中国HCV5′-非编码区复合酶切分型及其3b基因型序列分析

目的　研究中国丙型肝炎病毒 (HCV)不同基因型感染分布情况 ,并对 3b序列进行分析。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及 187份HCVRNA阳性样品中cDNA。A应用BHH (BsrBI、HaeⅡ、HinfI)复合内切酶消化 5′ NCRcDNA ,B应用BstUⅠ消化 ,C应用HaeⅢ消化 ,电泳检测片段大小。结果　 187例HCVRNA阳性患者ABC分型结果表明 ,1b型感染率占 6 7 38% ,2a型 12 30 % ,1b/ 2a型为5 88% ,3b型 5 35 % ,2b型 3 2 1% ,2a/ 2b、1b/ 2b型各为 2 14 % ,1a型 1 0 7,6a型 0 5 4 %。 3份 3b基因型 5’ NCRA T克隆测序结果表明 ,3株 3b型之间同源性为 99 5 4 %～ 10 0 %。其中chiKQ5 0与GI5 14 395 3a株为 96 2 8%与GI6 76 8773b株同源性为 98 6 % ,与 1a型为 93 4 9% ,与 1b型为94 88% ,与 2a型为 91 6 3% ,与 2b型为 89 30 % ,与 4a型为 95 35 % ,与 6a型为 93 4 % ,结论　研究结果表明该项分型技术既保证了RT PCR检测灵敏度 ,又具有良好的分型效果。提示 :该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测 ,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值     

多发性易消散性白点综合征1例报告并文献复习

对多发性易消散性白点综合征1例报告并文献复习如下。1病历摘要 女，27岁。因左眼视物模糊，变暗，眼前黑影3d于2006—05—21就诊于北华大学附属医院眼科。患者既往健康。眼科检查：右眼视力0．1／-4．75D=1．0，眼压12．0mmHg，眼前段及眼底未见异常。左眼视力0．08／-5．25DS=0．5，眼压13．0mmHg；角膜透明，前房深度正常，房水清，晶状体透明，玻璃体透明，未见炎性细胞，眼底视盘境界清，色淡红，C／D-0．3，黄斑旁中心凹区血管旁见数个圆形白色点状病灶，边界清晰，位于视网膜深层及RPE层，有向黄斑中心凹聚集的倾向，但尚未累及中心凹，中心凹反射（＋）。FFA检查示左眼早期病变处透见荧光，动静脉期表现为下方绕中心凹半周的高荧光斑点，呈花冠征，     

慢性乙型肝炎的抗病毒治疗和耐药株监测

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染引起的全球性疾病 ,严重危害人类健康和生活质量。目前慢性乙型肝炎的治疗主要有α干扰素和拉米夫定 (Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ) ,α干扰素为非特异性抗病毒药物 ,且有免疫调节作用 ;拉米夫定为抗病毒药物 ,是一种双脱氧核苷类似物 ,吸收后在体内代谢成为拉米夫定三磷酸化物 ( 3ＴＣ ＴＰ)。ＨＢＶ在复制过程中存在前基因组ＲＮＡ的逆转录过程 ,3ＴＣ ＴＰ在逆转录过程中可掺入到新合成的ＤＮＡ链中 ,由于其戊糖环为双脱氧硫代呋喃糖环 ,不具有 3′羟基 ,不能形成磷酸二酯键 ,所以可以阻止下一个核苷…     

PCR实验加样器污染的解除方法及污染对微孔板杂交的影响

经多年来的分子生物学实验证实尿苷酶（UDG）是当前抗污染非常有效的试剂，在国家批准的体外诊断试剂中应用UDG抗污染已程序化。随着分子生物学学科发展。聚合酶链反应已在多学科的多项研究中推广和应用。而其预防污染和抗污染研究工作依然极其重要。2000年我所曾对聚合酶链反应污染环节进行详细的分析和研究。     

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(EIAgen HCV Ab Kit)的可信度分析

目的 分析丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂盒(EIAgen HCV Ab Kit)的可信度.方法 应用考核试剂EIAgen HCV Ab Kit和参比试剂Ortho HCV 3.0 ELISA对2 881例样本进行检测,检测结果不一致时,应用重组免疫印迹试验(RIBA)确证.所用试剂为RIBA(R)HCV 3.0 SIA或核酸试验(NAT),并对结果进行综合分析.结果 2 881例样本中,阳性样本333例,阴性样本2 539例,9例不确定的样本被剔除.考核试剂检测真阳性333例,无假阴性结果,真阴性2 527例,假阳性12例.考核试剂灵敏度为100.00%,高于参比试剂;特异性为99.53%,略低于参比试剂.考核试剂对部分国内常见HCV基因型的灵敏度为100.00%,对于非HCV感染的病毒性肝炎、自身免疫性疾病及妊娠样本具有良好的特异性,特异性均为100.00%.溶血、脂血样本对考核试剂检测结果无影响.考核试剂阳性预测值为96.52%,阴性预测值为100.00%,符合率为99.58%.考核试剂S/CO≥5.9的样本301例,其中用参比试剂检测S/CO≥3.8占88.70%;考核试剂S/CO＜5.9的样本32例,其中用参比试剂检测S/CO＜3.8占87.50%.结论 试剂EIAgen HCV Ab Kit灵敏度100.00%,特异性较好,是一种优质的抗-HCVELISA试剂,尤其适用于阳性样本的筛选.采用EIAgen HCV Ab Kit试剂检测样本,当S/CO≥5.9时,样本的阳性预测值比较高.     

基于可降解磁性生物支架的离体三维心肌补片构建及其生物学特性分析

目的：合成可降解磁性氧化铁-壳聚糖-芦荟胶多孔支架，构建新型离体三维心肌补片，并探索其生物学特性。 方法：配置不同质量分数的磁性氧化铁纳米颗粒-壳聚糖-芦荟胶的混合溶液，通过低温梯度冷冻干燥技术制备出三维多孔支架，并通过扫描电子显微镜，动态热机械分析，孔隙率测试和体外降解实验等对其物理、生物特性进行表征。将幼稚心肌细胞消化后接种至支架混合培养一周。用荧光定量PCR技术检测离体心肌补片中，心肌细胞特异性基因及细胞凋亡基因的mRNA水平表达量。 结果：0.1% 磁性氧化铁纳米颗粒-1%壳聚糖-0.2%芦荟胶多孔支架的表面孔洞均一，孔隙率=0.93±0.017；机械拉伸强度=0.33±0.06mPa，弹性极限应变约0.12±0.01，且随支架中芦荟胶含量增加而减小（p<0.001）；体外生理条件下，7天降解率82.9±2.4%，且降解过程可被核磁共振监测。支架可促进大鼠心肌细胞（H9C2）生长增殖，无细胞毒性。复合培养形成的离体心肌补片，可在外加电场下收缩-舒张，且补片中的心肌细胞成熟相关基因表达升高（p<0.05）, 凋亡抑制（p<0.01）。 结论：可降解磁性氧化铁-壳聚糖-芦荟胶多孔支架的适合心肌组织工程应用；其构建的离体三维心肌补片可促心肌细胞成熟，具有植入心脏治疗心梗后心肌损伤的潜能。     

终末期肝病患者乙型肝炎病毒感染与肝祖细胞激活的关系

目的探讨终末期肝病患者乙型肝炎病毒感染与祖细胞激活和扩增的关系。方法 16例终末期慢性乙型肝炎患者的肝活检标本,以细胞角蛋白(CK7)为标记做免疫组织化学,定量分析祖细胞数目和胆管反应面积的相关性。结果全部患者均从组织学证实为肝硬化,并且炎症反应严重(炎症活动度评分12～17分)。祖细胞数目和胆管反应面积呈显著正相关。血清HBVDNA水平与祖细胞数目和胆管反应面积均显著相关。结论在终末期慢性乙型肝炎患者中,祖细胞的激活和扩增明显,HBV感染可能参与肝祖细胞的激活和扩增。     

熊去氧胆酸治疗胆汁淤积性疾病应用进展

胆汁淤积是指由于肝胆酸流受阻而导致的血清胆汁酸浓度升高。胆道上皮病变导致胆汁酸转运障碍,增加了血清胆汁酸浓度,普遍特征是胆汁酸在肝脏和血液中蓄积伴胆汁流减少,慢性胆汁淤积肝损伤主要由肝内淤积的高浓度肝细胞毒性疏水胆汁酸（如石胆酸及其前体鹅去氧胆酸）介导,它们溶解胞膜脂质,致胞膜损坏、细胞完整性破坏及胞内成分漏出,并能引发免疫激活介导的肝损伤,以进展性肝内胆酸潴留导致肝损伤、肝硬化和死亡为特征。     

干扰素致甲状腺功能异常1例

1.病例资料:患者男性,37岁,汉族,北京籍,教师.因"发现ALT升高5年,间断心悸1年余"就诊.患者5年前劳累后感觉乏力,检查结果显示:ALT 67 U/L、抗-HCV阳性.1年半前HCV RNA水平为2.8×10(5)拷贝/ml,并开始干扰素α-2b 3 MU/d治疗,未服用利巴韦林;治疗3个月时查HCV RNA低于检测限.