乙型肝炎患者外周血中IL-6和sIL-2R含量变化及其意义

目的探讨细胞因子IL-6和sIL-2R在乙型肝炎病毒感染后的免疫应答中所起作用和临床意义。方法使用ELISA定量检测75例乙型肝炎患者和15例健康对照的血浆IL-6和sIL-2R含量。结果急性乙型肝炎患者组血浆IL-6和sIL-2R含量明显高于健康对照组;在慢性乙型肝炎中,随着病情加重,血浆IL-6和sIL-2R含量随之升高,特别是轻度组及中度组与重度组间存在显著性差异(P<0.05);在ALT正常组与ALT异常组之间比较发现,ALT异常组的血浆IL-6和sIL-2R含量明显高于ALT正常组(P<0.05,P<0.01)。结论乙肝患者机体存在免疫应答异常导致免疫损伤,IL-6和sIL-2R含量变化能部分反映机体肝细胞损伤情况和损伤机制。     

实时荧光RT-PCR定量检测前列腺癌组织中AMACR基因表达

目的 建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测AMACR mRNA的方法学并检测其在前列腺癌(PCa)组织中的表达.方法 在AMACR基因的2、3外显子之间设计一对引物及MGB探针,将PCR扩增产物与pMD18-T载体连接,构建重组质粒作为定量检测的标准品,建立实时荧光定量RT-PCR方法,然后对32例PCa、60例良性前列腺增生(BPH)及34例其它肿瘤组织进行AMACR mRNA的定量检测.结果 重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明克隆成功,该方法灵敏度高,线性范围为5～5×108copies/reaction.AMACR mRNA在PCa组织中表达量显著高于BPH组织(P<0.01)及其他类型肿瘤组(P<0.01).ROC曲线分析结果显示,曲线下面积(AUC-ROC)为0.890,AMACR mRNA诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为81.3%和86.7%.PCa组织中AMACR mRNA表达量及检测阳性率与不同临床分期和病理分级之间的差异尚不具有统计学意义(P值均>0.05).结论 实时荧光定量RT-PCR检测AMACR mRNA的方法具有敏感、特异、准确、重复性好等特点.AMACR mRNA在前列腺组织中的表达对PCa的诊断具有一定的临床应用价值.     

TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的研究

目的探讨TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。方法采用荧光定量PCR法检测HBV DNA含量,TaqMan MGB双探针方法和测序方法检测其YMDD变异,以测序方法为参考方法,评价TaqMan MGB双探针方法检测慢性乙型肝炎病毒YMDD变异的可靠性。结果246例HBV DNA阳性患者血清标本中,TaqMan MGB双探针方法阳性检出率为100%,100例正常对照全部为阴性;YMDD无突变106例,YMDD有突变(YIDD变异 YVDD变异)140例,与核酸测序方法比较,符合率为100%;该方法经过敏感度实验,最低检出下限为1×103拷贝/ml。结论TaqMan MGB双探针方法能便捷、灵敏、特异地检测YMDD基序变异情况,适用于临床检测慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗的YMDD基序变异。     

平湖市外来民工子弟小学预防接种证查验结果分析

2008年是平湖市依法实施儿童入托、入学查验预防接种证的第3年,经过2 a工作实践,取得了一定的工作经验.为进一步规范该项工作和促进各单位的平衡发展,对外来民工子弟小学这一薄弱环节加强了工作力度,一方面加强业务指导,另一方面加强督导管理,收到了明显成效.现将该市外来民工子弟小学查验接种证工作的情况分析如下.     

维生素K3诱导肝癌细胞凋亡及SOD、GSH、MDA的变化

目的:分析在维生素K3诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的过程中细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化。方法:选取对数生长期的肝癌细胞用不同浓度的维生素K3(2、5、10、20、25μmol/L)以不同的作用时间(12、24、48、72 h)进行诱导,用流式细胞仪检测细胞凋亡率(Annexin V/PI法)变化;化学显色法测定不同浓度维生素K3作用48h后肝癌细胞内SOD活性和GSH、MDA含量的变化。结果:5个维生素K3浓度作用肝癌细胞48 h后早期凋亡率分别是18.75%,25.80%,38.06%,29.92%,27.68%;除2μmol/L组的SOD活性外,5、10、20μmol/L浓度组细胞内的SOD活性和GSH含量随着维生素K3浓度的增加而明显下降,而代谢产物MDA含量均明显增加,呈明显的剂量依赖性;20μmol/L和25μmol/L浓度组之间上述指标的变化无显著性差异。结论:维生素K3作用SMMC-7721细胞48 h后可诱导肝癌细胞发生凋亡,呈明显的剂量浓度依赖性,氧化应激是诱发细胞凋亡的关键步骤。     

不同HPV亚型的多重感染和年龄因素与宫颈病变的关系

目的:探讨不同亚型人乳头状瘤病毒(human papillomavious,HPV)多重感染及年龄等因素与宫颈不同程度病变的关系。方法:采用核酸分子快速导流杂交基因微阵列分型检测技术对418例女性HPV感染者进行HPV分型检测,同时检测宫颈病变程度。结果:仅感染高危型HPV病毒(包括混合感染多种高危HPV病毒)的女性患者其宫颈癌、尖锐湿疣构成比与仅感染低危型HPV病毒(包括混合感染多种低危HPV病毒)组的相应构成比存在较大差异(χ2=41.81,P<0.001);感染多种高危(低危)HPV与感染单一高危(低危)HPV相比,不同宫颈疾病的构成比并无差别;在不同的年龄段,高危型、低危型以及高低危HPV混合感染类型的构成比有显著性差异(χ2=17.25,P<0.05)。多元logitic回归分析年龄因素及不同类型高危型HPV感染与宫颈癌的关系显示年龄超过40岁(OR=1.63,P<0.05),16型HPV感染(OR=2.78,P<0.01),58型HPV感染(OR=1.69,P<0.05)宫颈癌患病风险大大增加。结论:感染高危型HPV引起宫颈癌的患病风险增加,而低危型HPV则更易引起尖锐湿疣的发生;多重感染并不会促进宫颈疾病的进展;年龄、16型和58型HPV的感染是影响宫颈癌发生的重要因素。     

染色体异常核型二个家系

例1,女,32岁,继发闭经,原发不孕就诊。查体：身高153cm,体重46kg,表型智力正常。乳房对称发育,有腋毛,外阴发育正常。B超：子宫明显偏小,21mm×21mm×18mm，双侧附件区仅见卵巢样痕迹.性激素检查：促黄体生成素0．8U／L（参考范围2．1～10．9U／L），卵泡刺激素1．6U／L（参考范围3．8～8．8U／L），雌二醇41．0pmol／L（参考范围88-410pmol／L），睾酮0．4pmol／L（参考范围0～2．6pmol／L）。细胞遗传学检查：外周血淋巴细胞培养，常规制备染色体，胰酶G带法显带，     

MTT还原法测定人淋巴增殖活性

目前检测淋巴细胞增殖活性的方法已很多，但都有不足，如同位素（３ＨＴｄＲ，１２５ＩｕｄＲ）掺入法虽具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，但却存在着须作同位素防护、半衰期以及操作繁琐等问题；而非放射性检测方法如细胞计数法、Ｇｉｅｍｓａ染色法、荧光染色法...     

核酸提取方法在聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸中的评价

目的 对不同核酸提取方法在荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）检测血清乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）含量中应用进行评价，为临床方法学选择和实验结果的评价提供理论依据。方法 选用直接煮沸裂解法、NP－40煮沸裂解法、沉淀煮沸裂解法、磁珠核酸提取法等4种核酸提取方法提取乙型肝炎血清标本和含不同含量肝素的血清标本中HBV DNA模板，用荧光实时定量PCR法对其进行准确定量，从提取效率、抗干扰能力方面进行评价。结果 4种核酸提取方法中磁珠核酸提取法提取效率为最高，对数换算后，以此相对提取效率为100％，则直接煮沸裂解法为最低81％（P＜0．05）、NP－40煮沸裂解法为95％（P＞0．05）、沉淀煮沸裂解法为88．7％（P＜0．05）；从抗干扰能力方面，当肝素含量为500U／ml时，磁珠核酸提取法抗干扰能力最强，沉淀煮沸裂解法次之、直接煮沸裂解法和NP－40煮沸裂解法为最差，其HBV DNA含量抑制率分别为9．4％、13．5％、35．4％、52．7％。结论 本实验结果认为磁珠核酸提取法为实验室首选的核酸提取方法。