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精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:精原干细胞移植对男性不育的治疗具有潜在的临床应用价值,但移植后干细胞体内迁移、增殖、分化的过程目前尚不完全清楚.目的:观测精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化过程.方法:以出生后6~10 d的雄性C57BL/6小鼠为供体,通过复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取精原干细胞;以出生后6周的雄性C57BL/6小鼠为受体,腹腔注射白消安,破坏其内源性生精功能.实验组采用曲细精管微注射法将供体精原干细胞移植入受体睾丸内,对移植后细胞进行PKH26-GL荧光追踪分析,观察其体内迁移过程,以Western Blot和RFQ-PCR法检测睾丸组织α6-Integrin,c-kit,SCF蛋白及mRNA的变化.以未接受化疗和细胞移植的正常同系生小鼠作为阳性对照组,以单侧睾丸曲细精管微注射移植细胞递质作为阴性对照组.结果与结论:PKH26-GL荧光追踪移植细胞,移植后1周部分精原干细胞已向曲细精管基底膜迁移,移植后1个月精原干细胞已从曲细精管管腔迁移至曲细精管基底膜,并分裂增殖,移植后3个月曲细精管管腔内可见大量精子细胞形成.移植后1,2,3个月,各组α6-Integrin,c-kit蛋白表达均呈增加趋势(P < 0.01),阴性对照组、实验组SCF蛋白表达有增加趋势(P < 0.05);各组α6-Integrin,c-kit,SCF mRNA的表达均有增加趋势(P < 0.05).提示大剂量化疗后,生精上皮内仍存在一定数量的Sertoli细胞,这种精子发生的微环境并未完全破坏,外源性精原干细胞移植后能在受体Sertoli细胞所提供的微环境中增殖和分化. 相似文献
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目的:探讨环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的作用及对PCA3基因表达的影响。方法:不同浓度环巴胺(1、5、10、15μmol/L)干预LNCaP细胞,以只加入RPMI 1640培养液为空白对照组,分别在不同作用时间(24、48、72h),用MTT法检测其对细胞增殖的抑制、流式细胞术观察细胞凋亡率变化、Hoechst染色观察凋亡细胞形态变化、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)观察对PCA3基因表达的影响。结果:5、10、15μmol/L环巴胺对LNCaP细胞增殖均有显著抑制作用,与空白对照组相比差异有显著性(P0.01),10μmol/L组于48h达到半数抑制量(IC50);10、15μmol/L组24、48、72hLNCaP细胞的凋亡率分别为37.21%、57.38%、57.98%和21.16%、71.31%、72.90%,与空白对照组相比差异均有显著性(P0.01)。随着环巴胺浓度增大和作用时间的延长,LNCaP细胞凋亡显著增加。PCA3基因的表达随着环巴胺浓度的上升呈现明显的递减趋势,较空白对照组显著降低(P0.01)。浓度为10μmol/L时,不同作用时间PCA3基因的表达均极低。结论:环巴胺浓度为10、15μmol/L作用48、72h时能够明显抑制LNCaP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并显著下调LNCaP细胞PCA3基因的表达。 相似文献
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精原细胞分离纯化方法的建立及其免疫化学鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
我们通过程序性复合酶消化结合差速贴壁及非连续性Pereoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞,探讨精原细胞的分离纯化方法,并对纯化后细胞进行免疫化学鉴定。 相似文献
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目的探讨E-Cadherin、β-catenin蛋白在肾透明细胞癌(RCCC)组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化方法对62例肾透明细胞癌和10例正常肾组织进行E-Cadherin、β-catenin蛋白检测。结果 RCCC组织中,E-Cadherin、β-catenin蛋白异常表达率分别为67.7%(42/62)和77.4%(48/62),二者表达之间具有显著相关性(P<0.01)。E-Cadherin、β-catenin蛋白的异常表达与RCCC病理分级和临床分期呈正相关(P<0.05)。E-Cadherin、β-catenin蛋白的异常表达在侵袭转移组和非侵袭转移组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E-Cadherin、β-catenin蛋白低表达或异常表达与肾透明细胞癌的分化、恶性程度有关,并对肾透明细胞癌预后评价有一定参考意义。 相似文献
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背景:精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。目的:观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。方法:采用两步酶消化法获取出生4~6d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。结果与结论:单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显(P<0.05)。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。 相似文献
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目的:利用i TRAQ蛋白质质谱分析技术检测各年龄阶段小鼠精原干细胞(SSCs)蛋白的表达,进一步分析SSCs标志物表达的动态变化,运用生物信息学蛋白质组数据库筛选并发现新的标志物。方法:以健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象,按照鼠龄不同分为8组,无菌提取各组小鼠睾丸组织,采用复合酶消化、免疫磁珠分选(MACS)的方法纯化SSCs后提取蛋白,利用双向电泳及蛋白质质谱分析技术并结合蛋白质数据库对各组蛋白质进行分析鉴定。结果:质谱实验共得到谱图248 510张,通过Mascot软件进行分析,共鉴定到1 132种蛋白。以蛋白丰度差异倍数达到1.2倍以上,且经统计学检验P0.05视为存在差异性蛋白,8组共检测到差异蛋白298种。鉴定到目前已知的SSCs标志物9种(PCNA、GFRα1、CDH1、Annexin A7、UCHL1、VASA、CD49f、CD29、PLZf),通过各组对比获得在不同鼠龄段内表达变化趋势,其中GFRα1、CD49f、CD29在SSCs中的变化趋势与以往文献一致,并筛选出10种蛋白质(P63、CD71、CD98、K19、ACE、K18、K15、K17、SH2、SH3)作为SSCs标志物进一步研究的对象。结论:SSCs内的蛋白随着小鼠鼠龄的变化表达存在差异,i TRAQ蛋白质质谱分析技术可以对SSCs蛋白质组学信息进行分析与比较,获得各鼠龄阶段差异性表达蛋白,为进一步分析和研究这些差异性蛋白的功能与作用提供了新的方法。 相似文献