反义表皮生长因子受体可调控表达型质粒的构建及意义

反义表皮生长因子受体可调控表达型质粒的构建及意义王洪涛陈宝雯纪保安贾博琦谷青马清钧△（北京医科大学第一医院消化科，北京１０００３４△中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所分子遗传室）通过反义表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔ...     

霍乱毒素及其亚单位的单克隆抗体研究

一、抗霍乱毒素(或其亚单位)单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立:本文报道以福尔马林脱毒的CT-B免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤Sp 2/0细胞融合。筛选到一株能产抗CT-B单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为AE 72-26。CT-B免疫组的试验中,获得4株能产抗体的杂交瘤细胞系,但效价很低,且兼有抗CT-A、抗CT-B抗体。     

我国乙型肝炎adw亚型基因组酶切图谱分析

用单酶切、双酶切及末端标志方法对从我国分离的乙型肝炎病毒(HBV)DNA作了限制性酶切分析,并绘制了该DNA的酶切图谱.结果表明,有些酶切位点与目前国外报道的同一亚型的DNA是相同的;而有些酶切位点却不完全一致.这对于研究该病毒的致病机理和研制其疫苗也许具有重要意义.     

重组人内皮抑素滴眼液抑制小鼠角膜新生血管形成的研究

目的　检验重组人内皮抑素对角膜新生血管形成的抑制效果,探索其临床应用价值。 方法　用MTT方法检验重组内皮抑素对血管内皮细胞的增殖抑制活性;用重组人内皮抑素滴眼液,治疗小鼠角膜碱烧伤导致的角膜新生血管形成。 结果　重组人内皮抑素 10μg/mL时可抑制bFGF刺激下HUVEC的增殖,抑制率达到 42 1% (P<0 05); 100μg/mL的内皮抑素可抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,治疗 7d时新生血管长度较未治疗组减少 30 9%(P<0 01),新生血管化面积减少了 13 7% (P<0 01)。 结论　内皮抑素特异地抑制血管内皮细胞增殖,抑制碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成,可能成为临床上预防、治疗相关眼科疾患的药物。     

热休克蛋白65增强小鼠对HBV DNA 疫苗免疫反应的研究

目的:观察热休克蛋白65的真核表达载体(pHSP65)对HBV DNA疫苗诱导BALB/c小鼠(H-2d)免疫应答的调节作用。方法:肌内注射空载体pcDNA3,HBV DNA疫苗加HSP65佐剂(pHBVS2S pHSP65)或不加佐剂(pHBVS2S);ELISA法测定血清抗HBs抗体;ELISPOT检测分泌IFN-γ的脾淋巴细胞;4 h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTLs活性。结果:HBV DNA佐剂组免疫小鼠抗HBsAg抗体滴度虽高于不加佐剂组,但无显著性差异;其IgG1/IgG2 a的比例不同于多肽免疫组,二者分别为0.395与10。佐剂组小鼠分泌IFN-γ的脾淋巴细胞量是不加佐剂组的2~3倍。CTLs细胞杀伤活性(E∶T=100)佐剂组与不加佐剂组分别为:(53.68±7.5)%、(42.81±7.7)%,差异显著(P<0.05)。结论:HBV DNA疫苗具有较强的免疫原性,能够诱导机体产生特异性的抗体及CTLs反应;HSP65佐剂能够有效提高小鼠对DNA疫苗的细胞免疫应答,有望成为DNA疫苗的免疫佐剂。     

不同地区人群SARS血清流行病学调查

目的分析严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)流行期间不同地区人群及SARS临床诊断病例血清特异性抗体(SARS-CoV IgG)变化规律以及健康人群是否存在隐性感染。方法采用酶联免疫方法(ELISA)及间接免疫荧光法(IFA)，对香港、澳门、北京、广州地区1453名健康人及广州和北京地区257例SARS临床诊断病例进行血清SARS—CoV IgG抗体检测，并跟踪检测患者病后不同时间(发病3～270d)血清抗体变化情况。结果4个地区健康人群(包括160名密切接触者)中，用ELISA法检出2例SARS—CoV IgG抗体阳性，阳性者进一步用IFA检测则为阴性；广州地区200名健康体检者同时采用ELISA和IFA检测，结果均为阴性。ELISA和IFA同时检测257例临床诊断病例发病20d后的血清SARS—CoV IgG抗体，2种方法检出的阳性率均为90％。ELISA法跟踪检测257例临床诊断病例发病后3～270d血清IgG抗体，抗体滴度在发病后4～6个月内随时间延长逐渐升高，多数病人抗体在第4～6个月达到高峰，并持续到第8个月，部分病人抗体达高峰后开始下降，但至第9个月仍阳性。结论健康人群中隐性感染率极低，血清SARS—CoV IgG抗体在病程后期有诊断价值，血清特异性抗体可持续9个月以上。     

121粘膜免疫

粘膜免疫系统由于其特殊的位置、极其重要的作用形成了与外周免疫系统迥然不同的解剖学结构、淋巴细胞和免疫反应分子机制,本文介绍了粘膜免疫系统的性质并对口服耐受和粘膜疫苗的发展进行探讨.     

分泌表达rhOPG-HSA融合蛋白的毕赤酵母菌株的构建

目的：将骨保护素（osteoprotegerin,OPG）与人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）基因融合,以构建高效分泌表达的巴斯德毕赤酵母菌株。方法：通过RT-PCR扩增OPG基因,构建pHILD2-HSA-OPG质粒,并对HSA-OPG分泌表达产物进行了ELISA检测。结果：pHILD2-HSA-OPG表达质粒经鉴定与测序证明正确,并在毕赤酵母GS115中能够实现较高表达。结论：成功构建了高效分泌表达重组骨保护素融合蛋白（rhOPG-HSA）的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

HeLa细胞中编码人组织型纤溶酶原激活物K2P结构域突变体cDNA的克隆及特性

组织型纤溶酶原激活物(t-PA)在人体纤溶系统中发挥着重要作用。基因重组t-PA已被用于急性心肌梗死等血栓性疾病的溶栓治疗。另外,t-PA还与肿瘤浸润和转移等多种过程有关,因此对t-PA进行功能结构研究具有重要应用价值和理论意义。本实验用RT-PCR方法从豆蔻酰佛波醇乙酯(phorbol myristate acetate,PMA)处理的HeLa细胞扩增并克隆获得了人t-PA K2P结构域的编码cDNA。序列分析显示该序列含有两个碱基突变,分别导致了成熟蛋白分子两个氨基酸践基序列的改变。第263位密码子突变(ACC→GCC)导致Thr~(263)→Ala~(263),另一突变(CTG→CCG)导致Leu~(485)→Pro~(485)。两个突变分别位于K2和P结构域的连接区和P区。将此含有突变的K2Pt-PA cDNA重组到原核表达载体,在大肠杆菌中获得了表达。纤维蛋白平板法检测显示重组K2Pt-PA复性后具有纤溶活性。以上结果表明HeLa S3细胞表达一种具有纤溶活性的t-PA突变体。     

重组人白细胞介素-2的研制

白细胞介素-2(Inter leukin2,IL-2)是由辅助性T淋巴细胞产生的一种淋巴因子,它作为一种免疫活性物质通过对杀伤细胞的诱导、扩增和分化等介导机体免疫系统,具有抗肿瘤、抗病毒和抗感染等作用。临床资料显示它用在诸如黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的治疗,已取得了较好的效果。