人血管内皮生长因子受体Flt—l胞外配体结合域的筛选及其结构分析

目的 应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt－1胞外最小配合结合域。方法 采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1cDNA,分别含胞外第2、1、－2、2－3和1－3个loop,构建酵母双杂交系统配合表达质粒,并将pGB59／hVEGF165与pGAD424／Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526。采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β－半乳糖苷酶活性分析。结果 Flt－1胞外loop2－3与loop1-3的配体结合能力相关不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合域－2－3loop,这对研制分子量更小、安全性高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义。     

日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的生物信息学鉴定与分析

目的 鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征.方法 采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方法获得日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的结构特征.结果 获得了2条腺嘌呤磷酸核糖转移酶的同源蛋白序列;分析了这2条序列的EST丰度、理化性质及蛋白三维结构等信息.结论 日本血吸虫至少存在2个腺嘌呤磷酸核糖转移酶的异构体.     

冠状动脉支架材料与置入后炎症因子的变化

目的:总结冠状动脉支架材料及置入后炎症因子变化的关系.方法:以"冠状动脉支架,生物相容性,炎症因子,细胞因子,血栓"为关键词,采用计算机检索万方数据网1998-01/2010-12相关文章.纳入冠状动脉支架置入后炎症因子水平变化方面的文献,排除重复研究或Mata分析类文章.结果:冠状动脉内支架置入有可能会引起冠状动脉血管的损伤,促进体内细胞释放炎症因子,通过炎症因子和细胞因子的表达,能很好的反映支架置入后局部血管损伤程度和炎症水平.药物涂层支架能够显著降低支架置入后再狭窄发生率及靶病变再次血运重建率,但显著增加晚期支架血栓形成.通过凝血系统各因子水平评估,药物涂层支架置入前后充分地抗血小板治疗能够降低支架血栓的发生.结论:支架置入体内后与血液及血管壁接触可产生炎症和致敏反应,因此支架置入前后应充分控制炎症状态和抗凝血治疗.     

T细胞等位基因排斥研究进展

T淋巴细胞通过其表面受体(T cell receptor,TCR)与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)表面的MHC-肽复合物结合识别外来抗原.TCR由异源二聚体α、β或γ、δ组成.其中参与特异性免疫应答的T细胞是α/βT细胞,占外周T细胞库的90%～95%[1].     

高效液相色谱-串联质谱法测定白内障患者应用加替沙星滴眼液后房水药物浓度

目的 定量分析白内障患者术前不同时间应用加替沙星(抗生素)滴眼液后房水中的药物浓度.方法 随机选取白内障患者36例,分为4组.各组患者均在术前3天内,于手术的眼局部应用加替沙星滴眼液,每日4次,每次1滴.手术当日,各组分别于术前15、30、60、120 min用加替沙星滴眼液1次;于术中取房水0.1 mL,用高效液相色谱-串联质谱法测量房水中的药物浓度.结果 4组房水中药物浓度分别为(0.15±0.29)、(0.33±0.22)、(0.31±0.19)、(0.74±0.32)μg·mL~(-1).结论 加替沙星滴眼液具有良好的角膜穿透性,局部应用能够在房水中获得有效的药物浓度;于术前120 min用药时,房水药物浓度最高.     

结肠慢传输型便秘的诊断和外科手术治疗体会

目的：探讨结肠慢传输型便秘的诊断与手术治疗。方法：回顾性分析我院2001至2007年治疗的结肠慢传输型便秘25例患者的治疗资料。其中行保留回盲部的结肠次全切除术8例,行切除回盲部的回肠乙状结肠下端吻合术9例,行全结肠切除术5例,行结肠部分切除术的3例。结果：病理检查结果示结肠肌间神经节细胞减少变性或缺如。盲肠结肠吻合术后患者大便次数2～4次／日,回肠乙状结肠下端吻合术后患者大便次数3～5次／日,全结肠切除术后为5～8次／日,结肠部分切除术后为1—2次／1～2天。结论：结肠次全切除术是治疗结肠慢传输型便秘的有效方法,保留回盲部的结肠次全切除术与切除回盲部回肠乙状结肠下端吻合术疗效无明显差异。     

可溶性预测模型在包涵体复性中的应用

目的 研究包涵体复性后可溶性的预测方法,区分复性类型,提高复性效率.方法 利用可溶性预测模型对43个疾病相关重组蛋白的表达进行预测,并采用双变性-复性方法对表达形成的包涵体进行复性.结果 预测有可溶性表达倾向的14个蛋白表达的包涵体.复性后均收率高、可溶性好.预测为高不溶性表达倾向的29个蛋白.表达的包涵体复性后高收率与低收率并存,对这两种收率包涵体特性的统计学分析显示理论等电点间存在显著性差异(P<0.05).结论 可溶性预测模型叮以应用于区分包涌体复性类型,预测复性后蛋白可溶性,为提高复性效率提供了新方法.同时提示蛋白的理论等电点在模型应用中有重要作用.

Abstract：

Objective To establish a prediction method for the refolding of inclusion bodies and classify refolding types of different inclusion bodies directly from their primary structure to improve the efficiency of high throughput refolding process. Methods Forty-three recombinant proteins performing important biological functions were expressed in E. coli. The probability of forming inclusion bodies of these proteins was predicted using Harrison's two parameter prediction model based on the proteins' amino acid composition. Subsequently, the proteins from the inclusion bodies were refolded using a double denaturation method that involved washing and denaturation in GdnHCl solution followed by denaturation in Urea solution and refolding through dilution. Results All the proteins were detected in the form of inclusion bodies using SDS-PAGE method. The proteins were divided into two types according to the results of both solubility prediction and refolding experiments. Fourteen proteins were predicted to have the dependency of soluble expression. The refolding yields of these inclusion bodies were up to 70%. Twenty-nine proteins were predicted to have the high dependency of insoluble expression, and their refolding yields could be higher than 70% and lower than 60%. Comparison of the characteristics between the proteins with high and low refolding yields showed that the theoretical pI was significantly different (P<0.05). Conclusions Harrison's two parameter prediction model has the value for potential application in classification of the inclusion bodies and prediction of solubility of proteins refolded from different inclusion bodies. This a novel method enhances the efficiency of high throughput refolding of inclusion bodies, and suggests that the theoretical pI of the proteins is an important parameter in the prediction of refolding yields.     

CDR3谱型分析在肿瘤研究中的应用进展

肿瘤特异性T细胞通过其表面T细胞受体(Tcell receptor,TCR)识别肿瘤,进而杀伤肿瘤细胞,其所介导的细胞免疫在机体抗肿瘤免疫应答中发挥极其重要的作用.寻找肿瘤特异性T细胞克隆是当前肿瘤研究领域的热点,而应用最广泛、最灵敏地寻找肿瘤特异性T细胞的方法是通过基因扫描(Ge-neScan)对TCR互补决定区3(complementary deter-mining region 3,CDR3)谱型进行分析.     

胎头高直后位难产94例临床分析

胎头高直后位是严重的头位难产之一,对母儿危害很大,易发生滞产、先兆子宫破裂或子宫破裂,致胎儿窘迫、新生儿窒息甚至死亡。因此,一旦确诊即行剖宫产术,以免危及母儿安全。本文回顾分析94例高直后位的临床经过,