MAGE-n的原核表达与分离纯化

目的　构建MAGE n的原核表达质粒 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并通过谷胱甘肽巯基转移酶 (GlutathioneS trans ferse,GST)纯化系统进行分离纯化。方法　用ANTHEPROTV5 .0软件预测MAGE n的生物学特性 ,从中选择抗原性及特异性较强的一段。利用PCR方法扩增MAGE n基因片段 ,连入原核表达载体pGEX 4T 1,构建MAGE n的原核表达质粒pGEX MAGE n并测序。将该质粒转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化。结果　成功地扩增了MAGE n基因片段 ,测序结果表明与GenBank公布的序列一致 ,成功地构建了pGEX MAGE n原核表达质粒 ,含有该质粒的大肠杆菌经异丙基 β D 半乳糖苷 (Isopro pyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后表达一Mr 约为 4 30 0 0的蛋白 ,经GST融合蛋白纯化系统纯化 ,得到了MAGE n的重组蛋白。结论　首次获得了新的肿瘤抗原MAGE n的重组蛋白 ,并进行分离纯化 ,为进一步研究MAGE n抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础     

肝癌细胞CD80表达与MHC-I分子的关系

研究共刺激分子ＣＤ８０在肝癌细胞中的表达与ＭＨＣ－１（Ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ）分子相互关系，，以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排以应中共刺分子对抗的提呈机制的影响。方法：通过逆转录病毒载体介导，将ＣＤ８０基因转入肝癌细胞系ＨＨＣＣ，以流式细胞仪检测其表面ＭＨＣ－Ｉ分子的表达情况。同时检测ＬＡＫ细胞转染前后的细胞的杀伤效果。结果：表达ＣＤ８０的肝癌细胞基表达ＭＨ     

肝癌“双弹头”免疫导向药物的实验研究

以肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８为载体，用葡聚糖作桥的间接交联方法和氯胺Ｔ法，同时将阿霉素（ＡＤＭ）和１３１Ｉ连接到ＨＡｂ１８上，制备出“双弹头”肝癌免疫导向药物１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ。其免疫结合率为４３．５％。细胞毒实验结果显示，１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ对靶肿瘤细胞ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤效果较单独应用ＡＤＭ相同浓度的ＨＡｂ１８－ＡＤＭ和比放射性相同的１３１Ｉ－ＨＡｂ１８时，有明显的增强。１３１Ｉ－ＨＡｂ１８－ＡＤＭ具有选择性高效杀伤的作用，它集中了化疗与内放射治疗的优点，互相补充，展示了肿瘤导向治疗的良好前景。     

肿瘤抗原MAGE-3基因的克隆及其重组表达载体的构建意义

目的 构建MAGE-3基因重组真核表达质粒pcDNA3．1／MAGE-3，制备肿瘤DNA疫苗，为提高患者生存期内生活质量选择更优秀的治疗措施。方法 从人黑色素瘤细胞株中提取总RNA，进行RT-PCR扩增出全长cDNA，并克隆入PUCl9载体，经DNA测序证实序列无误后，将MAGE-3基因克隆入pcDNA3．1( )真核表达载体。结果 经RT-PCR扩增出大小约950bp的基因片段，成功克隆人PUCl9载体，经DNA测序证实为MAGE-3，编码MAGE-3基因全部947bp序列，读框正确，进一步亚克隆获得携有MAGE-3基因的重组质粒pcDNA3．1／MAGE-3。结论 成功构建了MAGE-3真核表达质粒，为其作为新型DNA疫苗用于肿瘤免疫治疗奠定了基础，对提供有效治疗方案，提高患者的生存率和延长患者的生存期产生正面意义。     

~(131)Ⅱ标记肝癌单克隆抗体对裸鼠肝癌移植瘤的实验性导向治疗

作者用Ⅰ标记抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb8 HAb18 IgG及其(ab)_2片段。从尾静脉注入碘标记物,对16只荷肝癌裸鼠(SMMU-LTNM)分4组治疗,其中D组为无关抗体对照组,A,D组为单次给药,注入剂量为7.4×10′Bq,B,C组为多次给药,每5d注射1次,每次剂量为4.4×10′Bq,肿瘤扩增至0.3cm直径时起始治疗,观察疗效21d。每天用卡尺测量其瘤体大小,取横径和竖径的1/2值。经过治疗,2周内有较明显的抑瘤或杀瘤效应。显效(CR)者瘤块可消失(n=5),而对照组(n=4)的瘤块扩增了3-4倍,治疗组(n=12)的自然生存率延长7d以上。     

鼻咽癌~(60)钴放疗疗效与EB病毒壳抗原-免疫球蛋白A抗体的关系

用免疫荧光细胞化学方法,对35例经~(60)钴放射治疗的鼻咽癌患者进行了EB病毒VCA-IgA抗体水平动态观察。发现多数患者VCA-IgA抗体水平有随病情好转而下降、随疾病恶化而上升的趟势。提示EB病毒VCA-IgA抗体水平的变化有可能作为判断~(60)钴放疗疗效的一项客观指标。     

增强子结合蛋白家庭的一个新基因HP8定位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带

目的:探讨增强子结合蛋白(C/EBP)家族一个新基因HP8的人染色体定位.方法:按常规方法制备分裂期人淋巴细胞切片,用生物素标记HP8基因 3’-端 2.1kb cDNA作探针,进行荧光原位杂交(FISH).对FISH信号及染色体上DAPI结合条带同时拍照,二者重迭信号进行计数,结果:100个有丝分裂图中,有72个显示阳性信号位于同一对染色体,并且无其他非特异性杂交带,杂交效率约为70%.参照DAPI结合条带,阳性信号位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带.结论:HP8基因定位于人19号染色体长臂 13.1-13.2区带.     

人肝细胞肝癌与正常肝组织内C／EBP的分布及其mRNA…

以兔抗增强子结合蛋白多肽抗体，有ＡＢＣ法对１８例人正常肝组织、５例新生儿肝细胞肝癌（其中４０例带有癌旁肝组织）中Ｃ／ＥＢＰ进行免疫组化定位，同时运用Ｃ／ＥＢＰ ｃＤＮＡ探针对３例人正常肝组织、１例新生儿肝组织、１０例肝细胞肝癌（其中８例含配对的癌旁肝组织）进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，免疫组化结果显示，Ｃ／ＥＢＰ弥漫分布于分化成熟的肝细胞浆及肝细胞核中（胞浆含量更丰富）。在肝癌分化差（或分化低）的