烧伤创面渗液sTNFR I,sTNFRⅡ的变化

烧伤创面愈合过程中,通过一定程度的炎症反应,能清除坏死组织,分泌生长因子,有利于创面愈合.炎症反应的过度与不足均会影响创面愈合的进展.TNF对炎症反应的启动、调节等作用不容忽视.TNF作用需通过其受体的介导,而可溶性TNF受体(sTNFR)能中和TNF,进而起到调节炎症反应的作用.本实验通过检测人烧伤创面渗液不同时期中的sTNFR I,sTNFR Ⅱ,以期观察它们与创面愈合的关系.     

抗苗勒管激素及体质量指数与多囊卵巢综合征患者控制性促排卵结局的相关性分析

目的探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者血清抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)及体质量指数(body mass index,BMI)与接受体外受精(in vitro fertilization,IVF)/卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)-胚胎移植(embryo transfer,ET)助孕过程中控制性促排卵结局的相关性。方法372例首次接受IVF/ICSI-ET助孕的PCOS患者均行控制性促排卵治疗,根据获卵数分为A组111例(获卵数≤10枚),B组156例(获卵数10~20枚),C组105例(获卵数≥20枚),采用Pearson相关分析法分析获卵数与控制性促排卵前血清AMH、BMI等的相关性。结果 C组MⅡ卵子数[(25.26±7.61)个]、2PN卵裂数[(15.77±7.36)个]及可利用胚胎数[(10.17±5.84)个]均高于B组(14.46±3.98)个、(9.96±3.83)个、(6.35±2.56)个]和A组[(7.51±2.35)个、(4.46±2.27)个、(3.62±1.75)个](P0.05),B组高于A组(P0.05);C组控制性促排卵前BMI[(23.23±3.22)kg/m~2]、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)[(7.25±3.29)u/L]、促性腺激素(gonadotropins,Gn)启动量[(111.07±21.39)u]均低于A组[(25.47±3.95)kg/m~2、(10.61±5.56)u/L、(125.68±27.31)u]和B组[(24.91±4.34)kg/m~2、(9.41±5.51)u/L、(126.44±24.96)u],血清AMH[(12.72±4.78)mg/L]高于A组[(8.56±4.74)mg/L]和B组[(9.43±4.76)mg/L](P0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P0.05),3组年龄、控制性促排卵前促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、Gn使用时间、Gn总量比较差异均无统计学意义(P0.05);Pearson偏相关分析结果显示,获卵数与控制性促排卵前AMH呈正相关(r=0.548,P0.001),与控制性促排卵前LH及BMI呈负相关(r=-0.439,P=0.001;r=-0.426,P=0.026),AMH与BMI呈负相关(r=-0.217,P=0.016),LH与AMH、BMI无明显线性相关(r=0.154,P=0.088;r=-0.023,P=0.803)。结论血清AMH水平与PCOS患者IVF/ICSI-ET助孕过程中控制性促排卵结局呈正相关,BMI与控制性促排卵结局呈负相关。     

未成熟卵母细胞冻存

随着人类辅助生殖技术的发展,人未成熟卵母细胞的冷冻技术因其特有优势得到了较多的关注,研究数据支持未成熟卵母细胞冻存是保存女性生育力的一种有临床应用前景的方式。冷冻和复融过程会对卵母细胞造成一系列形态结构、细胞代谢、生理生化及发育潜能的影响。作为一个较新的方向,未成熟卵母细胞的冷冻技术缺乏标准方案,很多相关研究成果尚存在争议。本文着重未成熟卵母细胞冷冻技术的意义、优势、影响因素等方面的新观点予以综述。     

α-硫辛酸对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性的抑制作用

目的探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在体外条件下采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸处理大鼠系膜细胞;噻唑蓝法(MTT)测定系膜细胞增殖;采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果50~300μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖。HG刺激系膜细胞1h可引起NF-κB活性增强2·2倍(P<0·01),高糖诱导的NF-κB的活化可被α-硫辛酸(200μmol/L)所抑制(0·6±0·3vs2·2±0·2,P<0·01)。结论一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低NF-κB的DNA结合活性。     

应用免疫磁珠负选法分离与纯化小鼠骨髓间充质干细胞

目的:拟建立体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞的新方法,从而得到高纯度的骨髓间充质干细胞。方法:实验于2002-09/2005-03在解放军第二军医大学附属长海医院烧伤科实验室完成。①选取清洁级7d龄FVB/N小鼠15只,利用免疫磁珠法(CD11b负选)从小鼠的骨髓细胞中分离纯化骨髓间充质干细胞:颈椎脱臼处死后无菌条件下取出小鼠双侧股骨,消毒离断后去除上清及脂肪层,吹打成单细胞悬液后接种于培养基中。贴壁细胞达到90%左右融合后,用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸进行消化,将悬浮的细胞与CD11b抗体避光反应2min,移入已预置入磁场的LD管,不加压通过,收集管中的细胞成分,用培养基重悬并吹打成单细胞悬液后以1×109L-1～2×109L-1的密度接种于培养基中培养。②培养传代后流式细胞仪检测细胞周期、表面标记物,并利用诱导剂观察其定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞的能力。结果:①细胞形态学观察:免疫磁珠法获得的细胞几乎无圆形细胞夹杂,贴壁率高,形态单一呈典型成纤维样、漩涡状生长,体外增殖迅速。②细胞生长曲线绘制情况:细胞贴壁后一两天为细胞生长缓滞期,之后进入对数增长期,六七天后进入平台期。③细胞周期分析结果:G0/G1期细胞约86%,S G2 M期约14%。④细胞表面标记物检测结果:第3代骨髓间充质干细胞3%表达CD45,68.7%表达CD29,3%表达CD34,89.6%表达CD105。⑤骨髓间充质干细胞向脂肪细胞与成骨细胞定向分化情况:在地塞米松、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、吲哚美辛等诱导剂作用下,脂肪细胞 成骨细胞诱导组细胞第5天开始油红O染色显示细胞核呈蓝色,细胞内脂滴呈橙色;在β-甘油磷酸钠、2-磷酸-抗坏血酸等诱导剂的作用下,第10天开始AKP染色显示细胞内有致密颗粒形成,VonKossa染色显示钙盐沉积。结论:本实验通过免疫磁珠法(CD11b负选)成功地从FVB/N小鼠骨髓细胞中分离纯化出骨髓间充质干细胞。根据表面标记物的检测结果提示该法获得的细胞纯度高、周期性慢、多分化潜能,符合干细胞特性。     

大鼠烫伤后早期转化生长因子β1/Smads信号通路的活化

1材料与方法 1.1 主要试剂来源 一抗:小鼠抗大鼠β肌动蛋白单克隆抗体(美国Sigma公司),山羊抗大鼠磷酸化Smad 2/3多克隆抗体、兔抗大鼠Smad 3多克隆抗体(美国Santa Cruz公司);二抗:辣根过氧化物酶(HRP)标记的驴抗兔或山羊多克隆抗体(美国Santa Cruz公司),HRP标记的山羊抗小鼠多克隆抗体(美国Calbiochem公司).     

应激性溃疡大鼠胃黏膜中核因子κB信号通路的活化情况

目的观察核因子κB(NF-κB)信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜中的活化情况。方法采用浸水-束缚应激的方法制作大鼠应激性溃疡模型。应激前(0min)及应激5-360 min过程中设不同时相点处死大鼠,共9组,每组5只。采用凝胶电泳迁移分析(EMSA)法检测大鼠胃黏膜NF-κB与DNA的结合活性,蛋白质印迹(Western blot)法检测胃黏膜核因子抑制蛋白(hoBs)降解水平,RNA印迹杂交(Northern blot)法检测胃黏膜NF-κB下游效应分子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)1β、细胞因子诱导中性粒细胞化学趋化因子(CINC)1、细胞间黏附分子(ICAM)1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达水平。结果应激处理15 min内可见大鼠胃黏膜NF-κB迅速呈双相模式活化,其峰值出现于应激45 min和360 min,分别为应激前正常水平的(10．6±1．3)倍和(8．9±1．2)倍(P<0.01);抗体supershift实验结果表明,活化的NF-κB主要为p50／p65异二聚体。NF-κB活化第1相和第2相分别伴有明显的IκBα和IκBβ降解。应激15-30 min时TNF-α、IL-1β、CINC-1和ICAM-1基因转录明显上调,iNOS基因上调发生在应激30-90 min时,应激360 min时这些基因表达仍持续增加。结论NF-κB信号通路活化发生于浸水-束缚应激大鼠应激早期的胃黏膜中,可能在胃黏膜促炎性基因的过度表达中发挥了重要作用。     

重组人表皮细胞生长因子对Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用

外用人表皮细胞生长因子是否能够促进Ⅱ度烧伤创面愈合，目前尚有争议。笔者通过随机双盲试验进一步临床观察重组人表皮细胞生长因子对烧伤创面愈合的促进作用。方法５６例患者被分为两部分，第１部分１９例浅Ⅱ度创面患者进行３种不同浓度ｒｈＥＧＦ的疗效比较，第２部分３７例患者在第１部分研究结果基础上选取最适用药浓度进行随机双盲研究所有病例采用自身对应创面对照。分别观察创面痊愈５０％，８０％愈合时间，以及伤后１０天     

严重烧伤大鼠精氨酸治疗的实验研究

为探讨精氨酸在严重烧伤治疗中的意义，采用大鼠３０％ＴＢＳＡⅢ度烧伤模型，观察并分析了严重烧伤大鼠外周血Ｔｈ／Ｔｓ比值的变化及精氨酸对该变化的调节作用和对大鼠存活率的影响。结果表明：①严重烧伤后第３天起即有Ｔｈ／Ｔｓ比值的下降，第１０天下降最为明显。②精氨酸能防止烧伤后Ｔｈ／Ｔｓ比值下降，这种作用在伤后第５天起就比较显著。③精氨酸能提高伤后动物的存活率。提示严重烧伤后补充精氨酸是增强机体免疫力和抗感染能力，提高存活率的有效的治疗手段。     

烧伤患者血浆IL-10水平的变化

目的:探讨严重烧伤患者血浆白细胞介素(IL-10)水平变化及其和烧伤后全身感染的关系.方法:收集19例严重烧伤患者血浆,利用ELISA法测定血浆中IL-10水平.结果:烧伤后患者血浆IL-10水平急剧升高,且升高幅度与烧伤程度有关.非脓毒症患者血浆IL-10水平在伤后7 d降至正常,而脓毒症组患者急剧升高.3例死于脓毒症患者血浆IL-10持续在高水平状态.结论:烧伤能诱导机体产生IL-10;过高的IL-10可能与烧伤后感染有关.