T细胞受体二次重排的基础与临床

重组激活基因(RAG)能被诱导再次表达引起T细胞受体(TCR)二次重排,进而在TCR库的形成和丰富中发挥重要作用.二次重排发生于外周者称为受体修正(receptor revision),发生于中枢者则称为受体编辑(receptor editing).研究发现,TCR编辑/修正可存在于肿瘤、感染、移植及自身免疫等疾病状态下,且与疾病发生有密切联系.目前,国内外已有学者利用动物模型或人类细胞研究TCR编辑/修正,并对其机制进行了初步探索.     

检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立

目的：建立检测人T细胞TCR BD基因（Diversity Gene）经历重排的连接介导PCR方法（Ligation．MediatedPCR，LM-PCR），为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法：在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列（RSS）前，BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物；设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头（BW Linker），提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）外周血单个核细胞（PBMC）样本总DNA，和BW-linker连接，进行巢式PCR，PCR产物琼脂糖电泳分析，阳性产物做胶回收，并克隆测序鉴定。结果：在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端，在2例T-ALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端，2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端，阳性的LM-PCR产物通过测序鉴定，和基因组中序列完全相符合。结论：1例胸腺组织和2例T-ALL的PBMC中检测到RSS断裂末端，提示TCRBD基因正经历重排，测序结果表明建立的监测TCR重排的LM-PCR方法可靠，可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。     

肝外伤89例临床分析

我院自 1991年 1月至 1998年 8月共收治肝外伤患者 89例 ,现结合国内外文献 ,将肝外伤的处理体会总结如下。1　临床资料1.1　病例组成　本组 89例中男 6 8例 ,女2 1例 ,年龄 3～ 5 7岁。损伤原因中车祸伤5 7例 ,坠落伤 7例 ,刀刺伤 11例 ,挤压、钝器伤 14例。开放性损伤 11例 ,闭合性损伤78例。损伤部位在剖腹探查的 78例中 ,肝右叶损伤 49例 ,左叶 2 1例 ,左右叶 8例。89例中 71例次合并其它脏器损伤 ,其中脑外伤 8例 ,胸外伤 13例 ,四肢及骨盆骨折15例 ,肠破裂 11例 ,脾破裂 14例 ,肾破裂3例 ,腹膜后血肿 5例 ,胰十二指肠损伤 2例。肝外伤…     

免疫相关GTP结合蛋白2的亚细胞定位分析

目的 对免疫相关GTP结合蛋白2(GTPase of immunity-associated protein 2,GIMAP2)进行亚细胞定位分析,为深入研究GIMAP2蛋白的功能奠定基础.方法: 使用国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库查询获取GIMAP2的蛋白序列,再利用生物信息学在线分析工具对GIMAP2蛋白的跨膜结构,核定位信号(nuclear localization signal,NLS),核输出信号(nuclear export signal,NES)及亚细胞定位进行分析预测.采用PCR技术扩增GIMAP2基因片段,并插入至pQCXIP-mCherry-N1表达载体,用氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆.测序正确的重组质粒pQCXIP-GIMAP2-mCherry经过提取,纯化步骤后,与逆转录病毒包装质粒VSVG,Gag/Pol在脂质体介导下共同转入HEK293FT细胞中进行病毒包装.转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436.使用免疫荧光染色方法检测内,外源性GIMAP2在MDA-MB-436胞内表达定位情况.使用绿色荧光化学染料分别标记稳定表达GIMAP2-mCherry融合蛋白的MDA-MB-436活细胞中的线粒体,内质网,脂滴,在超分辨率显微镜N-SIM下观察其与红色荧光的GIMAP2蛋白的定位情况.结果: 生物信息学分析数据显示,由337个氨基酸组成的GIMAP2蛋白在羧基端可能有2个跨膜螺旋结构,其中跨膜螺旋含预期氨基酸数为 40~41个,紧随跨膜螺旋结构之后的蛋白结构朝细胞质侧;羧基端第279~281位氨基酸有NES但无NLS;可能定位在内质网.测序结果表明,成功构建表达载体pQCXIP-GIMAP2-mCherry.荧光染色结果证实,GIMAP2-mCherry融合蛋白成功在MDA-MB-436细胞内表达,并与内源性GIMAP2定位一致,分布于内质网和脂滴.结论: 免疫相关GTP结合蛋白2定位于内质网和脂滴,可能与脂代谢相关.     

人血管内皮生长因子受体Flt—l胞外配体结合域的筛选及其结构分析

目的 应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt－1胞外最小配合结合域。方法 采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1cDNA,分别含胞外第2、1、－2、2－3和1－3个loop,构建酵母双杂交系统配合表达质粒,并将pGB59／hVEGF165与pGAD424／Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526。采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β－半乳糖苷酶活性分析。结果 Flt－1胞外loop2－3与loop1-3的配体结合能力相关不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合域－2－3loop,这对研制分子量更小、安全性高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义。     

毛细支气管炎患儿血清中补体水平变化及其临床意义

目的探讨毛细支气管炎患儿血清补体C3、C4值的变化及其临床意义。方法测定42例毛细支气管患儿血清C3、C4值，同时测定20例健康儿童血清C3、C4值。结果毛细支气管炎患儿血清C3水平显著降低（P〈0．01），而C4值无明显改变。结论毛细支气管炎发病机制中有变态反应因素的参与，对指导临床治疗有一定的意义。     

外伤性脾破裂的治疗

目的 探讨外伤性脾破裂的治疗方法.方法 对128例脾破裂病例进行回顾性总结分析.结果 2例因合并重要脏器损伤术后死亡,余病例均治愈出院.结论 创伤性牌破裂的治疗应遵循"抢救生命第一,保留脾脏第二"的原则,依据伤情采取手术、非手术方法,及时处理合并症,疗效满意.     

8h之外医护工作质控方法探讨

目的寻求8h之外医护工作合理的质控方法,提高医疗质量。方法将自行设计的8h之外医护工作记录单应用于医护工作中进行试验,试验期4个月。结果应用8h之外医护工作记录实验组质控方法优于对照组。结论 8h之外医护工作记录单的应用是控制8h之外医护医疗质量的好方法。