化脓性感染金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行型别分析

目的分析2017年上半年西京医院化脓性感染金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行型别,为临床合理用药提供依据。方法收集2017年1—6月分离自化脓性感染患者脓性分泌物样本的金黄色葡萄球菌,采用Vitek 2 Compact全自动微生物鉴定系统进行菌株鉴定及药物敏感性试验,采用多位点序列分型(MLST)联合spa分型方法进行分子流行病学分型。结果共分离金黄色葡萄球菌171株,其中社区感染113株,医院感染58株。医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率(62.07%)明显高于社区感染(30.97%)。分子分型结果显示,医院感染和社区感染MRSA分别以ST239-t030和ST239-t037为主。结论 2017年上半年西京医院化脓性感染金黄葡萄球菌医院感染和社区感染在多个方面存在明显差异。MRSA克隆型别相对比较集中,医院感染存在院内播散现象。应加强医院感染控制力度,降低医院感染发生率。     

ICU患者分离金黄色葡萄球菌的耐药性及分子流行病学特征

目的了解某院重症监护病房（ICU）金黄色葡萄球菌的耐药特点及分子流行病学特征。方法收集2014年1—12月该院ICU分离的金黄色葡萄球菌,进行细菌鉴定及药物敏感性试验,采用金黄色葡萄球菌A蛋白(spa)分型及多位点序列分型(MLST)方法进行分型。结果160株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）120株（占75.00%）。MRSA对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐药率均＞80%;MSSA对头孢唑林敏感,对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星的耐药率分别为62.50%、35.00%、10.00%。spa分型和MLST结果显示,120株MRSA主要为ST239 t030、ST239 t037、ST5 t2460 3种型别,其中ST239 t030（105株,87.50%）为主要流行菌株,8个ICU均有检出;MSSA存在较多型别,ST59 t437仅在神经内科(8株)和消化科（2株）检出,ST6 t701、ST398 t3625、ST398 t1793和ST121 t2092分别仅在神经内科（7株）、麻醉科（5株）、神经外科（4株）和心外科（4株）检出。结论该院ICU MRSA分离率较高,以ST239 t030克隆株为主,存在医院内流行;不同型别MSSA在各科室内存在流行趋势。     

自噬相关基因Beclin-1的克隆及原核表达载体的构建

目的 克隆并构建自噬相关基因Beclin-1原核表达载体.方法 根据Beclin-1编码区DNA序列设计引物,用前列腺癌细胞LNCaP作为模板进行RT-PCR,扩增Beclin-1编码区全基因片段,与pQE-80质粒连接后进行测序鉴定.结果 RT-PCR扩增出Beclin-1目的基因,限制性内切酶证实其已插入表达质粒中,DNA测序证实Beclin-1编码区全基因片段与GenBank公布的相应基因核苷酸序列的同源性为完全一致.结论 成功克隆并构建了自噬相关基因Beclin-1原核表达载体,为研究Beclin-1蛋白的细胞自噬作用奠定了基础.     

转染bcl-2基因对心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的:研究转染抗凋亡基因bcl-2对心肌细胞凋亡的影响. 方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血/再灌注模型;提取含有人bcl-2基因的逆转录病毒真核表达载体pDOR-SB质粒,用脂质体介导的基因转染法将pDOR-SB质粒转染心肌细胞. 实验分3组:正常对照组、模拟缺血/再灌注组和基因转染组;计算台盼蓝摄取率,测定肌酸磷酸肌酶活性,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况. 结果:在正常对照组未发现细胞凋亡,而在缺血再灌注组细胞凋亡明显增多,台盼蓝摄取率和肌酸磷酸肌酶活性明显增加(P<0.01),转染bcl-2基因组心肌细胞凋亡明显减少. 结论:细胞凋亡参与了心肌缺血/再灌注损伤,转染bcl-2基因可减少缺血/再灌注中的心肌细胞凋亡.     

免疫抑制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型的建立及病理分析

目的:建立侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,探讨免 疫抑制宿主曲霉菌病致病机制.方法:以甲基强的松龙为免 疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行 计数.双侧鼻孔滴注烟曲霉菌孢子引起侵袭性肺烟曲霉菌病, 不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析.结果:糖皮 质激素注射后小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数 量明显减少[(6.33±1.76)×106vs(3.18±0.57)×106, P<0.01],脾细胞和外周血淋巴细胞数量下降(P<0.01);病 理切片可见免疫抑制小鼠感染烟曲霉菌后肺组织大量烟曲 霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿.结论:成功建立了免疫抑 制小鼠侵袭性肺烟曲霉菌病动物模型,为研究免疫抑制宿主 易于感染烟曲霉菌的致病机制以及疾病的发生发展奠定基 础.     

聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用

目的 建立聚合酶链反应快速检测加德纳菌方法,用于细菌性阴道病的诊断和治疗。方法 根据加德纳菌基因序列中IIS-23srRNA基因区设计并合成特异性引物,应用聚合酶链反应扩增阴道或宫颈分泌物中的加德纳菌,并与革兰染色和分离培养进行对照检测。结果 经对阴道加德纳菌和5种常见的阴道感染病原体检测,证实所用引物具有较高的特异性;敏感性实验结果10^2可扩增出明显的区带;在50例宫颈分泌物标本中,革兰染色阳性检出率为18%（9/50）、分离培养阳性检出率为16%（8/50）,聚合酶链反应阳性率为28%（14/50）。结论 采用聚合酶链反应检测阴道分泌物中的加德钠菌,用于细菌性阴道病的快速诊断,有可能成为细菌性阴道病实验室诊断的主要检测方法。     

成年人群血清胱抑素C与同型半胱氨酸水平升高的疾病谱分析

目的 探讨并分析成年人群血清胱抑素C(Cys-C)和同型半胱氨酸(Hcy)升高的疾病谱.方法 选取空军特色医学中心711例住院和门诊患者,于Beckman AU2700全自动生化分析仪上同时检测Cys-C和Hcy,检测方法分别为免疫比浊法和循环酶法;采用回顾性分析的方法统计所有人群的疾病诊断信息,按照高血压、肿瘤、心脑...     

顺行性或逆行性改变:肌萎缩性侧索硬化的磁共振研究

目的 结合磁共振波谱成像(MRSI)、扩散张量成像技术(DTI)及MRI对肌萎缩性侧索硬化(ALS)进行对照研究,观察ALS皮质脊髓束(CST)走行区的代谢以及水分子运动的变化规律,探讨CST是否有顺、逆行性变化.资料与方法 采用MRI、MRSI及DTI技术对12例ALS患者和12名正常志愿者进行扫描,观察测量中央前回皮层下白质(SWM)、半卵圆中心(CS)、内囊后肢(PIC)、侧脑室体旁白质(PV)和大脑脚(CP)等5个CST不同解剖平面的氮-乙酰天门冬氨酸(NAA)与肌酸(Cr)比值,各向异性比(FA值)以及平均扩散率(MD值),分析比较ALS 患者和正常对照组以及不同侧别FA值、MD值以及NAA/Cr值的变化.结果 ALS的FA值较正常对照组明显降低(P＜0.001),在CST走行区的SWM、CS、PV 和 PIC平面,ALS组的FA值较正常组明显降低(P＜0.05或P＜0.01), MD值在ALS组有升高的趋势,但无统计学意义.在SWM和PV平面,ALS的NAA/Cr值较正常组降低明显(P＜0.05).FA值和MD值分别在PV和CP有左高右低的变化(P＜0.05).结论 MRSI与DTI相结合能够早期定量探测ALS患者CST的改变,左侧SWM可能为最先发生改变的区域,CST的改变可能为顺行性改变,在不同的平面改变不对称.     

免疫磁珠与荧光定量PCR联合检测乳制品中阪崎肠杆菌的实验研究

[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.