乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒核酸定量检测

目的　探讨乙肝患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中HBVDNA定量检测及其临床意义。方法　用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 ,细胞计数并提取单个核细胞及相应血浆中HBVDNA ,用荧光实时定量PCR法检测单个核细胞和血浆中HBVDNA含量。结果　对 188例乙型肝炎患者的外周血单个核细胞和相应血浆中HBVDNA定量检测 ,结果发现 :①外周血单个核细胞HBVDNA检出率为 80 3% ,血浆中HBVDNA检出率为 72 9% ,两者检出率无差异 (χ2 =3 13,P >0 0 5 ) ,检出结果具有一致性 (χ2 =8 2 5 2 ,P <0 0 1)。②在HBV血清学标志为HBsAg( )HBeAg( )到HBsAg( )HBcAb( )各组中 ,其血浆和PBMCs中HBVDNA检出率和含量均逐渐降低 ,各组中血浆和PBMCs中HB VDNA含量间具有相关性 (P <0 0 5 )。③在不同类型乙型肝炎患者中 ,除 18例急性肝炎患者的血浆和PBMCs中均检出HBVDNA并含量较高外 ,在其余的病例中 ,随着病情严重 ,PBMCs中的检出率明显升高而血浆中的检出率明显降低 ;而除急性肝炎组PBMCs和血浆中HBVDNA含量不具有相关性外 (P >0 0 5 ) ,其它各组间均具有相关性 (P <0 0 5 )。结论　PBMC中的HBVDNA持续存在在乙肝患者的发病机制起着重要作用 ,PBMCs中的HBVDNA检测在发病机制和治疗监测中可能有重要意义     

慢性乙肝YMDD变异患者肝纤维化指标、血清标志物的检测

目的探讨慢性乙肝患者(CH)发生YMDD变异后肝纤维化指标及血清标志物的变化及其意义。方法检测接受≥6个月以上拉米夫定治疗285例CH患者YMDD变异情况;从中选取135例患者,根据变异结果分为无突变组70例、突变组65例(包括完全突变39例、部分突变18例,混合突变8例);根据是否继续用拉米夫定治疗各分为继续治疗组和未继续治疗组;同时测定各组乙肝病毒拷贝数(HBV-DNA)、HBVM(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)、ALT、AST、GGT等血清标志物及肝纤维化指标透明质酸(HA)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(CIV)水平;将各组结果进行比较分析。结果285例患者中发生YMDD突变144例(占50.5%),突变类型较稳定,其中以YIDD型为最常见;突变组HBeAg阳性率、HBV-DNA水平高于无突变组(P<0.01、P<0.05);突变病例中继续治疗组HBV-DNA水平比未继续治疗组反而增加(P<0.05),无突变病例中继续治疗组PIV、PCIII、HBV-DNA水平比未继续治疗组出现下降(P<0.01、P<0.05)。结论YMDD突变组HBeAg阳性率、病毒拷贝数高于无突变组,而常规肝功能和纤维化指标无差异;继续使用拉米夫定治疗,可改善无突变组患者的肝组织纤维化。     

血清维生素D3、可溶性髓系细胞触发受体1水平对老年肺炎诊断价值

目的通过检测老年肺炎患者血清可溶性髓系细胞触发受体1(sTREM-1)、维生素D3(VitD3)水平,探讨sTREM-1、VitD3与老年肺炎的关系,为临床诊断与治疗提供依据。方法选取63例老年肺炎患者为病例组,健康者30名作为对照组。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测sTREM-1、电化学发光法检测血清VitD3水平,并进行组间比较。结果老年肺炎组血清sTREM-1水平[234.80±68.90)pg/mL]明显高于对照组[(74.20±41.20)pg/mL],差异有统计学意义(P0.01);老年肺炎组血清VitD3水平[(18.92±7.27)pg/mL]明显低于对照组[(33.75±9.28)pg/mL],差异有统计学意义(P0.05);sTREM-1的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.916,VitD3的ROC曲线下面积为0.897。结论 sTREM-1、VitD3是肺炎诊断的良好指标,对老年肺炎诊断有一定的帮助。     

肾移植受者巨细胞病毒隐性感染的筛查方法及应用

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)隐性感染的筛查方法,为临床早期发现CMV活动性感染提供诊断依据。方法收集笔者医院2009年10～12月期间门诊随访233例肾移植受者外周静脉血标本450份,分别采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、巢式PCR(nPCR)以及酶联免疫吸附(ELISA)法对标本进行检测,同时采用ELISA法检测他克莫司(Tac)浓度。结果 233例肾移植受者CMV-IgG均为阳性,CMV-IgM则均为阴性;Real-time PCR技术检测CMV-DNA阳性85例(36.48%),以低拷贝数为主。nPCR技术检测CMV-DNA阳性10例(4.29%),两种技术检测总阳性率存在显著性差异(P<0.05);随着Tac药物浓度升高,CMV-DNA阳性率呈增高趋势,药物高浓度组CMV-DNA阳性率高于低浓度组(P<0.05)。结论 Real-time PCR是筛查肾移植受者CMV隐性感染较为理想的方法,尤其在受者药物浓度偏高时更具有临床应用价值。     

白细胞介素10-1082G/A位点单核苷酸多态性与膀胱癌的相关性

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区域-1082G/A位点单核苷酸多态性与膀胱癌危险性的关系。方法选取浙江汉族人群中膀胱癌患者400例为病例组,400例健康体检者为对照组,以等位基因特异性扩增(allele specific PCRamplification,AS-PCR)结合DNA测序方法,检测病例组和对照组的IL-10-1082G/A基因型,比较不同基因型与膀胱癌危险性以及膀胱癌临床分期之间的关系。结果病例组和对照组的IL-10-1082G/A位点基因型分布和等位基因频率之间差异有统计学意义(χ2=8.375,P<0.05;χ2=8.322,P<0.01);AA基因型的个体与携带G等位基因型的个体(GG型和GA型)相比,携带等位基因A的个体与携带等位基因G的个体相比,其患膀胱癌危险性分别增加2.055倍和1.990倍(OR=2.055,95%CI:1.252～3.374;OR=1.990,95%CI:1.237～3.203);IL-10-1082G/A位点基因型与膀胱癌的临床分期无直接相关性。结论 IL-10-1082G/A多态性与膀胱癌危险性相关,该位点SNP检测可作为膀胱癌可能的分子标志物。     

炎症因子基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关性

目的 研究中国南方汉族人群炎症因子基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的相关性.方法 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对283例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者和176名对照者的5个炎症因子的基因多态性进行检测,评估不同基因型和等位基因与冠心病患病风险的关联性.结果 在受检测的5个炎症因子[乳腺癌易感基因1相关蛋白( BRCA1-associated protein,BRAP)、去整合素-金属蛋白酶8、中间a胰蛋白酶抑制因子H3、白细胞介素-15和环氧化酶-2]中,BRAP基因的270T/C及90A/G多态性在冠心病组与对照组间的差异有统计学意义,其等位基因和基因型的分布频率符合Hardy-Weinberg平衡(分别为:x2=0.878,P＞0.05;x2=0.776,P＞0.05).冠心病组BRAP 270C等位基因和90G等位基因频率高于对照组(分别为:29.51％vs.21.31％,P=0.006;30.04％ vs.21.31％,P=0.004).Logistic回归分析提示,BRAP 270CC和90GG基因型携带者患冠心病的发病风险高于BRAP 270TT和90AA基因型携带者(分别为:OR=4.51,95％CI:1.41～14.45,P=0.011;OR=5.09,95％CI:1.60～16.26,P=0.006),且该关联独立于性别、年龄、吸烟、高血压、糖尿病及血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平等风险因素之外.没有证据表明其余单核苷酸多态性与冠心病易感性相关.结论 BRAP基因内含子270T/C和外显子90A/G多态性可能是中国南方汉族人群冠心病发病的风险因素之一.     

免疫学与免疫学检验教学改革实践体会

免疫学与免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学领域中的一门应用学科。其发展迅速,知识内容渗透到基础医学和临床医学等各个学科领域。免疫学与免疫学检验是医学检验专业的主干课程之一,为了更好地推进精品课程建设,提高教学质量,冲击国家级精品课程,该专业的主讲教师进行了教学改革实践,并获得了显著的改革成果。     

前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化检测及临床意义

目的:检测前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因异常甲基化,探讨其甲基化与前列腺癌临床病理特征间的关系.方法:采用巢式甲基化特异性PCR(nested methylation specific polymerase chain reaction,NMSP)法对57例前列腺癌组织和35例良性前列腺增生组织进行甲基化检测,分析其甲基化的发生与前列腺癌临床病理特征间的关系.结果:前列腺癌组织中GSTP1和DAPK基因甲基化检出率显著高于良性前列腺增生组织(GSTP1:61.4%vs 2.9%;DAPK:43.9%vs 8.6%;均P＜0.01).GSTP1基因甲基化率在不同Gleason评分间具有明显差异(x2=11.53,P=0.001),而在不同年龄、前列腺特异性抗原(PSA)和临床分期之间差异却无显著性(x2=0.111,1.662和1.975,均P＞0.05);DAPK基因甲基化率在不同年龄、PSA、Gleason评分和不同临床分期之间均无明显差异(x2=0.071、0.002、1.290和2.309,P均＞0.05).结论:GSTP1和DAPK基因异常甲基化与前列腺癌的发生与发展相关,可有助于前列腺癌的诊断.     

前列腺癌特异性抗原基因检测研究进展

前列腺癌是男性常见肿瘤之一 ,且前列腺癌患者逐年增加。为了适应临床早期检出原发性和潜在的转移性肿瘤的要求 ,前列腺癌特异性抗原 (PSA)的基因检测方法发展很快。而前列腺癌微转移检测在肿瘤早期诊断、治疗监测及预后判断方面具有重要意义。本文就PSA基因分子生物学、检测方法学以及在前列腺癌微转移检测中的应用价值作一综述     

前列腺癌患者外周血中前列腺癌抗原3基因和前列腺特异性抗原基因联合检测的意义

目的 评价外周血前列腺痛抗原3基因(prostate cancer antigen 3,PCA3 mRNA)和前列腺特异性抗原基因(prostate specific antigen,PSA mRNA)联合检测对前列腺癌(PCa)及对其微转移诊断的价值.方法 用双重荧光实时定量逆转录(dFQ-RT)-PCR对49例PCa和71例前列腺增生(BPH)患者外周血PCA3 mRNA和PSA mRNA进行定量检测,通过受试者工作特征(ROC)曲线评价其在PCa诊断和微转移监测中的价值.结果 PCa组外周血PCA3 mRNA含量明显高于BPH组[2 362(<3-7 421)拷贝/ml比<30拷贝/ml,Z=-6.66,P<0.01],而PSA mRNA含量也明显高于BPH组[3 425(908～36 639)拷贝/ml比<200拷贝/ml,Z=-6.40,P<0.01];PCa组外周血PCA3mRNA和PSA mRNA的阳性率随临床分期增高而增加[B期:均为30.0%(3/10),C期:60.0%(9/15)和86.7%(13/15),D期:91.7%(22/24)和91.7%(22/24);χ2分别为13.534和16.451,P均<0.01],同时也随Gleason评分增高而增加[2～4分:20.0%(1/5)和40.0%(2/5);5～7分:66.7%(12/18)和72.2%(13/18);8～10分:84.6%(22/26)和92.3%(24/26);χ2分别为8.895和8.015,P均<0.05];ROC曲线显示,当PCA3 mRNA和PSA mRNA临界值分别为846拷贝/ml和280拷贝/ml时,诊断PCa敏感度分别为69.4%(34/49)和81.7%(40/49),特异度分别为90.1%(64/71)和77.5%(55/71);而联合检测时其敏感度可增至85.7%(42/49),但特异度下降为76.1%(54/71).PCA3 mRNA诊断PCa微转移的敏感度和特异度分别为90.9%(20/22)和84.7%(11/13).结论 外周血PCA3 mRNA和PSA mRNA检测是PCa诊断的良好指标,而联合检测可弥补PCA3 mRNA敏感度低和PSA mRNA特异度低的不足,而更有利于PCa诊断;PCA3 mRNA可能为PCa微转移诊断的良好指标.