南蛇藤醇提物对类风湿关节炎滑膜增生和软骨侵蚀及降解的抑制作用

目的 观察南蛇藤醇提物对类风湿类关节炎(RA)滑膜组织增生和软骨侵蚀及降解的作用并探讨其机制,为RA的新药研究提供依据.方法 将RA患者的关节滑膜和正常关节软骨移植到NOD/SCID小鼠体内建立人RA滑膜-软骨-NOD/SCID鼠嵌合体模型(NOD/SCID-HuRAg),4周后分别给予蒸馏水、南蛇藤醇提物(30 mg/d)及来氟米特(500μg/d)灌胃,每日1次,持续4周.评价移植物中的滑膜增生、滑膜细胞对软骨的侵蚀和软骨细胞周围软骨降解的组织学积分,放免法检测血清TNF-α含量.原位杂交法观察滑膜的TNF-αmRNA表达,TUNEL法观察滑膜的细胞凋亡程度,自动图像分析系统分析结果.结果 滑膜和软骨在SCID鼠体内生长良好,南蛇藤醇提物及来氟米特能显著降低滑膜增生(分别为2.00±0.76,2.25±0.89 vs 3.63±0.52)、软骨侵蚀(1.69±0.80,2.00±1.36 vs 3.75±0.53)和软骨降解(1.88±0.83,2.13±0.83 vs 3.63±0.74)的积分,并显著降低血清TNF-α含量(0.84±0.09,0.83±0.12 vs 0.99±0.11,ng/ml).二种药物均显著增加了滑膜细胞的凋亡,南蛇藤醇提物还显著下调了滑膜组织中TNF-α的表达水平.结论 南蛇藤醇提物能抑制SCID-HuRAg模型的滑膜增生,减轻滑膜的软骨侵蚀和软骨细胞介导的软骨降解,其作用的机制包括抑制RA滑膜组织的TNF-α的产生和促进滑膜细胞凋亡.南蛇藤醇提物的作用效果与来氟米特相似,但在抑制RA滑膜TNF-α表达方面南蛇藤醇提物强于来氟米特.     

一种高效转染西藏小型猪胚胎成纤维细胞的方法

目的应用Nucleofector II核转染仪将外源基因EGFP导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs),并与脂质体转染的方法进行比较,寻求一种高效转染猪胚胎成纤维细胞的方法。方法使用Lonza公司的Nucleofector II核转染仪,参考已报道的转染程序与相应的转染试剂,将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入西藏小型猪PEFs,并与脂质体转染的方法进行对比研究,比较两种方法的转染效率。结果转染5 h后,核转染仪组镜下即可见绿色荧光,转染效率高达80%,远远高于脂质体转染的方法。结论用Nucleofector II核转染仪能实现西藏小型猪PEFs的高效转染,为高效制备转基因克隆西藏小型猪提供了可靠的方法。     

C基因型HBV转基因小鼠的制备

目的: 建立C型HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供实验动物模型.方法: 采用受精卵显微注射法,制备HBV转基因小鼠,用PCR,ELISA,荧光定量PCR和免疫组化的方法研究HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况.结果: 注射受精卵2840枚,筛选注射后成活的受精卵共2256枚,注射成活率79.4%.注射后受精卵共移植假孕雌鼠85只,其中有42只怀孕,假孕雌鼠妊娠率49%,共产下F0代小鼠168只,PCR检测共有14只小鼠阳性,其中ELISA检测血清HBsAg阳性5只,HBeAg均阴性.荧光定量PCR血清HBV DNA显示,2只小鼠的拷贝数分别为3.12×105copies/L,1.98×105copies/L,经传代产下F1代小鼠61只,PCR检测HBV DNA阳性5只,ELISA检测HBsAg阳性4只,其中肝脏HBsAg免疫组化阳性2只,HBcAg均阴性,且肝组织表达HBsAg为胞浆型.结论: 构建的C型HBV基因不但可以在转基因小鼠体内进行复制表达,而且可以遗传给下一代小鼠.     

实验动物学考试试卷质量分析与评价

为了客观地评价实验动物学教学质量和教学效果,发现教学中存在的薄弱环节及问题。随机选择2005级硕士研究生考试试卷50份进行统计分析。试卷的考试成绩分布呈近似正态分布,难度系数为0.78,区分度0.21,信度为0.55。考试成绩稳定可靠,基本能反映学生的学习水平。同时分析存在的问题,需适当提升试卷难度,调整部分试题,进一步提高试题质量。     

西藏小型猪与国内家猪细胞色素b氨基酸序列的比较研究

目的西藏小型猪Cyt b氨基酸序列进行分析,研究其遗传分化及其与部分国内家猪的亲缘关系。方法提取西藏小型猪的全基因组DNA,设计引物扩增Cyt b基因,测序后将碱基序列转换为氨基酸序列并进行比对分析。结果Cyt b氨基酸序列分析表明,西藏小型猪与欧洲猪有三个位点氨基酸存在着差异,其中在295位点,大部分A型西藏小型猪与欧洲猪同为缬氨酸(V),而B型和少部分A型为异亮氨酸(I)。结论显示国内家猪与西藏小型猪有很近的亲缘关系。同时西藏小型猪群体内存在分化,mtDNA控制区的结构变化与功能基因的结构变化存在相关性。     

不同影响因素对热原实验中兔筛选的影响

目的 分析不同影响因素对新西兰兔的初次筛选合格率、二次筛选合格率的影响.方法 根据2005版《中国药典》进行测定.结果 初次筛选结果中,不同季节、体重值、性别、湿度新西兰兔的筛选率都有显著性差异,筛选时间在7～9月、体重值为1.7 ～2.0 kg、雄性的新西兰兔、在湿度为61～70％的条件下初次筛选率较高；在二次筛选结果中,不同季节、室温、湿度条件下新西兰兔的筛选率都有显著性差异,筛选时间在1～3月、在室温为22.1 ～ 23.0℃、湿度为61 ～70％的条件下新西兰兔的二次筛选率较高.结论 在不同影响因素的条件下,新西兰兔的初次筛选合格率、二次筛选合格率均受到影响.     

含草本提取物染发剂的慢性毒性及致癌性研究

目的研究一种含草本提取物染发用终产品可能的慢性毒性及致癌性效应,并对其作出安全性评价。方法大鼠经口给予2 000、1 000和500 mg/kg·bw·d某品牌洗染香波,持续104周。产品中所含的染发剂有效成份为P-苯二胺1. 4%、间苯二酚0. 4%、苯基甲基吡唑啉酮0. 2%、4-氨基-2-羟基甲苯0. 175%、2,4-二氨基苯氧乙醇HCl 0. 15%和N,N-双(2-羟乙基)-p-苯二胺硫酸盐0. 1%。另外还含黑桑果、苏木皮、墨旱莲、五倍子、枸杞果、山茱萸果、何首乌根、地黄根和人参根等提取物共2%。结果大鼠一般生理体征、行为、皮毛等各剂量组与对照组比较无明显改变;前期食物利用率及体重略低于对照组,后期无明显差异;除52周雌性高剂量组与对照组比较,肾及肾体比指标升高外,雌雄动物其他脏器指标、血液学及血液生化学指标未见有生物学意义改变;各剂量组与对照组比较,各器官组织各类型肿瘤发生率、恶性肿瘤发生率、多发性肿瘤及肿瘤发生时间差异无统计学意义。结论受试样品104周经口慢性毒性试验的最大无有害作用剂量(NOAEL)值为1 000 mg/kg·bw;受试样品对SD大鼠的致癌性结果为阴性。     

大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的表达

目的 构建携带大鼠瘦素(Leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。 方法 提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素 cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素 cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用SpeⅠ和EcoRⅤ双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-Leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin 及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。 结果 测序证实瘦素基因与GenBank 提供的原始序列完全一致。 重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5x1012 vg/ml纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA--Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP 感染鼠神经元细胞5天后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。 结论 成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。     

自体骨膜细胞复合胶原涂层煅烧骨修复骨缺损的实验研究

目的：观察骨膜成骨细胞（periosteal-derived osteoblast.POB)与胶原涂层煅烧骨（true bone ceramic collage,TBCc)移植的成骨性能，探讨治疗骨缺损的新方法。方法：选牛松质骨制备胶原涂层煅烧骨载体。用兔骨膜成骨细胞与TBCc复合并自体移植到15mm骨缺损模型，移植后4、8、12、16周取材，行组织学、X线拍片和X射线能谱分析，计算机图像分析新生骨面积。结果：复合细胞的TBCc组骨生成、新骨面积和骨连接情况明显优于单纯TBCc组。结论：自体骨膜细胞复合煅烧骨具有较强的促进骨修复作用。     

基金论文优先优惠发表

尊敬的作者：为了使优秀论文能够尽快发表，2006年起本刊将对基金论文采取优先优惠政策，各级基金项目的论文在同等条件下优先发表。国家级基金论文发表费优惠50％，省部级基金论文发表费优惠30％，厅局级基金论文发表费优惠15％。各级基金项目须附相应证明材料的复印件和加盖公章的单位证明。