转录因子Ets-1表达载体的构建及调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达

目的 构建转录因子Ets-1的pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体,转染小鼠成釉细胞,检测Ets-1调控小鼠成釉细胞MMP-20的表达,为研究Ets-1在牙釉质发育过程中的重要作用奠定基础.方法 以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得cDNA为模板,用RT-PCR法扩增得出含有kpn Ⅰ和BamH Ⅰ的Els-1目的 基因连接到pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体上.将重组质粒瞬时转染到小鼠成釉细胞中观察,并通过实时定量RT-PCR的方法检测MMP-20 mRNA的相对表达量.结果 ①经过PCR引物扩增得到一约1399bp的基因片段,重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1双酶切进行初步鉴定后,与GenBank登录基因对比显示生物公司测序结果完全正确.②重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Ets-1转染小鼠成釉细胞后(以转染空载体pcDNA3.1/myc-HisA作为对照),实时定量RT-PCR检测MMP-20 mRNA的相对表达量上升明显.结论 成功构建了Ets-1的真核表达载体,初步研究证明小鼠成釉细胞核中Ets-1可以上调MMP-20基因表达水平.     

TGF-β1调控小鼠成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的：探讨TGF-β1对Amelotin基因表达的影响及作用机制。方法：通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对釉成熟蛋白（Amelotin）基因表达的影响;利用TGFBR1小RNA干扰（siRNA）技术阻断TGF-β受体I（TGFBR1）表达,或在成釉细胞中过表达活化型TGF-β受体I（T204D）,观察Amelotin基因表达的改变;利用双荧光素酶基因报告系统观察TGF-β1和T204D对成釉细胞Amelotin启动子转录活性的调控作用。结果：TGF-β1刺激成釉细胞后,Amelotin基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使TGFBR1基因沉默,实时定量RT-PCR显示TGF-β1调控Amelotin基因表达的作用减弱,而pCDNA3.1-T204D转染成釉细胞促进了Amelotin基因表达。将pGL3-Amelotin启动子转染成釉细胞,并用TGF-β1刺激成釉细胞,Amelotin启动子的转录活性明显增强。TGFBR1小RNA干扰阻断了TGF-β1诱导的Amelotin启动子转录活性,而将pGL3-Amelotin与T204D共转染成釉细胞后,促进了Amelotin启动子的转录活性。结论：在牙釉质发育过程中,TGF-β1和活化型TGFBR1信号通路调控成釉细胞Amelotin基因表达。     

转录因子Sp1基因克隆及表达载体的构建

目的 通过转录因子Sp1基因克隆以及真核表达载体的构建,为探讨转录因子Sp1在牙釉质发育的分子调控奠定基础.方法 根据引物设计原则设计Sp1基因的PCR引物,以从小鼠成釉细胞中提取的总RNA逆转录所得cDNA为模板,进行PCR扩增,用PCR法扩增得出含有EcoRⅠ和XbaⅠ的Sp1目的 基因连接到pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体上.结果 经过PCR引物扩增得到2343bp基因片段,将获得的重组质粒pcDNA3.1/myc-HisA-Sp1双酶切分析鉴定,测序结果与GenBank登录基因完全一致.结论 成功实现了Sp1基因克隆及表达载体的构建,为以后研究转录因子Sp1在牙釉质发育的分子调控方面奠定基础.     

下颌第二磨牙C形根管系统对称性的临床研究

目的 确定下颌第2磨牙C形根管系统对称性的发现率.方法 选取临床上需行根管治疗的下颌第2磨牙,70例诊断为C形根管系统后,68例可以拍摄到对侧同名牙的X线根尖片,在放大镜下观察分析双侧牙根及根管系统的对称性.结果 68例临床诊断为C形根管系统的双侧下颌第2磨牙中,62例双侧根管系统呈现对称性,发现率为91.18%.结论 下颌第2磨牙的C形根管系统的解剖结构复杂,对称性发现率高,有利于通过一侧牙根的解剖来判断对侧同名牙的根管解剖形态.     

氧化锆与纳米羟基磷灰石陶瓷的剪切实验

BACKGROUND: Nano-hydroxyapatite as a surface modification material that is bonded to the surface of the zirconia ceramics upon sintering at high temperature can improve bone-inducing activity and bone bonding strength of the zirconia ceramics. Moreover, the sintering temperature is crucial for performance and bonding of the composite. OBJECTIVE: To detect the shear strength of nano-hydroxyapatite ceramics coating bonded to zirconia ceramics at different sintering temperatures. METHODS: Nano-hydroxyapatite slurry was prepared using sol/gel technology. Thereafter, 20 zirconium green bodies were coated with nano-hydroxyapatite slurry and randomly divided into four groups. Then, the specimens were put into non-pressure sintering furnace and sintered at 1 300, 1 400, 1 500, and 1 550 ℃, respectively. At last, we measured the shear strength of all the specimens after sintering by universal testing machine, and analyze the type of fractures. RESULTS AND CONCLUSION: With the rising of sintering temperature, the shear strength of the specimens was gradually increased, and there were significant differences between the four groups [(4.04±1.19), (6.60±0.95), (16.51±1.93), (80.47±19.31) MPa, P < 0.05]. Within the scope of 1 550 ℃, the sintering temperature was positively relative to the shear strength of specimens. These findings indicate that in the certain temperature range, the higher the sintering temperature, the greater the shear strength of the bonding interface between zirconia and nano-hydroxyapatite. When the sintering temperature is 1 550℃, the shear strength of the bonding interface is the highest.      

釉成熟蛋白amelotin在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:观察釉成熟蛋白(amelotin)基因聚合酶链反应产物在大肠杆菌中的表达,并获得纯化的釉成熟蛋白.方法:利用His融合蛋白表达载体pET32a(+)转化大肠杆菌BL21,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并改变诱导时间、温度、IPTG浓度来优化表达条件,然后在优化的条件下进行大量表达并收菌;His镍柱纯化表达的蛋白.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白表达、纯化情况.结果:电泳结果分析表明:amelotinPCR扩增产物在大肠杆菌中获得高效表达,大小约4×104,纯化得到的amelotin纯度较高.结论:成功得到纯化的amelotin,为进一步制备抗体奠定基础.     

Tie2受体在口腔鳞癌中的表达

目的：探讨Tie2受体在口腔鳞癌组织中的表达规律及其在肿瘤组织发展以及血管生成中的作用。方法：采用免疫组织化学S-P法。检测40例H腔鳞癌组织的微血管密度（mierovessel density,MVD）和Tie2的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果：口腔鳞癌组织中MVD和Tie2的表达水平均高于正常对照组,且Tie2的表达水平与MVD呈正相关;Tie2的表达随临床病理分级的增加呈递增的趋势。结论：Tie2可能通过调节口腔鳞癌组织的血管生成参与其发展的过程。     

TGF-β/Smad信号转导通路及其调控机制的研究进展

转化生长因子-β(TGF-β)超家族在胚胎发育和细胞的分化中具有多方面的生理功能,调控基因十分广泛.Smads蛋白是TGF-β超家族表达细胞内重要的信号转导和调控分子.多种DNA结合蛋白可以与Smads结合,直接影响其所调控基因的差异.Smads蛋白在DNA共结合因子辅助下,招募转录激活因子或转录抑制因子调控靶基因的转录.     

c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。