弓形虫二氢叶酸还原酶一胸背酸合成酶ROP17真核表达载体的构建及ROP17参与自噬的研究北大核心CSCD

目的构建刚地弓形虫二氢叶酸还原酶一胸苷酸合成酶(dihydrofolate reductase-thymidylate synthase,DHFR-TS)-棒状体蛋白17真核表达载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17,将其转染人胚肾细胞(HEK 293T)后观察ROP17对细胞自噬的作用。方法以弓形虫速殖子总RNA为模板.逆转录PCR(RT-PCR)扩增DHFR-TS基因片段,克隆至真核表达载体pIRES的多克隆位点B,构建重组质粒pIRES/TgDHFR-TS.经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后.用脂质体法转染人胚肾细胞(HEK 293T),RT-PCR法和Western blot检测DHFR-TS的表达。以弓形虫速殖子ecDNA为模板,PCR获得ROP17.将其引人重组质粒pIRES/TgDHFR TS的多克隆位点A.构建重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17。重组载体经菌液PCR、双酶切和测序鉴定后转染人胚肾细胞(HEK 293T),对转染细胞血清饥饿诱导,通过.Western blot检测自噬标志蛋白LC3-II、Beclin-1和P62的表达。结果RT-PCR检测显示,从RH株弓形虫速殖子中扩增出约1809 bp的片段。菌落PCR、双酶切及测序显示工具载体pIRES/TgDHFR-TS构建成功;转染293T细胞后RT-PCR和Western blot转染pIRES/TgDHFR TS的细胞中有TgDHFR TS的表达,基因大小为1809 bp.蛋白相对分子质量约为68X103。菌液PCR、双酶切和测序显示重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17构建成功,转染293T细胞后RT-PCR和Western blot检测转染pIRES/TgDHFR TS TgROP17的细胞中有TgROP17的表达.基因大小及蛋白分子质量与预期相符,而转染pIRES/TgDHFR-TS质粒组未见相应基因及蛋白表达。经血清饥饿诱导后,Western blot.检测显示随着去血清时间的延长,LC3-I向LC3-II的转化、Beelin-1蛋白逐渐增加、P62蛋白逐渐减少。结论成功构建了工具载体pIRES/TgDHFR-TS和重组载体pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17,且能在真核细胞中表达,表达的弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)能促进血清饥饿诱导的细胞自噬。     

喉咽清颗粒应用于扁桃体切除术后疼痛治疗中的效果观察

目的：评价喉咽清颗粒在扁桃体切除术后疼痛治疗中的效果,为扁桃体手术患儿术后恢复提供指导。方法：选取90例扁桃体切除术小儿患者,随机分成两组,对照组45例采用布地奈德雾化吸入联合注射用头孢呋辛钠治疗,研究组45例在对照组的基础上加用喉咽清颗粒治疗,对比两组术后不同时间点疼痛评分以及咽喉不适症状分级,并统计对比两组白膜脱落时间和不良反应发生情况。结果：研究组术后2 h、8 h、24 h和48 h时的VAS评分均较对照组低（P<0.05）;研究组的术后48 h不适症状分级明显优于对照组,不适较为轻微（P<0.05）;研究组白膜脱落时间较对照组短（P<0.05）;两组的不良反应发生率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：接受扁桃体切除术治疗的患儿采用喉咽清颗粒联合布地奈德雾化吸入以及注射用头孢呋辛钠进行药物治疗,术后疼痛症状改善显著,且咽喉不适症状明显好转,未出现严重不良反应,能够有效发挥喉咽清颗粒的抗炎、镇痛及抗病毒功效,促进治疗有效性与安全性提升。     

经胸腔镜下食管气管瘘结扎食管端端吻合术治疗Ⅲ型食管闭锁的效果观察

目的探讨经胸腔镜下食管气管瘘结扎食管端端吻合术在Ⅲ型食管闭锁疾病中的应用效果。方法回顾性分析2014年8月至2018年8月经胸腔镜下食管气管瘘结扎食管端端吻合术治疗的28例Ⅲ型食管闭锁患儿的临床资料。结果患者分型为A型15例,B型13例,平均手术时间182 min,平均出血量小于5 ml,术后患儿住院时间为6～28 d,27例顺利完成手术,1例后期再次接受修补术。经过手术,27例治愈,1例患儿死亡;术后败血症4例,化脓性脑膜炎1例,经过治疗均治愈;3例患儿由于吻合口狭窄,经食管球囊扩张术治愈;1例发生吻合口瘘,通过增加1周的禁食时间后,情况好转治愈;1例家长在术后放弃再次手术治疗;食管盲端距离越长越容易导致并发症的发生。结论经胸腔镜下食管气管瘘结扎食管端端吻合术在治疗Ⅲ型食管闭锁时能够达到出血量少,治愈良好的效果。     

经腹部和经阴道彩色多普勒超声诊断异位妊娠对比分析

目的观察经腹部和经阴道彩色多普勒超声对异位妊娠诊断的准确率。方法将132例患者随机分成经腹部彩色多普勒超声组及经阴道彩色多普勒超声组（TVCDS）检查异位妊娠确诊率。结果TACDS组诊断正确率为79.31%,TVCDS组为91.89%,两组相比TVCDS组诊断正确率高于前者,差异有统计学意义（χ^2=4.370 4,P〈0.05）。结论经阴道超声在诊断异位妊娠方面有其独特的优势,能提高检查阳性率及诊断符合率。     

氢氯吡格雷与辛伐他汀联合治疗急性冠脉综合征的疗效观察

目的 探讨氢氯吡格雷与辛伐他汀联合治疗急性冠脉综合征（ACS）的临床效果.方法 将2007年1月-2009年5月间在我院治疗的ACS患者64例随机分为观察组和对照组,对照组给予常规治疗措施,观察组同时给予氢氯吡格雷与辛伐他汀联合治疗措施.结果 两组患者血小板聚集率比较：治疗后观察组患者血小板聚集率为（39.26±2.21）%,对照组血小板聚集率为（43.78±2.23）%,观察组患者血小板聚集率明显低于对照组,两组比较差异具有显著性（P＜0.05）.观察组心绞痛复发12例（35.29%）,再住院8例（23.52%）,明显低于对照组的24例（70.59%）、17例（50.00%）,两组比较差异具有显著性（P＜0.05）,且对照组有1例中风患者.观察组出现恶心呕吐1例,对照组出现恶心呕吐2例,无其他明显副作用.结论 氢氯吡格雷与辛伐他汀联合治疗急性冠脉综合征效果确切,值得应用.     

宫腔注射无水乙醇对小鼠动情周期的影响

目的探讨宫腔内注射无水乙醇对小鼠动情周期的影响。方法利用阴道脱落细胞染色法选择动情期规律的小鼠20只,宫腔注射无水乙醇,术后第一个动情周期内每日测定其动情周期,随机择10只在第二个动情周期每2 h测一次,观察动情周期的改变程度。结果实验小鼠宫腔注射无水乙醇后动情周期整体发生大幅度延长,且动情期、动情前期等各期时间均发生了不同程度的紊乱。结论本实验通过观测无水乙醇损伤子宫后小鼠动情周期发生紊乱的现象,为临床无水乙醇的使用提供一定的实验基础。