辐射诱发胸腺淋巴瘤Kras基因的表达及其启动子甲基化

目的： 研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA和蛋白表达的变化,并检测其启动子CpG岛甲基化状态,探讨辐射致癌的发生机制。方法：采用X射线照射30只BALB/c小鼠,建立胸腺淋巴瘤动物模型,取胸腺淋巴瘤和正常胸腺组织,分别提取总mRNA、合成cDNA和总蛋白,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blotting法分别检测Kras基因mRNA和蛋白表达水平,采用硫化测序PCR (BSP)法检测Kras基因启动子CpG岛甲基化状态。 结果：RT-PCR法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA相对表达水平明显高于正常胸腺组织（P<0.01）;Western blotting法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因蛋白表达水平高于正常胸腺组织近1.41倍;BSP法检测,正常胸腺组织Kras基因启动子有4个CpG位点发生甲基化,而辐射诱发胸腺瘤Kras基因启动子有1个CpG位点发生甲基化,呈去甲基化状态。结论：电离辐射可能通过Kras基因启动子去甲基化而引起Kras基因mRNA和蛋白表达水平改变,进而导致肿瘤的发生,其可能是辐射致癌的发生机制之一。     

DNA甲基化与电离辐射效应

随着人类基因组计划的完成,表观遗传学开始成为关注的热点.DNA甲基化是研究最早且较深入的表观遗传学标志之一.越来越多的研究表明,DNA甲基化在肿瘤的发生及演进过程中起着重要的作用.笔者着重综述了DNA甲基化及电离辐射诱导的DNA甲基化改变,探讨在辐射致癌表观遗传学机制研究中的作用.     

survivin与X射线诱导的染色体不稳定性

目的 探讨survivin基因在X射线诱导染色体不稳定性中所起的作用。方法 用免疫细胞化学的方法检测survivin蛋白在HeLa细胞中的表达水平，并通过转染小片段发卡状RNA干扰HeLa细胞中survivin蛋白表达。转染后细胞接受4Gy X射线照射，用流式细胞术检测照后0、4、12和48h的多倍体细胞发生率，并与单纯接受4Gy X射线的对照组相比较。结果 转染小片段发卡状RNA能够有效抑制HeLa细胞中survivin蛋白表达，转染48h抑制率达到32．16％。细胞接受4Gy X射线照射后，多倍体细胞所占比例在48h时高于对照组（P〈0．001）。而抑制survivin蛋白表达后，多倍体细胞所占比例于12和48h明显升高，大约是对照组的2倍以上。结论 X射线照射可以诱导HeLa细胞发生染色体不稳定性。干扰survivin表达可以加强该效应，因而survivin在维持染色体稳定性方面发挥着重要作用。     

DNA甲基化与电离辐射效应

随着人类基因组计划的完成,表观遗传学开始成为关注的热点.DNA甲基化是研究最早且较深入的表观遗传学标志之一.越来越多的研究表明,DNA甲基化在肿瘤的发生及演进过程中起着重要的作用.笔者着重综述了DNA甲基化及电离辐射诱导的DNA甲基化改变,探讨在辐射致癌表观遗传学机制研究中的作用.     

X射线全身照射后脾细胞内[Ca2+)]i对Con A反应性的变化

目的 研究电离辐射对ConA激活的脾细胞内游离钙离子[Ca²⁺]i)动员的影响, 以探讨电离辐射免疫抑制作用的发生机理。方法 采用Fura2/AM双波长荧光测定法检测了X射线全身照射后的小鼠脾细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性的变化。结果 小鼠接受0、0.5、1、2、4和6Gy吸收剂量的X射线全身照射后24小时, 脾细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性呈剂量依赖性下降, 表现为[Ca²⁺]i上升幅度减小、上升至峰值时间延长。2GyX射线全身照射后的时程观察表明, 照后2小时细胞内[Ca²⁺]i对ConA反应性开始下降, 24小时达最低点, 照后5天才略有回升。结论 电离辐射所致免疫功能抑制与其抑制淋巴细胞内[Ca²⁺]i动员等信息传递过程有关。     

粘蛋白1在外阴鳞癌中的表达及意义

目的:探讨粘蛋白1(MUC1)在外阴上皮内非瘤样病变、外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法对50例VSCC、35例VIN、20例外阴上皮非内瘤样病变、10例正常外阴表皮进行研究,同时将MUC1的表达与外阴肿瘤的临床病理特征相比较。结果:MUC1蛋白在VSCC中表达及阳性细胞率高于VINⅢ、VINⅡ(P<0.05),在VINⅠ-Ⅱ和正常表皮无表达;MUC1阳性细胞率在高与中/低分化的VSCC中差异显著(P<0.05)。MUC1表达与VSCC病人的年龄、临床分期和淋巴结转移无统计学差异(P>0.05)。结论:MUC1没有参与正常外阴鳞状上皮细胞的生长和分化过程;无论细胞有无异型性,MUC1的表达与细胞的增殖活跃有关;MUC1的表达与外阴癌变有关,可能是外阴癌前病变的晚期事件;MUC1表达与外阴鳞癌的分化程度呈负相关。     

蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的：观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法：卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg•L^-1)，采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率，集落形成法检测肿瘤细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：200、400和800 mg•L^-1-1组, SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11，明显低于对照组（84.00±5.29）(P<0.01)；与空白对照组比较，400 mg•L^-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少（P<0.01），G₂+M期细胞明显增多 (P<0.01)， 800 mg•L^-1组SKOV3细胞G₂+M期细胞数明显减少（P<0.01），G₁期细胞数有增多趋势；与空白对照组比较，400 和800 mg•L^-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。结论：在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长，其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G₂+M和G₁期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。     

KPNB3基因多态性与精神分裂症的关系

目的：证实中国人群KPNB3基因与精神分裂症的关系。方法：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，检测中国汉族精神分裂症患者和其健康父母双亲的组成的304个核心家系成员位于KPNB3基因上的2个单核苷酸多态性 （SNPs）rs2588014和rs626716。利用拟合优度χ²检验分析基因型分布频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，应用UNPHASED软件包进行2个SNPs的传递不平衡检验（TDT）、单倍型分析和连锁不平衡程度的测量。结果：rs626716和rs2588014等位基因和基因型频率分布，患者组和其父母组比较差异均无显著性，符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。 传递不平衡检验（TDT）结果显示，rs626716位点杂合子父母传递给患病子女的等位基因存在传递不平衡性（χ²=9.31，P =0.002 3）；rs2588014位点杂合子父母的2个不同等位基因传递给患病子女的致病等位基因概率未偏离50% (χ²=3.44，P=0.064)。单倍型分析显示，在患病子女中rs2588104(C)- rs626716(C) 单倍型传递与未传递的频率分布比较差异有显著性（χ²=9.8，P =0.006 8）。结论： 在中国北方汉族人群中，KPNB3基因多态性可能与精神分裂症的发生有关。     

枸杞抗辐射损伤作用

目的探讨枸杞抗辐射损伤的作用。方法将30只昆明小鼠随机分成3组,每组10只,正常对照组、辐射对照组生理盐水灌胃,枸杞组进行枸杞溶液灌胃,1次/d,连续7d。除正常对照组外,另2组动物均在灌胃结束后进行全身一次性照射,总剂量2.0Gy,然后检测外周白血细胞数、骨髓微核率和骨髓细胞增殖活性。结果枸杞组小鼠外周血白细胞（WBC）为（8.10±0.88）×10^9/L,骨髓嗜多染红细胞微核率为（2.61±0.34）‰,骨髓细胞增殖活性A值为0.34±0.07,各项指标与辐射对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论枸杞可以升高外周血白细胞数,降低微核率,提高骨髓细胞增殖活性,具有抗辐射损伤作用。     

离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射对caspase-3蛋白表达的影响。方法：采用体外传代培养的小鼠EL-4淋巴瘤细胞为实验材料；采用单克隆抗体免疫荧光标记，FACScan流式细胞仪(FCM)检测蛋白表达的变化；采用PI荧光标记及FCM测定细胞凋亡的变化；量效实验, 观察0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的变化；时效实验, 观察4.0 Gy照射后2、4、8、12、24、48及72 h EL-4细胞caspase-3蛋白表达的变化。结果：量效实验表明，0.5、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。0.5、1.0及4.0 Gy 照射后24 h EL-4细胞凋亡明显增高，与假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.05或P<0.01)。 时效实验表明，4.0 Gy照射后8、12及24 h EL-4细胞中caspase-3蛋白表达均明显增高, 与同时间点假照射对照组比较，差异具有显著性 (P<0.01或P<0.001)。结论：电离辐射可诱导EL-4细胞caspase-3蛋白表达增高。同时诱导EL-4细胞凋亡。