一种高效转染西藏小型猪胚胎成纤维细胞的方法

目的应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比研究,比较两种方法的转染效率。结果转染5 h后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80%,远远高于脂质体转染的方法。结论用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。     

西藏小型猪与国内家猪细胞色素b氨基酸序列的比较研究

目的西藏小型猪Cyt b氨基酸序列进行分析,研究其遗传分化及其与部分国内家猪的亲缘关系。方法提取西藏小型猪的全基因组DNA,设计引物扩增Cyt b基因,测序后将碱基序列转换为氨基酸序列并进行比对分析。结果Cyt b氨基酸序列分析表明,西藏小型猪与欧洲猪有三个位点氨基酸存在着差异,其中在295位点,大部分A型西藏小型猪与欧洲猪同为缬氨酸(V),而B型和少部分A型为异亮氨酸(I)。结论显示国内家猪与西藏小型猪有很近的亲缘关系。同时西藏小型猪群体内存在分化,mtDNA控制区的结构变化与功能基因的结构变化存在相关性。     

实验动物学考试试卷质量分析与评价

为了客观地评价实验动物学教学质量和教学效果,发现教学中存在的薄弱环节及问题。随机选择2005级硕士研究生考试试卷50份进行统计分析。试卷的考试成绩分布呈近似正态分布,难度系数为0.78,区分度0.21,信度为0.55。考试成绩稳定可靠,基本能反映学生的学习水平。同时分析存在的问题,需适当提升试卷难度,调整部分试题,进一步提高试题质量。     

C基因型HBV转基因小鼠的制备

目的: 建立C型HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供实验动物模型.方法: 采用受精卵显微注射法,制备HBV转基因小鼠,用PCR,ELISA,荧光定量PCR和免疫组化的方法研究HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况.结果: 注射受精卵2840枚,筛选注射后成活的受精卵共2256枚,注射成活率79.4%.注射后受精卵共移植假孕雌鼠85只,其中有42只怀孕,假孕雌鼠妊娠率49%,共产下F0代小鼠168只,PCR检测共有14只小鼠阳性,其中ELISA检测血清HBsAg阳性5只,HBeAg均阴性.荧光定量PCR血清HBV DNA显示,2只小鼠的拷贝数分别为3.12×105copies/L,1.98×105copies/L,经传代产下F1代小鼠61只,PCR检测HBV DNA阳性5只,ELISA检测HBsAg阳性4只,其中肝脏HBsAg免疫组化阳性2只,HBcAg均阴性,且肝组织表达HBsAg为胞浆型.结论: 构建的C型HBV基因不但可以在转基因小鼠体内进行复制表达,而且可以遗传给下一代小鼠.     

SPF级和普通级新西兰兔主要脏器系数的比较

目的测定3月龄SPF级和普通级新西兰兔的主要脏器系数，并进行对比研究。方法选用3月龄SPF级和普通级新西兰兔各30只（♂15只，♀15只），用电子天平分别测定心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胃、睾丸、附睾和子宫的脏器系数。结果（1）SPF级新西兰兔的主要脏器系数与普通级新西兰兔的相比，除了肾上腺的脏器系数二者之间差异不显著之外（P〉0．05），前者其余主要脏器的脏器系数均显著低于后者（P〈0．01）；（2）SPF级新西兰雄兔除了肝、脾、肾的脏器系数显著高于雌兔之外（P〈0．01），雄兔其余脏器的脏器系数与雌兔相比差异均不存在显著性（P〉0．05）。结论不同环境条件和饲养管理对SPF级和普通级新西兰兔主要脏器系数有一定影响。     

FMMU白化豚鼠心电图分析

观测１００例普通级ＦＭＭＵ白化豚鼠在麻醉状态下的心电图,结果表明：①ａＶＲ导联和部分ａＶＬ导联主波向下,各波倒置,其余导联主波向上,各波直立。②有明显ＳＴ段。③与３０例普通三色豚鼠心电图比较,两者无明显差异。     

医学实验动物学教学改革浅见

医学实验动物学教学改革是该新兴学科一项主体过程,教学改革的成败直接关系到教学任务的完成,教学目标的实现以及教学质量的提高,为了适应医科院校教学发展的要求,教研室从人员的配制,课时的调整,教学内容的安排以及多媒体课件应用进行必要的探索。     

生长分化因子5基因转染诱导骨髓基质干细胞分化的研究

目的 探讨人生长分化因子5(GDF5)基因转染对骨髓基质干细胞(BMSCs)生长及分化的影响.方法 采用脂质体介导法将GDF5基因导人人BMSCs,通过MTT法和流式细胞仪分别检测细胞增殖能力和细胞周期,在光镜和电镜水平观察细胞形态,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法榆测GDF5和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白质的表达.柠檬酸铅法检测细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR法检测骨钙素mRNA表达.结果 GDF5在转染细胞内得到稳定表达,转染细胞的增殖能力和细胞周期与未转染细胞基本一致.光镜下转染细胞中多角形细胞相对增多,排列方式不规则.电镜下转染细胞核呈不规则形,细胞器丰富.转染细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达阳性,骨钙素mRNA表达阴性.结论 GDF5基因脂质体法转染BMSCs成功,转染细胞仍保持正常生长增殖特性.GDF5可诱导BMSCs向软骨表型分化,GDF5基因修饰的BMSCs可作为软骨组织上程的候选种子细胞.     

我国小型猪的研究现状

小型猪（Miniature Pig；Sus Scorfadomestica）在分类学上与普通家猪相同，同属于哺乳纲，偶蹄目，不反刍目，野猪科，猪属动物。由于其在解剖学、生理学特性、营养代谢、疾病发生机理等方面与人类极为相似，已在生物医学领域中得到广泛应用。20世纪50年代初，美国首先推出明尼苏达小型猪，到80年代又培育出更小的米尔他微型猪，以适应医药试验的需要。