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151.
目的研究腺嘌呤单碱基编辑器(ABE7.10)对人G6PC3基因致病性突变纠正的可行性。方法构建不同sgRNA的表达载体,分别在人HEK293T突变模型和人类胚胎中尝试纠正的可行性和编辑效率,通过深度测序进行脱靶分析。结果①成功构建了G6PC3^(C295T)的突变细胞模型。②构建了三个不同的Re-sgRNA,并在G6PC3^(C295T)突变细胞模型中实现了纠正,碱基纠正效率为8.79%~19.56%。③人致病胚胎实验证明ABE7.10能有效纠正突变碱基,但同时在其他位置也发生了碱基编辑事件。④深度测序分析显示,对32个潜在脱靶位点检测,除1个非编码区位点转换效率为1.03%外,其余均低于0.5%,具有较高的安全性。结论该研究提出了一种新的基于人类致病胚胎的碱基纠正策略,但也产生了一定的非目标位点编辑,后续还需在PAM位点或者编辑器的窗口上进行进一步研究。 相似文献