,主要介绍番茄红素抗氧化和调节血脂的作用、机制及其与疾病的关系.结果:番茄红素具有多种生物学活性,除强大的抗氧化和调脂作用外,它还具有抑制肿瘤细胞增殖、增强机体免疫、调节环加氧酶新陈代谢等功能.结论:番茄红素在人类疾病的预防和治疗上具有广阔的前景.     

EP方案同步放疗治疗局限期小细胞肺癌的临床研究

 目的 研究EP方案同步放疗治疗42例局限期小细胞肺癌的疗效及副反应。方法 化疗采用EP方案：放疗为常规分割2Gy／次，每周5次，总剂量为54-60Gy。结果 治疗过程中放射性肺炎发生率62％，其中Ⅲ级为7％；急性放射性食管炎发生率为79％，Ⅲ～Ⅳ级为12％；粒细胞下降发生率为71％，Ⅲ～Ⅳ级为21％；中位生存期为23月，1、2、3年局部控制率分别为88％、79％、71％；1、2、3年生存率分别为86％、55％、24％。结论 EP方案同步放疗治疗局限期小细胞肺癌，患者可耐受，局部控制率和生存率有所改善，长期生存优势有待进一步观察。     

顺食汤防治食管癌放疗引起放射性食管炎的临床研究

放射性食管炎是食管部进行放射性治疗中的一大并发症,特别是腔内放疗的应用使其发生率明显提高,严重影响患者生存质量。我们自１９９０年１１月～１９９５年１１月,采用自制中药汤剂—顺食汤对１８０例食管癌患者进行放射性食管炎的防治,取得满意疗效,兹报告如下。１...