胶质母细胞瘤放射治疗前后免疫相关基因研究

目的研究人脑胶质母细胞瘤组织放射治疗后基因表达谱的变化。方法采用BioStarH-141s（2004）型含13929条人类全长基因的cDNA表达谱芯片,对两例胶质母细胞瘤组织在直线加速器（60Gy）放射治疗前后相关基因表达情况进行检测,并分析它们之间的基因表达差异。结果胶质母细胞瘤放射治疗后与放射治疗前比较,组织表达差异基因共17个,其中上调10个,下调7个。表达差异基因中改变最明显的功能群是免疫系统相关的基因,如SPARC、ID3、HLA-DQA1和HLA-DOA等上调。细胞增殖、细胞调亡、细胞周期、DNA修复系统也有部分基因发生明显变化,如MLL5上调和POLR2B下调等。结论对胶质母细胞瘤组织经直线加速器照射（60Gy）后基因表达谱改变的研究可以更好地阐明其放射敏感性差异机制,为放射治疗前或放射治疗早期寻找预测肿瘤放射敏感性分子标志物提供理论依据。     

胶质纤维酸性蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的为获得高纯度的人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。方法从人脑胶质瘤组织中提取mRNA,采用RT-PCR的方法克隆GFAP基因全长序列,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ将GFAP基因插入到原核表达载体pGEX4T2,对重组表达载体pGEX4T2-GFAP进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫酸代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达GFAP-GST融合蛋白。经亲和层析纯化获得GFAP融合蛋白,并通过SDS-PAGE和western blot进行鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。宿主菌BL21经IPTG诱导表达并纯化得到目的蛋白GFAP-GST融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量约为70～90kD,符合预期,westernblot证实该目的蛋白能被特异性抗人GFAP多克隆抗体识别。结论成功构建GFAP表达载体,并可通过原核表达获得高纯度的目的蛋白,为进一步开展相关研究打下基础。     

中央沟附近胶质瘤的诊断和手术治疗

目的提高中央沟附近胶质瘤的手术治疗效果,改善生活质量。方法回顾性总结1995年至2001年我科治疗的中央沟附近87例胶质瘤的临床表现、诊断和手术方式的选择与预后。结果87例胶质瘤中,肿瘤主体位于中央沟前38例,位于中央沟后30例,主体位于中央沟下方19例。临床上首发症状为癫痫的62例,以进行性一侧肢体无力15例,以头痛等颅内压增高症状为主要表现起病的10例。术后病理提示星形细胞瘤58例,少突胶质瘤细胞瘤20例,少突胶质细胞与星形细胞混合瘤6例,胶质细胞增生3例。按Kernohan分级分类,其中星形细胞瘤中星形细胞瘤Ⅰ级6例,星形细胞瘤Ⅱ级29例,星形细胞瘤Ⅲ-Ⅳ级23例;少突胶质细胞瘤中Ⅰ级6例,Ⅱ级14例。在肉眼下肿瘤全切除70例,次全切除17例。术后肢体功能障碍较术前减轻20例,不变25例,短期加重而后肢体恢复的有12例,加重30例,无手术死亡。结论术前要充分了解肿瘤的解剖位置和周围结构的毗邻关系,采用显微外科技术在软膜下切除肿瘤,保护中央沟静脉解剖和功能的完整,是手术的关键。     

亚临床型垂体腺瘤卒中的诊治

目的总结203例亚临床型垂体腺瘤卒中患者临床特点、诊断、处理与结果。方法回顾性分析亚临床型垂体腺瘤卒中病人203例,149例行经鼻蝶垂体腺瘤切除术,54例行开颅切除手术。患者术前术后均作内分泌学检查,影像学检查为cT或MRI。结果所有病人视觉损害、头痛或垂体功能得到不同程度改善。泌乳素腺瘤是本组病例中最常见病理类型。大腺瘤及巨腺瘤患者容易发生亚临床型垂体腺瘤卒中。术后随访有24例垂体腺瘤复发。19例接受放疗。9例术后长期服用甲状腺素替代药物,8例服用类固醇激素。结论亚临床型垂体腺瘤卒中的发病率比急性卒中高。亚临床型垂体腺瘤卒中的发病机制尚不清楚。磁共振优于cT诊断亚临床型垂体腺瘤卒中。经鼻蝶手术治疗亚临床型垂体腺瘤卒中安全有效。     

神经内镜在侧脑室脑膜瘤显微手术中的应用

目的探讨神经内镜在侧脑室脑膜瘤显微手术中的应用价值。方法回顾分析了神经内镜辅助显微手术切除5例侧脑室膜瘤患者的临床资料。结果5例肿瘤均全切除，术后全部恢复良好，无明显严重并发症发生。结论采用神经内镜辅助显微手术切除侧脑室脑膜瘤具有创伤小、视野宽广、术野清晰、手术时间短和疗效好等优点。     

男性垂体泌乳素腺瘤的显微手术治疗

目的分析总结男性垂体泌乳素腺瘤的诊断和治疗特点。方法对7年间33例男性垂体泌乳素腺瘤的临床特点和肿瘤的病理、内分泌、影像学及治疗特点进行分析。患者平均年龄39.2岁。临床表现以性功能、视力视野障碍多见。患者平均血清泌乳素水平为(2405.57±39.85)ng/ml,肿瘤直径为(29.9±10.4)mm,75.76%的肿瘤为侵袭性。结果显微手术全切除27例,次全切除6例。经手术及药物治疗后,患者泌乳素降至正常23例(69.70%,),明显下降7例(21.21%);26例性功能障碍患者14例恢复正常或改善;18例视力下降的患者16例视力恢复正常或改善;17例视野缺损的患者14例视野恢复正常或改善。结论男性泌乳素腺瘤侵袭性生长多见,泌乳素水平高,采取显微神经外科手术尽可能切除肿瘤,并辅助药物治疗可以取得满意效果。     

视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析

目的:对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析.方法:用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选,每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.对阳性克隆菌落进行DNA测序以获得差异表达基因片段序列.将测序所得的序列通过互联网用Blast程序查找日本国家DNA数据库进行同源性分析.用实时定量PCR验证差异克隆.结果:PCR鉴定获得1000个阳性菌落,测序获得674个EST片段,序列长度在200～800 bp之间.同源性分析结果提示4周正向文库得到14个同源基因,4周反向文库得到20个同源基因,8周正向文库得到23个同源基因,8周反向文库得到19个同源基因.这些基因可归类于能量代谢、物质转运、信号转导、基因转录、细胞损伤与修复、MHC分子等.实时定量PCR检测的4个克隆证实是差异表达序列.结论:本研究构建的视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库为进一步鉴定和研究慢性视神经损伤相关基因提供了实验基础.     

创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的诊断和治疗

目的 探讨创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的诊疗方法.方法 介入方法诊断和治疗6例创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤患者.结果 5例出现反复鼻腔大出血;所有患者均行瘘口和假性动脉瘤球囊闭塞,2例颈内动脉保留,1例合并对侧间接型颈动脉海绵窦瘘行经面静脉-眼上静脉瘘口弹簧圈栓塞术.术后颅内杂音均即刻消失,结膜充血水肿2周～3个月内消退.无介入相关并发症.所有患者均行随访,无临床症状复发,均恢复工作.结论 车祸是致颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的主要原因;受力部位多集中在患侧眶额部到眶颧部的眶前外侧区;头颅MRI结合临床表现对于术前确诊该病非常有帮助;可脱球囊闭塞瘘口和假性动脉瘤或闭塞颈内动脉是安全、有效的治疗方法.     

Id2shRNA慢病毒载体的构建及其转染后对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建能高效敲减分化抑制因子2 (Id2) 基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,并观察敲减Id2对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 设计并合成特异性针对Id2基因的shRNA序列,将其构建到慢病毒载体pGCSIL-GFP中.以含有Id2基因的质粒为模板,扩增Id2基因cDNA序列的特异性片...