自体全层皮肤移植成活过程中表皮干细胞变化规律的实验研究

目的探索自体全层皮肤移植成活过程中表皮干细胞随微环境的改变而变化的规律,为表皮干细胞的临床应用提供理论依据。方法Wistar大鼠42只,于背部制作1.5cm×1.5cm自体全层皮肤原位移植模型。按取材时间点随机分成7组(G1～G7组),每组6只,分别为术后第1、3、5、7、14、21和30天;各组术前取材作对照。在各时间点大体观察移植皮片情况;于手术前、后各时间点切取皮片组织标本,行HE染色和免疫组织化学染色,观察组织学变化及整合素β1和基因物质p63阳性细胞变化。结果术后第3天,G5、G6组各有1只动物移植皮片周围感染,其他各组移植皮片均成活良好。G1～G4组细胞水肿,炎性细胞浸润,纤维细胞逐渐增多,G5～G7组上皮化程度越来越高,纤维细胞含量越来越少。各组整合素β1阳性细胞率低于基因物质p63,但随观察时间延长变化规律相似。阳性细胞在移植皮片中的排列结构紊乱,分布到表皮各层,从G6组开始逐渐集中于表皮的基底层和毛囊隆突部,但在表皮的其他各层仍然有阳性细胞。G1组阳性细胞率开始逐渐减少,G2组达到最低,然后逐渐增加,G1～G3组手术前、后比较差异均有统计学意义(P<0.05);G4组接近术前(P>0.05);G6组达到最高峰后逐渐降低,G5～G7组手术前、后比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论表皮干细胞在自体全层皮片移植成活过程中,数量逐渐减少后增加,至超过正常,后又逐渐减少;在分布上开始紊乱,几乎分布表皮各层,后又趋向正常规律性变化。     

自体全层皮肤移植成活过程中表皮干细胞的变化规律

背景:表皮干细胞的研究有相当的成绩,但皮肤移植成活过程中表皮干细胞数量及在皮肤各层中的分布动态变化规律尚需探讨。目的:观察自体全层皮肤移植成活过程中表皮干细胞随其所处微环境的改变及其变化规律。设计:对比观察的前瞻性动物实验。单位:南华大学第一附属医院烧伤整形外科。材料:选用南华大学实验动物中心提供的Wistar大鼠42只,2～3月龄,清洁级,雌雄不拘,体质量200～250g。饲养1周后按观察时间随机分为7组,术后24h组,3d组,5d组,7d组,14d组,21d组和30 d组,每组6只。抗体:一抗:兔抗鼠整合素β1多克隆抗体(武汉博士德生物公司)小鼠抗大鼠p63单克隆抗体(santa cruz公司);二抗:山羊抗兔IgG(北京中杉生物公司),山羊抗小鼠IgG(北京中杉生物公司);S-P免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒(北京中杉生物公司)。方法:实验于2006-05在南华大学动物实验室完成。①所有大鼠背部制作(1.5x1.5)cm2面积的自体全层皮肤移植模型,在不同时间点观察移植皮片的颜色改变,移植皮片下是否有积血、积液,皮片是否与创面粘合。②每只大鼠手术时切取少许皮片立即放入100g/L中性甲醛中固定并标记为空白对照组。③术后24h组,3d组,5d组,7d组,14d组动物分别在相应时间拆开移植皮片固定包,在各创面中央切取皮肤组织固定并标记;术后21d组和30d组术后14d拆包,继续喂养至术后21d和30d在移植皮片中央切取皮肤组织。④制作HE染色和免疫组织化学染色病理切片。主要观察指标:①切片中炎症细胞的数量、上皮化程度、纤维细胞的含量。②整合素β1和基因物质p63阳性细胞率。结果:纳入Wistar大鼠42只全部进入结果分析。①创面大体观察:术后一二天颜色苍白、水肿;术后3d皮片颜色未见有明显的好转,但皮片与创面贴附较紧密;术后7d皮片颜色明显好转,表皮颜色接近正常,皮片与创面粘连紧密,创面有部分毛根长出;术后14d皮片创周已经和创面完全愈合;术后30d皮片颜色较正常稍微深,毛发生长同正常皮肤。②苏木精-伊红染色病理切片观察结果:前4组见皮片内细胞水肿,有少量炎性细胞浸润,术后5d发现皮片部分角质细胞坏死脱落。③阳性细胞的分布和数量变化规律:整合素β1和基因物质P63阳性细胞在术前主要分布于表皮的基底层和毛囊隆突部,从术后24h阳性细胞开始在表皮的各层出现,且数量逐渐增多,术后14和21d在表皮的各层均见到较多的阳性细胞,术后30d阳性细胞主要分布在表皮的基底层,但在其它各层仍然有少量的阳性细胞出现。免疫组化切片中基因物质P63的阳性细胞数均高于同时限点β1整合素的阳性细胞数,从术后24h开始减少,到术后3d达到最低点,然后逐渐增加,到术后7d阳性细胞的比例达到或接近术前,继续增加。术后21d时阳性细胞比例达到最高点,然后又逐渐减低,术后30d时阳性细胞比例仍高于术前。结论:①表皮干细胞在自体全层皮片移植成活过程中先减少,然后逐渐增加至超过正常皮肤。②自体全层皮肤移植成活过程中,表皮干细胞在皮肤中的排列紊乱,几乎在表皮各层均能见到表皮干细胞;而后又逐渐集中于表皮的基底层和毛囊隆突部。     

游离足背皮瓣修复手背皮肤软组织缺损

目的 探讨游离足背皮瓣修复手背皮肤软组织缺损的临床效果.方法 对10例手背软组织缺损的患者,切取带腓浅神经的游离足背皮瓣移植修复,其中1例携带第3、4趾趾长伸肌腱,1例同时切取第二足趾再造中指.皮瓣切取面积为5 cm×4 cm～21 cm x 12 cm.结果 10例皮瓣全部存活,术后1例皮瓣发生血管危象,经手术探查发现静脉血栓形成,重新吻合血管后皮瓣存活.术后随访6～24个月,其中9例皮瓣无臃肿,皮肤质地、色泽接近正常皮肤,痛、温、触觉部分恢复;1例皮瓣肤色较深,质地硬.3例供区植皮坏死、肌腱外露,其中1例经换药后瘢痕愈合,1例行小腿内侧筋膜皮瓣修复,1例行足内侧岛状皮瓣修复.结论 应用足背皮瓣复合组织修复手背皮肤、肌腱和神经的缺损,是一种较理想的方法.     

表皮干细胞研究进展

表皮干细胞具有无限增殖和分化的潜能，对维持表皮的自我更新、保持皮肤的正常结构以及对皮肤的创伤修复具有重要意义。表皮干细胞的研究已引起越来越多科研人员的关注，本文就目前表皮干细胞的生物学特征、表面标记、分布特征、分化调控及其应用前景等方面的研究进展作一综述。     

游离腹壁下动脉穿支皮瓣移植的临床应用经验

目的总结游离腹壁下动脉穿支皮瓣移植修复四肢皮肤软组织缺损的临床应用经验。方法临床应用37例游离腹壁下动脉穿支皮瓣移植修复四肢皮肤软组织缺损。28例皮瓣长轴设计为传统的斜行,9例为下腹部横行设计。有7例皮下脂肪肥厚的皮瓣术中进行了均匀显微修薄。结果 36例穿支皮瓣完全成活,1例皮瓣远端部分坏死,坏死的创面经过换药愈合。随访6～36个月,皮瓣血运良好,质地柔软。7例修薄的皮瓣厚约4～6mm,外形美观无臃肿。供区为斜行的创口中有17例后期均有较明显瘢痕增生,其中有5例两侧腹壁外形不对称。9例供区为横行的创口后期均无明显瘢痕增生,腹壁外形损害很小。结论腹壁下动脉穿支皮瓣具有供区隐蔽且损伤小、可切取面积大、可灵活切取分叶皮瓣和可显微修薄等很多优点,是修复四肢皮肤软组织缺损的理想皮瓣之一,将皮瓣长轴改为下腹部横行设计对供区外观损害更小。     

游离桡侧副动脉穿支皮瓣移植的临床应用经验

目的 总结游离桡侧副动脉穿支皮瓣移植修复四肢皮肤软组织缺损和手足部复合组织缺损的临床应用经验.方法 临床应用37例游离桡侧副动脉穿支皮瓣修复四肢皮肤软组织缺损和手足部复合组织缺损,其中单一穿支皮瓣24例,多叶皮瓣1例,嵌合肌瓣3例,嵌合骨瓣6例,嵌合肌瓣和骨瓣3例.皮瓣最大面积为16 cm×7 cm,最小为4 cm×3 cm.皮瓣供区保留深筋膜和主要的浅静脉,尽量直接缝合.皮下脂肪肥厚的皮瓣切取后以穿支为中心进行阶梯状修薄.结果 37例穿支皮瓣完全成活,创口一期愈合,仅1例皮瓣后期因为反复溃烂予以切除.随访4～26个月,皮瓣血运良好,质地比较薄而柔软,外形良好,9例应用骨瓣修复的骨折愈合时间3～7月,平均4.2月.全部皮瓣供区直接闭合,供区损害很小.结论 游离桡侧副动脉穿支皮瓣质地比较薄、外形美观、设计灵活、供区损伤小、可以吻合皮神经重建感觉、可以嵌合切取小块骨瓣和肌瓣,是修复四肢中小面积皮肤软组织缺损和手足部复合组织缺损的理想皮瓣之一.