血清微小RNA(miR-129-3p、miR-767-3p和miR-877)在结直肠癌诊断中的价值

目的:探讨血清微小RNA (microRNA,mi RNA)在结直肠癌诊断中的价值.方法:通过miRNA表达谱芯片检测7例结直肠癌患者血清和10例健康志愿者血清中差异表达的miRNA.应用实时荧光定量PCR法在40例结直肠癌患者血清和18例健康志愿者血清中验证芯片结果,并分析血清特异性miRNA在结直肠癌诊断中的价值.结果:筛选获得10个在结直肠癌中特异性表达的血清miRNA,实时荧光定量PCR验证后获得一组结直肠癌特异性血清miRNA(miR-129-3p、miR-767-3p及miR-877*)生物标志物,这组生物标志物组合检测结直肠癌的灵敏度为77.78％、特异度为100％,并可产生最大受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.914.结论:miR-129-3p、miR-767-3p和miR-877*生物标志物组合有望成为结直肠癌筛查和早期诊断的指标.     

羧肽酶A1全酶及其肽段的分泌表达及活性测定

抗体导向酶一前体药物疗法(antibody-directed enzyme prodrug therapy,ADEPT)自1987年由Bagshawe等提出以来,其研究受到广泛关注[1-2].     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

EHF患者尿中γ—谷氨酰转肽酶的动态变化

作者对23例流行性出血热(EHF)患者在不同病期的尿r—谷氨酰转肽酶(r—GT,EC2.3.2.2)及尿肌酐(Cr)进行了动态观察,同时做了95例正常对照.结果r—GT的正常对照值为6.72±2.44u/mgCr;EHF患者在发热期为10.39±3.26u/mgCr,低血压休克期为36.94±18.46μ/mgCr,两期与正常值相比均有显著差异(P<0.001);少尿期为5.19±3.15μ/mgCr,多尿期和恢复期为7.32±2.33u/mgCr,三期与正常值相比均无明显差异(P>0.05)。提示,测定尿γ—GT水平可为EHF患者早期肾功能损害程度的估计、临床分期和预后判断提供一个客观指标,并对EHF的早期诊断有一定意义。     

HBV与HCV的融合与联合基因免疫效果的研究

目的 对比融合重组质粒CSpcDNA3.1单独注射,与SpcDNA3.1 CpcDNA3.1联合注射的免疫效果。方法 大量提取质粒后免疫小鼠,剂量为每次150μg,按0、2和4wk,共免疫3次。免疫后第1、3、5和7wk采血,用ELISA方法检测抗HBs和抗HCV抗体;用LDH法检测免疫小鼠脾细胞CTL的杀伤功能。结果 无论从抗HBs和抗HCV抗体出现的时间、阳转率和应答强度,还是CTL水平,CSpcDNA3.1融合重组质粒都优于CpcD-NA3.1 SpcDNA3.1联合基因的免疫。结论 融合DNA疫苗,有望成为慢性病毒性肝炎预防和治疗的制剂。     

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的 观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌增殖的抑制作用。方法 大鼠气道平滑肌细胞原代培养，4－12代用于实验。利用Lipofectin将正义、反义及错配c-myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞，MTT法检测不同寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用，RT－PCR检测c-myc mRNA的表达，免疫组织化学染色检测c-myc蛋白的表达。结果 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖，且这种抑制作用呈浓度依赖性；反义c-myc寡核苷酸可降低c-myc mRNA的表达，同时降低了c-myc mRNA的翻译。结论 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌的增殖。     

端粒酶RNA特异性核酶抑制卵巢癌细胞端粒酶的活性

目的：研究端粒酶RNA特异性核酶对卵巢癌细胞活性的抑制作用。。方法：用脂质体法将构建好的核酶逆转录病毒载体转染至卵巢癌HO－8910细胞，以MTT比色法检测细胞的生长，应用流式细胞仪分析细胞周期细胞，观察细胞的增殖情况，同时扩增端粒重复序列，结合杂交分析，检测细胞的端粒酶活性。结果：MTT检测发现转染核酶后的细胞生长的潜伏期延长（48→72h），对数生长期减缓（4→5d），流式细胞仪结果显示其G1期比例明显增高（70．0％→80．5％，P＜0．01），S期细胞比例明显降低（19．0％→13．7％，P＜0．01），细胞增殖下降，细胞的端粒酶活性亦降低。结论端粒酶RNA特异性核酶能抑制卵巢癌细胞粒酶活性，抑制细胞增殖。     

HBsAg/HCcAg融合表达细胞系的建立

目的 建立融合表达HBV表面抗原与HCV核心蛋白的体外培养细胞系，使之作为细胞杀伤实验的靶细胞。方法 将含HBV S和HCV C融合基因真核表达质粒CSpcDNA3.1用电穿孔法转染p815细胞，G418筛选后，再用有限稀释法进行单细胞克隆筛选。RT－PCR与免疫荧光法分别检测基因转录与蛋白表达。结果 HBV S基因与HCV C基因的RT－PCR检测均为阳性，HBV表面抗原与HCV核心蛋白的免疫荧光检测均为阳性。结论 成功获得融合表达HBV表面抗原与HCV核心蛋白的细胞系。     

构建由缺氧反应元件修饰的hTERT核心启动子引导FCY1基因表达的复制缺陷型腺病毒

目的：构建由缺氧反应元件串联重复体修饰的人端粒酶逆转录酶（hTERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒。方法：人工设计缺氧反应元件串联重复序列，克隆后插入hTERT启动子上游并经测序证实。将修饰后的hTERT启动子和酵母胞嘧啶脱氨酶基因FCY1插入穿梭质粒，与辅助质粒共转染HEK293细胞，重组产生复制缺陷型腺病毒。结果：获得了由3倍和6倍缺氧反应元件修饰的hTERT核心启动子引导FCY1基因表达的复制缺陷型重组腺病毒。结论：基于Cre重组酶／loxP的腺病毒载体构建系统操作简便、重组效率高。     

抗LPS—HDL McAb的交叉反应性

目的：制备具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。方法：以内毒素－高密度脂蛋白（ＬＰＳ－ＨＤＬ）复合物作为包被抗原，筛选抗ＬＰＳ的ＭｃＡｂ；采用间接ＥＬＩＳＡ法鉴定其交叉反应性；以竞争抑制试验和被动溶血试验分析交叉反应的特异性。结果：用ＬＰＳ－ＨＤＬ筛选获得３株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为７５％（３／４）；以ＬＰＳ筛选出１株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为１１．１％（１／９）。结论：用ＬＰＳ－ＨＤＬ包被做ＥＬＩＳＡ，有利于筛选出具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。