大鼠脑缺血再灌注对白质的损伤作用

目的观察和评价大鼠脑缺血再灌注诱发白质少突胶质细胞和髓鞘的损伤变化。方法按照随机原则将实验动物随机分为假手术组（10只）,再灌注3d组（15只）。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion, MCAO/R）模型,应用免疫组织化学染色检测髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）的表达与分布;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP切口末端标记技术（TdT2-ediated d-UTP nickend labeling technique, TUNEL法）检测凋亡细胞。结果脑缺血再灌注后,动物均表现为神经行为功能障碍;与假手术组相比,患侧脑白质MBP阳性分布减少,可见多量凋亡细胞。结论脑缺血再灌注可对脑白质造成显著损伤,表现为少突胶质细胞的凋亡,以及髓鞘的损伤。     

小RNA干扰骨桥蛋白抑制人U251细胞的体外生长与侵袭

目的:研究慢病毒载体介导的骨桥蛋白(OPN) RNA干扰对人U251神经胶质瘤细胞体外生长和侵袭的影响,并探讨其对神经胶质瘤生长、侵袭的可能机制.方法:应用本实验室已构建并鉴定的OPN特异性短发卡RNA慢病毒表达载体(LV-OPN shRNA)感染U251神经胶质瘤细胞.RT-PCR检测干扰前、后U251细胞OPN mRNA的表达;免疫印迹法检测干扰前、后U251细胞OPN、MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化.结果:与未感染组、空载体感染组相比,LV-OPN shRNA感染组OPN mRNA、OPN蛋白及MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达均明显下降;LV-OPN shRNA感染组细胞增殖、侵袭能力及迁移能力也明显下降.结论:慢病毒载体介导的骨桥蛋白RNA干扰在体外能抑制U251细胞OPN mRNA和蛋白表达, 进而抑制U251细胞在体外的生长及侵袭,因此可以推测OPN是促进胶质瘤增殖和侵袭的基因之一,为胶质瘤的治疗提供新的靶点.     

大鼠膝关节软骨与不同强度跑台运动的影响*

背景：适量的运动是维持正常关节组织形态结构及生理功能的必要条件,过度运动或制动均可导致关节软骨退变。 目的：观察不同强度跑台运动对大鼠膝关节软骨的影响。 方法：将18只雄性成年Wistar大鼠随机分安静组、低强度运动组、高强度运动组。6周后 ELISA法测定血清基质金属蛋白酶3水平,并行蕃红-O染色、基质金属蛋白酶3与Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及Mankin评分,反转录聚合酶链反应检测软骨基质金属蛋白酶3的mRNA表达。 结果与结论：高强度运动组Mankin评分、血清及软骨中基质金属蛋白酶3表达均显著高于安静组与低强度运动组(P < 0.05),基质糖氨多糖及Ⅱ型胶原含量均显著低于安静组与低强度运动组(P < 0.05);低强度运动组与安静组差异无显著性意义。说明高强度运动可造成大鼠膝关节软骨退行性变,且软骨运动性损伤可能与基质金属蛋白酶3表达增强有关。      

星形胶质细胞在脑内移植中的作用

目的 探讨星形胶质细胞在脑内移植中的作用。方法 应用人胚胎皮南的星形胶质细胞移植于恒河猴脑皮质内,通过免疫组化方法动态观察星形胶质细胞的形态变化。结果 星形胶质细胞在突主组织中可继续发生、分化,其胶质纤维突破起长形成,并与宿主组织呈渐进融合。同时,星形胶质细胞与移植组织中毛细胞血管的形成关系密切,并可能直接参与毛细血管的形成过程。结论 星形胶质细胞移植对于改善缩主脑组织的环境条件,促进其结构功能修     

肝癌耐药细胞的形态学及微小RNA表达谱分析

目的 比较3株肝癌耐药细胞(Huh-7/ADM、Huh-7/CBP、Huh-7/MMC)与亲本肝癌细胞Huh-7的形态学差异;分析这3株肝癌耐药细胞及Huh-7的miRNA表达谱,筛选3株耐药细胞中异常表达的微小RNA(miRNA).方法 光学显微镜下观察各细胞株细胞形态学特点、透射电镜下观察各细胞株细胞内超微结构特点.miRNA芯片检测各细胞株miRNA表达谱,real-time定量PCR(qPCR)法验证芯片结果.结果 镜下见肝癌耐药细胞比亲本肝癌细胞Huh-7更具多形性,核异型性亦增加;细胞周边微绒毛减少;胞质增多,胞质内细胞器含量增加,并出现脂滴、糖原等成分.miRNA表达谱分析显示:与Huh-7相比,有32个miRNA在3种肝癌耐药细胞株中表达同时上调,有22个miRNA在3种耐药细胞株中表达同时下调.real-time qPCR检测证实miR-15a、miR-16、miR-27b、miR-30b、miR-146a、miR-146b-5p、miR-181a、miR-181d、miR-194在各肝癌耐药细胞中表达同时上调.结论 耐药细胞异型性增加,筛选出的肝癌耐药细胞中异常表达miRNA,可为研究肝癌多药耐药与miRNA的相关性提供依据.     

骨骼肌活检组织恒冷切片技巧

骨骼肌活检技术在 186 8年由 Duchenne首创 [1 ] ,现已广泛应用于临床 ,成为诊断神经肌肉疾病的手段之一。为了避免肌肉活检组织经固定、脱水、包埋等引起人为的变化 ,目前多采用速冻与恒冷切片 ,进行各种肌酶染色 ,对肌病的病理诊断和研究都具有十分重要的意义。但可因速冻或冷冻切片不理想 ,产生冰晶或切片皱折、破损等现象而影响观察与诊断。为克服这些现象 ,笔者认为把握好速冻及冷冻切片两个环节的技巧最为关键 ,现介绍如下 :1　材料与方法1.1　材料　活检组织取自患者的肱二头肌、三角肌、股四头肌或腓肠肌 ,大小约 0 .8cm× 0 .5 cm…     

端粒酶基因hTRT在甲状腺乳头状癌的表达及意义

目的：探讨端粒酶基因hTRT在甲状腺乳头状癌的表达及其意义，方法：应用原位杂交方法检测端粒酶基因hTRT在30例甲状腺乳头状癌，19例甲状腺良性病变及16例癌旁正常甲状腺组织中的表达。结果：hTRTmRNA在甲状腺乳头状癌中的阳性率为（25／30，83．3％），显著高于甲状腺良性病变中的阳性率（3／19，15．8％）和正常甲状腺组织中的阳性率（0／16，0％），而且病期晚及有淋巴结转移者阳性率增高，结论：端粒酶基因hTRT为甲状腺乳头状癌恶性表型增高的标志，hTRTmRNA表达检测可望成为甲状腺乳头状癌辅助诊断和预后评估的一个手段。