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41.
42.
本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP(IL-1receptoraccessoryprotein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株。分别应用EusA和Westernblot法对杂交瘤细胞上清中分泌抗体进行抗体类型、滴度和敏感性检测。分离人外周单个核细胞,检测所得抗体对细胞内源性抗原的特异性。结果表明,获得了8株可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3H6E10、486A6、8G1185、9E9F2、10D8A7、1C7H7、1D7G11和2D3D3;抗体类型鉴定为IgG1/K型;分泌的单克隆抗体能特异性识别单个核细胞表达的IL1RAP。结论:本实验成功制备了可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞及其特异性的IL1RAP单克隆抗体,为将来有效清除体内白血病干细胞提供了新途径。 相似文献
43.
背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。 相似文献
44.
急性氧中毒又称惊厥型氧中毒或氧惊厥.尽管人们很早认识到这种疾病,而且其发病原因非常明确,但目前对其发病的具体机制仍不清楚,有关急性氧中毒研究的报道,以递质代谢失常[1]及药物预防[2]方面的居多.我们以往的研究发现,在氧惊厥过程中,某些神经肽,如精氨酸加压素(AVP)、内啡肽等的含量出现显著变化,外源性注射AVP有抗氧惊厥作用[3].但内源性AVP是否也能发挥这样的作用?目前还没有明确的证据.本研究通过观察不同禁水时程对动物中枢及外周AVP水平及氧惊厥潜伏期的影响,初步探讨内源性AVP与氧惊厥的关系. 相似文献
45.
由5个独立小单元用组合方式改建成面积为72m2的清洁动物实验室,其中实验观察室4间,小动物手术室1间。各单元可同时或单独启用,既节省能源又保证了清洁环境。消毒后室内空气中,平均菌落总数为0个/皿·h,平均尘埃粒子数为204粒/L;使用时最高噪声小于60dB,平均换气36次/h,断面风速0.16m/s,最小区差大于20Pa.实验室启用以来已进行了多项动物实验,如应用BALB/c裸小鼠与NC裸小鼠接种人肝癌细胞SMMC7721的体外培养株、SD大鼠肝脏移植实验、二乙基亚硝胺对Wistar大鼠肝癌诱发机制的研究、人肝细胞癌的基因治疗试验等,所有实验无一例感染。 相似文献
46.
血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)已广泛应用于治疗心血管疾病,成为高血压、充血性心力衰竭和心肌梗死(myocardial infarction,MI)的常规用药。多个大型临床试验已证实ACEI可以降低心血管疾病患者的发病率和病死率。从理论上说,血管紧张素受体拮抗剂(angiotensin receptor blockers,ARBs)可以更直接、有效地抑制体内各种途径产生的血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ),其临床效果应强于ACEI。但是,最近的临床试验结果并没有显示出ARB的优越性,相反,有研究报道ARB可能增加心肌梗死的发病率和病死率心。该发现引起了医学界和患者的广泛关注。本文就血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂是否增加心肌梗死发病率和病死率及其相关机制进行简要综述。 相似文献
47.
目的 探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠又状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4~+ CD25~-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,实验分4组进行:(1)工程Treg组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个+基因工程Treg细胞5×10~6个;(2)移植对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5x10~6;(3)单纯照射组经受鼠尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2ml;(4)空载体对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个十空载体转导的CD4~+ CD25~-T 淋巴细胞5×10~6个.每天观察受鼠存活情况;记录GVHD的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60d)的受鼠骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度. 相似文献
48.
疱疹性口腔炎由疱疹性病毒引起,服用药物后经过1-2周就可以痊愈,但是这种痊愈并不代表病毒已经全部清除,实际上,仍然有部分病毒残留在患处,如果患者在今后身体消耗过大时,疱疹病毒会再次以疱疹性口腔炎的形式复发。笔者采用中西医结合的方法治疗小儿疱疹性口腔炎,取得较好疗效,现报告如下。 相似文献
49.
目的:探索稳定下调VE-cadherin蛋白对K562细胞药物敏感性的影响及其可能的机制。方法:设计靶向人VE-cadherin的特异性干扰序列,连同IRES-GFP及NEO基因片段,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调VE-cadherin的K562细胞。应用CCK8法测定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,AnnexinⅤ/7-AAD标记细胞,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测白血病细胞CD133、ALDH1的转录水平;Western blot方法检测白血病细胞VE-cadherin、BCR-ABL和β-catenin表达水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLB-sh VEC-NEO-IRES-GFP,并包装慢病毒,筛选出稳定下调VE-cadherin蛋白的K562细胞株。稳定下调K562细胞VE-cadherin表达后,在相同药物浓度处理下白血病细胞增殖率降低,凋亡率升高,CD133及ALDH1转录水平降低,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β-catenin蛋白表达水平下降,细胞核β-catenin蛋白水平亦下降。结论:稳定下调K562细胞VE-cadherin蛋白的表达可使白血病细胞药物敏感性增高,其机制可能与降低β-catenin蛋白的稳定性、减少β-catenin蛋白的核转位有关的。 相似文献
50.
目的 研究LIN28B对人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤干细胞的干性状态维持的作用机制.方法 在MCF-7细胞中瞬时过表达LIN28B,用qPCR和Western blot检测干性相关基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的表达;用流式细胞仪检测CD44high/CD24low细胞亚群的比例;利用体外成球培养检测肿瘤干细胞自我更新的能力,通过RNA第二代测序技术检测在LIN28B过表达后MCF-7细胞中miRNAs的表达差异,通过转染差异表达的miRNA,检测其对MCF-7细胞肿瘤干细胞比例和体外成球能力的影响.结果 转染p-CMV6-LIN28B后能明显提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P<0.001);过表达LIN28B后MCF-7细胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平表达都明显增高(P <0.05);CD44high/CD24low细胞比例由1.71%上升至11.60% (P <0.05);体外成球培养发现成球细胞数量明显增多(P<0.01);通过RNA测序发现有16个miRNAs在LIN28B过表达后差异表达倍数在2倍以上且P<0.05,LIN28B过表达后miR-92b-5p表达显著上调(P<0.01);转染miR-92b-5p mimic后MCF-7细胞的CD44high/CD24low细胞比例由1.14%上升至3.59% (P <0.05),体外成球能力明显增强(P<0.01).结论 LIN28B能维持MCF-7肿瘤干细胞的干性状态,其作用机制可能是通过miRNAs的表达来实现的. 相似文献