加替沙星对临床常见病原菌的耐药分析

目的：了解加替沙星对临床常见病原菌的耐药情况。方法：对呼吸道、泌尿生殖道、皮肤感染患者进行临床给药和细菌培养，3～7d后重复细菌培养，并对所分离的细菌按NCCLS2000要求对加替沙星、环丙沙星、司帕沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟进行K-B法药敏试验，并判断结果。结果：加替沙星、环丙沙星、司帕沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟的敏感率和耐药率分别是94．6％和1．8％、80．2％和11．7％、93．2％和4．1％、73％和9．9％、81．1％和7．2％。结论：加替沙星对革兰阳性菌、革兰阴性菌、淋球菌优于环丙沙星、司帕沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟。     

SARS冠状病毒N蛋白的真核细胞定位研究

目的:为进一步探讨SARS-CoV核衣壳蛋白(N蛋白)在病毒复制及细胞通路中的作用,观察了核衣壳蛋白不同区段在细胞内的定位.方法:应用核定位序列分析软件分析N蛋白序列,找出其中的核定位信号序列;构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与SARS-CoV不同长度核衣壳蛋白区段融合表达的pEGFP-C1重组载体,对293细胞进行瞬时转染,在荧光显微镜下观察核衣壳蛋白不同区段在细胞内的定位.结果:不同的核定位信号分析软件分析的结果不同,Prosite找到的核定位信号位于N蛋白第373-389或374-390aa,而PredictNLS server找到的核定位信号位于N蛋白第36-44aa;全长核衣壳蛋白及第161-422aa区段均定位于细胞质,第1-187aa区段定位于细胞质和细胞核.结论:SARS-CoV核衣壳蛋白的核定位信号可能位于N蛋白第36-44aa.     

建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法

目的 制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清FA的化学发光免疫分析(CLIA)法.方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较.结果 成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争CLIA;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值大于0.990 0,灵敏度1.21 nmol/L,线性范围1.21～38.80 nmol/L,批内变异系数小于5％,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.908 1).结论 建立的非均衡竞争定量检测血清FA的CLIA法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测.     

O1群小川型霍乱弧菌单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗O1群小川型霍乱弧菌(VibriocholeraeO1serotypeOgawa)特异性单克隆抗体(McAb),为霍乱的早期快速诊断提供有力的抗体工具。方法以灭活的O1群小川型霍乱弧菌免疫Balbc小鼠,通过杂交瘤技术制备针对O1群小川型霍乱弧菌的McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行筛选,分析其亚类,检测其效价及相对亲和力,以间接ELISA和Westernblot鉴定McAb特异性,并进行McAb结合表位分析。结果融合了602株能分泌抗O1群小川型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,最后得到5株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其抗体亚类分别为3株IgG1,1株IgG2b,1株IgG3;腹水效价均达1×10-6;亲和常数在1×108～1×109之间。间接ELISA法及Westernblot证实所获的McAb可与O1群小川型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示除有2株McAb识别相同的抗原表位外,其余均识别不同的抗原表位。结论获得霍乱弧菌O1群小川型特异性McAb,为O1群小川型霍乱早期快速诊断和发病机理的研究提供基础。     

RNA甲基化修饰检测研究进展

RNA修饰是转录后调控基因表达的重要因素,在表观遗传学领域具有重要的研究意义。目前,许多已知的RNA修饰检测方法依赖抗体的特异性。最常用的是基于RNA甲基化免疫沉淀结合测序法（methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq）,但这种方法也容易产生假阳性和假阴性结果。因此,近年来出现了一系列免抗体的测序方法,以及探索成本低廉、简单易操作的免抗体RNA修饰生物传感检测新方法。此外,特定位点的RNA修饰检测是探明甲基化对疾病具体调控机制的关键,单碱基分辨检测方法构建是必要的前提。本综述总结近年来RNA甲基化修饰特异性检测以及特定位点RNA修饰定量检测的新方法。主要从基于免疫途径、甲基化特异性酶途径、杂交方法、化学处理、标记技术以及RNA修饰原位检测技术进行总结归纳,分析不同检测方法的优点和不足。同时讨论了通用性检测方法及第三代测序用于直接检测RNA甲基化修饰的研究前景。     

野生型肺炎链球菌溶血素通过PI3K-I/Akt/mTOR途径诱导A549细胞自噬

目的:研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)诱导人肺上皮细胞自噬发生的现象及其机制。方法:常规培养人肺上皮A549细胞与野生型Sp;将GFP-LC3真核载体转染A549细胞,分为实验组(Sp,MOI=30∶1)、阴性对照组[渥曼青霉素(wortmannin,WT),2μmol/L 2 h,自噬抑制剂]、阳性对照组[雷帕霉素(rapamycin,Rapa),1 mmol/L 10 h,mTOR抑制剂]和参照组(WT和Sp共同处理),各组处理时间均为1、2、3和4 h;荧光显微镜观察各组自噬点形成,透射电镜观察各组细胞自噬体结构,Western blot检测各组微管相关蛋白轻链-Ⅰ/Ⅱ(microtuble-associated protein light chain 3-Ⅰ/Ⅱ,LC3-Ⅰ/Ⅱ)、磷酸化UNC-51-K激酶1(phosphorylated UNC-51-like kinase1,P-ULK1)和螯体1(sequestosome 1,P62)的表达;将溶血素表达载体RFP-PLY(red fluorescent protein-pneumo...     

门诊和急诊检验实习生带教工作的探讨

<正>随着医学事业的飞速发展,检验医学已经成为临床医学中不可或缺的一部分。它在临床疾病的诊断、治疗、疗效评价、预后判断以及正常人群健康评估等方面发挥着越来越重要的作用[1]。门、急诊检验作为检验医学的一个重要组成部分,其特点就是要快速、准确、及时的向医生和患者提供检测报告,尽量缩短医生诊疗及患者就医时间。这就需要大批理论知识全面,操作技术娴熟,临床思维活跃,处理问题灵活的复合型医学检验人才。临床实习作为医学教育特有的阶段,是医学检验专业     

血清降钙素原在严重细菌感染及脓毒症中的应用价值

感染因子是发热疾病最常见的致病原因。相关文献报道显示,延迟1h给予足量、适当的抗菌药物治疗将会使脓毒症患者病死率增高5%~10%[1-2]。因此,临床上常对病因不明的发热初诊患者给予经验性抗感染治疗。然而,相关文献显示50%被用于特定治疗的抗菌药物被视作不必要或不恰当[3]。例如,病毒感染是支气管炎的常见病因,但仍有80%的患者会     

多重耐药鲍曼不动杆菌感染危险因素分析

目的：了解本地区多重耐药鲍曼不动杆菌感染的危险因素及耐药状况。方法回顾性分析80例多重耐药鲍曼不动杆菌患者与48例非多重耐药鲍曼不动杆菌感染患者的基本资料,以及菌株药敏试验检测结果;采用Logistic回归分析方法分析多重耐药菌株感染的独立危险因素。结果多重耐药鲍曼不动杆菌感染的独立危险因素包括入住重症监护病房（IC U ）、侵入性操作、两种及其以上抗菌药物序贯使用或联合使用。多重耐药鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南、替卡西林/克拉维酸的耐药率均大于60％,对除上述4种药物以外抗菌药物的耐药率均超过90％。结论多重耐药鲍曼不动杆菌感染的独立危险因素包括入住IC U、侵入性操作、两种及其以上抗菌药物序贯使用或联合使用。严格进行医院环境的消毒和医院感染的监测,合理使用抗菌药物,是控制多重耐药鲍曼不动杆菌感染的重要手段。     

短发夹状双链RNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达

目的研究载体表达的短发夹状双链RNA（shRNA）对丙型肝炎病毒（HCV）IRES介导的基因表达的特异性抑制作用。方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体（pIRES—GFP）和虫荧光索酶表达载体（p5′ UTR—Luc），以及针对HCV IRES的shRNA表达载体（pshRNA-HCV）。共转染HepG2细胞，于转染后24、48、72h观察绿色荧光的强弱，用Western blot检测绿色荧光蛋白的表达，半定量逆转录聚合酶链反应法检测GFP的mRNA水平。双荧光索酶系统检测虫荧光索酶活性。结果pshRNA-HCV作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组，GFP蛋白表达量及虫荧光素酶活性降低60％～70％，半定量逆转录聚合酶链反应显示pshRNA-HCV导致了GFP基因mRNA水平的降低。结论针对HCV IRES的shRNA能够显著和特异地抑制该区域调控的蛋白表达水平及mRNA水平，该研究结果为利用RNA干扰技术治疗HCV感染进行了初步探索。