重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌细胞因子的影响.方法 原核表达并纯化重组HBHA,N端缺失HBHA(HBHA-ΔN)、C端缺失HBHA(HBHA-ΔC)三种蛋白,用以刺激A549细胞,并设置阴性对照,观察A549细胞分泌细胞因子的情况.结果 rHBHA蛋白可以显著提高A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ的水平,而HBHA-△N和HBHA-△C蛋白对A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ和IL-10的作用无显著影响.结论 rHBHA能够促进IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ分泌,N端和C端缺失后促进作用减弱.提示HBHA在诱导自然免疫以及抵抗结核菌感染中具有重要作用.     

肺炎链球菌毒力相关基因licC的活性研究

目的:克隆、表达肺炎链球菌LicC及LicC3′端25个氨基酸缺失片段(记作△LicC)基因;分析、比较目标蛋白活性,证实LicC部分缺失对其活性的影响。方法:通过基因重组技术构建重组质粒pQE80-licC、pQE80-△licC,转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,自建生物荧光技术测定酶活性。结果:成功构建重组表达载体,获得可溶性LicC和LicC截短体蛋白,活性测定表明LicC截短体活性显著低于LicC(P0.05)。结论:自建生物荧光技术测定LicC活性准确、可靠;证实LicC3′端25个氨基酸对其活性有重要影响;提示抑制LicC活性有可能成为一种有效的杀灭耐药肺炎链球菌的措施。     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

基于生物信息学分析的AK001058在胃癌中的作用及机制探讨

目的 探讨AK001058在胃癌发生发展中的上下游调控机制。方法 利用生物信息学分析的方法，于多个数据库或网站(lncLocator、UCSC、lncatlas、ensembl、Genome Browser、NCBI、CHIP-Seq及AnnoLnc)进行数据搜索汇总。结果 AK001058全长1 631bp,是位于编码蛋白基因之间的LncRNA,定位于染色体5 p13.3(chr5:33,523,536-33,525,166),亚细胞定位主要在胞浆；与AK001058有有相互作用的基因有ADAMTS12和FOXC2-AS1,均与胃癌发生密切相关；与AK001058有相互作用的蛋白有CTCF和HNRNPA2B1,而HNRNPA2B1与胃癌关系密切；在上游调控中AK001058受5个转录因子的调控：EBF1、Egr-1、MafF、MafK和FOXA1,FOXA1亚细胞定位主要在细胞浆，与胃癌的关系更加密切；多种miRNA家族(miR-15abc/16/16abc/195/322/424/497/1907、miR-218/218a、miR-101/101ab、miR-144等)可与AK00...