人骨髓间充质干细胞联合单倍体造血干细胞移植治疗急性放射病小鼠的实验研究

目的 观察人骨髓间充质干细胞（BMSC）联合单倍体相合造血干细胞（HSC）移植治疗辐射重度造血损伤小鼠的效果。方法 60只C57BL/6（H-2b）与BALB/c（H-2d）杂交第1代[CB6F1（H-2b×d）]小鼠用⁶⁰Co γ射线8.0 Gy全身照射后,按照完全随机设计分为照射对照、HSC单移植和BMSC+HSC共移植3组,每组20只。检测移植后各组小鼠存活率、外周血象、骨髓病理、骨髓细胞集落形成以及移植物抗宿主病（GVHD）评分等指标。结果 照射对照组小鼠辐照后第10天全部死于造血衰竭,平均活存时间为（7.13±0.31） d。与单移植组相比,共移植组小鼠的移植物抗宿主病（GVHD）表现和病理改变均明显减轻,GVHD评分明显降低（t=3.677、4.330、5.303、3.578,P<0.05）;共移植组的生存率和生存时间明显高于单移植组（t=3.317、5.183,P<0.05）。单移植组小鼠移植后第28天WBC（6.51±1.38）×10⁹/L、PLT（749.56±190.72）×10⁹/L、RBC（8.15±0.74）×10¹²/L、Hb（115±10.44） g/L,回升程度低于正常水平。共移植组小鼠移植后第28天WBC（12.50±2.07）×10⁹/L、PLT（968.25±216.62）×10⁹/L、RBC（9.22±1.04）×10¹²/L、Hb（137.57±14.89） g/L,回升程度接近正常水平。单移植组小鼠外周血象的回升速度和恢复水平明显低于共移植组小鼠（t=6.665、3.164、3.011、2.520,P<0.05）。移植后第7天共移植组小鼠骨髓抑制程度较单移植组轻,第28天共移植组小鼠骨髓新生造血灶多于单移植组。共移植组小鼠骨髓CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-GEMM集落计数在辐照后第7和28天均明显多于单移植组（t=3.625、2.966、3.020、3.536,P<0.05;t=4.369、4.849、5.044、4.243,P<0.05）。结论 BMSC联合单倍体造血干细胞移植能促进急性骨髓型放射病造血重建及植入,降低GVHD的发生,提高移植成功率。     

急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间通讯的改变

目的 观察急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间隙连接蛋白43 (connexin43, Cx43)表达的变化及通讯功能的改变.方法 体外培养初发急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的与正常人的骨髓基质细胞,采用免疫细胞化学方法观察三者之间Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较三者之间间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication, GJIC)功能的差异.结果 正常人、急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的骨髓基质细胞上Cx43表达的阳性率分别为(88.0±3.5)%、(12.0±2.4) %和(52.0±3.1) %;基质细胞上Cx43蛋白的光密度值分别为(175.08±8.34)、(45.42±3.71)及(94.33±7.20);染料传输的细胞数分别为(9.20±0.35)、(1.84±0.33)和(4.07±0.53).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常人及化疗后完全缓解急性白血病骨髓基质细胞明显减弱.     

右美托咪啶预防儿童七氟醚麻醉苏醒期躁动的观察及护理研究

目的 探究右美托咪啶预防儿童七氟醚麻醉苏醒期躁动的情况及相应护理方法.方法 入选2014年7月至2015年7月在我院接受治疗的手术治疗的患儿86例,患儿经七氟醚进行麻醉.根据随机分组的原则,84例患儿分成对照组予观察组,各43例.观察组患儿在麻醉后,静脉输液右美托咪啶,对照组患儿麻醉后静脉滴注与观察组等量的生理盐水,比较两组患儿的苏醒期躁动情况,对出现躁动的患儿进行心理和行为的护理干预.结果 观察组中患儿躁动情况发生率显著性的低于对照组的发生率,P＜0.05.结论 应用右美托咪啶预防儿童七氟醚麻醉苏醒期躁动的效果较好,护理干预可减少躁动中出现危险情况,为七氟醚麻醉苏醒期患儿躁动提供了有效了预防治疗和护理方案.     

近期疗效分析

目的观察拉米夫定+α-干扰素(IFN-α)联合和单用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后血清HBVM和肝功能的变化.方法对临床确诊为慢性乙型肝炎血清HBeAg、HBV DNA同时阳性,ALT异常者40例,随机分为两组,联合治疗组拉米夫定100～150mg/d,疗程48周,IFN-α 300万U,肌肉注射,每周3次,疗程24周;单用拉米夫定组(对照组),拉米夫定用量、疗程同联合治疗组.动态观察血清HBV复制指标和肝功能的变化.结果用药第24周内两组病例血清HBV DNA均阴转;HBeAg阴转率联合治疗组60%(12/20),对照组15%(3/20);HBeAb阳转率分别为50%(10/20)、10%(2/20);联合治疗组1例HBsAg同时阴转,两组HBeAb阳转率比较有显著差异(χ2＝5.83,P＜0.05).治疗第8周血清ALT复常率两组分别为75%(16/20)和45%(9/20).结论在慢性乙型肝炎治疗中拉米夫定+IFN-α联合抗病毒治疗可能是今后临床治疗研究的方向.     

8个月内婴儿麻疹16例临床分析

自麻疹疫苗广泛应用以来,麻疹发病率已明显下降,但近年来有上升趋势,且其临床特征发生了一些变化,如8个月内婴儿发病增多、临床症状不典型、并发症增多等。我院自2007年1至5月共收治8个月内婴儿麻疹16例,现分析如下:     

Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。     

自体外周血干细胞移植联合生物治疗及长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病的临床研究

目的 评价大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗,长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的疗效.方法 32例成人急性非淋巴细胞白血病患者首次缓解并经3个周期大剂量阿糖胞苷强化治疗后,行自体外周血干细胞移植,预处理方案采用MAC、CEAC等,造血重建后予以大剂量IL-2生物治疗4个疗程,之后每3～4个月予以长间歇化疗1次,共维持2年,常用方案包括TA、MA、HEA 等.结果 32例患者移植后均成功重建造血,无一例移植相关死亡.长间歇维持化疗满2年的12例中,有8例存活;存活中位时间为确诊后1268(953-1926)d,移植后986(725-1742)d,平均生存时间为1475.7 d,3年无病存活率为(66.7±8.1)%;其余维持化疗还未到2年的20例患者中,有2例复发(10.0%),其中1例死亡(5.0%),其余18例至今病情稳定.结论 大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病,治疗相关死亡率低,无病生存率较高,可作为改善成人ANLL治疗效果的重要措施.     

3种G-CSF动员224例外周血干细胞效果比较

目的比较3种粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对外周血干细胞的动员效果。方法我科自体外周血干细胞移植病人224例,采用3种粒细胞集落刺激因子(吉赛欣、欣粒生、惠尔血)进行外周血干细胞动员,对干细胞动员情况、干细胞质量、移植后造血重建和药物毒副作用进行比较。结果224例病人全部移植成功,其动员效果、干细胞质量及在移植后造血重建中的临床效果差异均无显著性,毒副作用小。结论吉赛欣和欣粒生两种国产制剂及惠尔血能可靠用于外周血干细胞动员及造血重建,尤其是国产制剂的价格明显低于进口产品,在有效保证动员效果的同时大大减轻了病员的经济负担,值得临床应用推广。     

急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能的研究

目的：研究急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接的功能方法：体外培养正常（正常对照组）及急性淋巴细胞白血病（急淋组）原代骨髓基质细胞,采用细胞免疫组化法及计算机灰度检测观察两组之间Connexin 43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较两组之间缝隙连接细胞间通讯（GJIC）功能的差异。结果：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞Connexin 43的表达较正常骨髓基质细胞明显减低,GJIC功能减弱。结论：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能下降可能与白血病骨髓造血微环境功能异常有关。