HAb27单抗可变区基因克隆和序列测定

ＨＡｂ２７单抗可变区基因克隆和序列测定杨萍，刘彦仿，胡川闽，陈志南，隋延仿，陈苏民，高磊，陈南春，杨安钢利用ＰＣＲ技术从杂交瘤细胞ｃＤＮＡ中直接扩增出抗体可变区基因，为重组抗体导向治疗打下基础。我们用异硫氰酸胍－酚－氯仿法从分泌抗人肝癌单抗的杂交瘤细...     

FPLC法纯化单克隆抗体中的热原质控制

ＦＰＬＣ法纯化单克隆抗体中的热原质控制刘成刚，陈志南，刘智广，隋延仿，米力（第四军医大学病理教研室，西安７１００３２）单克隆抗体技术的发展为肿瘤的临床诊断和体内定向治疗提供了新的手段。应用于体内诊断和治疗的单克隆抗体（ＭＣＡｂ）除纯度、活性等指标符合...     

~(131)I-labelled anti-hepatoma monoclonal antibodies in targeting therapy of hepatoma xenografts in nude mice

Anti-hepatoma monoclonal antibodies HAb8,HAb18 IgG and HAb18 F(ab')_2were labelled with[~(131)I]according to chloramine T method.The labelling rate andradioactivity were 51% and 9.58×10~4Bq/mg,respectively.After administration of the[~(131)I]-labelled conjugates through mouse tail vein,hepatoma xenografts were clearly im-aged,Localization index was 2.15,3.09,and 6.99 for HAb8,HAb18 IgG and HAb18F(ab')_2,respectively.A total of 16 hepatoma-bearing nude mice(SMMU-LTNM)were di-vided into 4 groups.When xenografts reached 0.3cm in diameter,the treatment was be-gun by injection of the[~(131)I]-conjugates through mouse tail vein.After 2 weeks of treat-ment,obvious inhibitory or killing effects on the xenografts were found.The tu-mor-bearing mice were killed during the period from 14 to 21d after treatment.Xenografts as well as other organs were sampled and viewed under light microscope ac-cording to routine procedure.The vital organs,such as heart,liver,spleen,lung,kidneyand brain showed no pathological lesions.In hepatoma xenografts,some tumor cellmembranes were found,with obscure cytoplasmic structure and increased eosinophilia,representing necrotic alterations.     

肝癌“双弹头”免疫导向药物的实验研究

以肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８为载体，用葡聚糖作桥的间接交联方法和氯胺Ｔ法，同时将阿霉素和＾１３１Ｉ连接到ＨＡｂ１８上，制备出“双弹头”肝癌免疫导向药物＾１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ。其免疫结合率为４３．５％。细胞毒实验结果显示，＾１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ对靶肿瘤细胞ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤效果较单独应用ＡＤＭ相同浓度的ＨＡｂ１８－ＡＤＭ和比较放射性相同的＾１３１Ｉ－ＨＡｂ１８时，有明显的增强     

肝癌单克隆抗体HAb_(23)在荷人肝癌裸鼠体内显像及放射自显影定位

作者用同位素碘标记的肝癌单克隆抗体HAb_(23),在荷肝癌裸鼠体内进行同位素显像,光镜和电镜的放射自显影定位,得到了比较满意的结果。 1 材料和方法 1.1 抗体纯化及同位素标记 含HAb_(23)抗体的腹水经50％中性饱和硫酸铵沉淀1次,通过DE-52层析柱得到纯化的IgG.HAb_(23) IgG用氯胺T碘化法标     

制备抗原肽所用宫颈癌细胞培养方法的建立及HLA表达的检测

目的 探讨制备抗原肽所用宫颈癌细胞的培养方法及检测其HLA的表达。方法 先利用CO2孵箱和普通培养瓶进行培养，测定其生长状况，然后流式细胞仪检测HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，再用免疫荧光法检测不同浓度IFN-γ对Hela细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达和IFN-γ对不同培养时间Hela细胞HLA分子的表达。结果 IFN-γ能够明显提高对数生长期的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子的表达，而IFN-γ刺激前后Hela细胞HLA-Ⅱ类分子的表达均为阴性。结论 本方法可缩短细胞培养时间，利用IFN-γ诱导细胞提高HLA-Ⅰ类分子的表达，为提供制备抗原肽所用宫颈癌细胞奠定了基础。     

人MAGE-1基因的克隆、原核表达及其抗体的制备

目的 获得MAGF-1蛋白，制备其多克隆抗体。方法 采用RT-PCR方法从人肝细胞癌HepG2中克隆MAGE-1基因，构建其原核表达质粒，并进行原核表达与蛋白分离纯化。免疫动物，制备MAGE-1的抗血清。经固化GST蛋白的Sephamse 4B交叉吸收后，采用琼脂双扩实验和ELISA方法检测其效价和特异性。结果 所得MAGE-1 cDNA序列与GeneBank中公布的一致。构建了MAGE-1194-309 aa片段的原核表达质粒pGEX-MAGE-1，经诱导及分离纯化，得到-M1约42000的融合蛋白。免疫动物，分离血清，经交叉吸收后，琼脂双扩及ELISA实验结果显示多克隆抗体能够与MAGE-1蛋白特异性结合。结论本研究成功地获得MAGE-1蛋白，制备的抗MAGE-1多克隆抗体，经交叉吸收后能够特异性地与MAGE-1蛋白结合，为研究MAGE-1在肿瘤诊断和免疫治疗中的应用提供了实验条件。     

肝细胞癌HLA-DR抗原的表达及干扰素对其增强作用

目的　探讨人白细胞 DR抗原 (HL A- DR)在人原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )的表达情况 ,以及干扰素 (IFN)对其调节作用 .方法　分别采用免疫组化 ABC法和流式细胞仪检测 HL A- DR在 46例人肝癌组织和 4种培养的人肝癌细胞系 (SMMC- 772 1,HCC- 92 0 4,BEL- 740 2和 HHCC)的表达情况 ,并用 EL ISA法分别检测 IFN-γ或 IFN-α刺激前后 HL A-DR在上述 4种肝癌细胞系以及正常人肝细胞系 QZG的表达情况 .结果　 39.1% (18例 / 46例 )的肝癌组织肿瘤细胞可表达 HL A- DR,而在癌旁非肿瘤细胞均为阴性 ;4种肝癌细胞系都基本不表达 HL A- DR;IFN- γ或 IFN- α刺激之后 ,上述 5种细胞系的 HL A- DR表达都有所增强 ,并且 QZG不如肝癌细胞明显 ,IFN-γ的作用强于 IFN-α.结论　肝癌组织在一定程度上可表达 HL A- DR,但是培养的肝癌细胞系基本上不表达 ;IFN可以上调肝癌细胞对 HL A- DR的表达 .     

间隙连接蛋白Cx32在肝细胞肝癌、肝硬变及病毒性肝炎中的表达

探讨细胞间隙连接蛋白Ｃｘ３２在肝细胞肝癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＨＣＣ）及其癌旁肝、肝硬变（ｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓ,ＬＣ）病毒性肝炎（ｖｉｒａｌｈｅｐａｔｉｔｉｓ,ＶＨ）和正常肝组织中的表达和意义。