靶向P75的siRNA对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建P75特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促乳腺癌细胞生长及凋亡的影响.方法 通过GenBank提供的P75 mRNA序列,设计3对能转录短发夹状RNA的DNA序列,构建pSilencerTM4.1-CMV neo质粒重组载体,转染乳腺癌SKBR3细胞;通过实时荧光定量PCR和Western blot筛选RNA干扰效果最强的干扰片段;以此干扰片段转染至乳腺癌SKBR3细胞,利用G418筛选稳定表达P75-siRNA的SKBR3细胞株,命名为P75-siRNA;MTT检测P75干扰后NGF对细胞增殖作用的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;建立荷乳腺癌小鼠模型,观察P75干扰后对小鼠肿瘤生长和凋亡相关蛋白表达的影响.结果 序列测定表明成功构建P75-siRNA表达载体,实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示P75 mRNA和蛋白表达下调,尤以P75 2-siRNA干扰片段效果显著;MTT检测显示,NGF能刺激细胞增殖,与NGF组相比,P75-siRNA干扰后细胞增殖率均明显增高(P＜0.05);与空白对照组相比,NGF+ P75-siRNA组和NGF组的细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),NGF+ P75-siRNA组更为明显;荷乳腺瘤小鼠中,P75-siRNA组小鼠的肿瘤生长明显超过未转染组和空载体转染组(P＜0.05),且P75-siRNA组Caspase-3表达下降,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P＜0.05).结论 P75特异干扰表达载体能有效降低P75的表达,增强NGF促乳腺癌SKBR3细胞的增殖作用和抗凋亡作用,从而使肿瘤生长更为明显.     

人载脂蛋白M野生型和突变型表达载体的构建及鉴定

目的: 构建人载脂蛋白M (APoM)野生型和突变型原核表达载体PGEX-KG-APoM及真核表达载体PcDNA3.1(+)-APoM。方法: Trizol法抽提HePG2细胞总RNA,RT-PCR扩增APoM全长基因,将基因片断重组到PMD18-T质粒中构建PMD18-T-APoM重组质粒载体,转化到大肠埃希菌JM109后筛选阳性克隆,提取质粒酶切和测序鉴定。采用Sited-directedMutagenesis定点诱变试剂盒对APoM基因进行体外定点诱变,DNA测序鉴定定点诱变成功与否。用双酶切方法分别将APoM野生型和突变型基因定向连接到原核表达载体PGEX-KG和真核表达载体PcDNA3.1(+)中,构建野生型和突变型PGEX-KGAPoM重组体和PcDNA3.1(+)-APoM重组体,分别转化到大肠埃希菌DH5α内,提取质粒酶切鉴定和测序鉴定。结果: 成功克隆了APoM并构建了野生型和突变型原核表达载体和真核表达载体。结论: 通过RT-PCR,定点诱变及基因重组技术成功构建野生型和突变型重组表达质粒PGEX-KG-APoM和PcDNA3.1(+)-APoM,为进一步研究APoM的功能奠定了基础。     

层状双氢氧化物调控肿瘤微环境的研究进展

肿瘤微环境是肿瘤发生和生长的内在环境,包括多种细胞类型(成纤维细胞、免疫细胞、免疫抑制细胞等)、细胞外成分(细胞因子、生长因子、激素、细胞外基质等).它具有弱酸性、缺氧、免疫抑制等特点,与肿瘤的进展密不可分.作为一种新型二维纳米材料,层状双氢氧化物(layered double hydroxides,LDH)被广泛应用...     

肝细胞癌中载脂蛋白M,肝受体同系物1和肝细胞核因子1α表达的相关性分析

目的：探讨肝细胞癌（HCC）组织和癌旁组织中载脂蛋白M（apoM）、肝受体同系物1（LRH-1）和肝细胞核因子1α（HNF-1α）的表达并分析3者之间的相关性。方法：采用RT-PCR和免疫组化分别检测17例原发性肝细胞癌和相应癌旁组织中apoM、LRH-1、HNF-1αmRNA的表达及apoM和HNF-1α蛋白的表达。结果：apoM、LRH-1和HNF-1αmRNA及apoM和HNF-1α蛋白在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织（P均〈0.01）。LRH-1、HNF-1αmRNA和apoMmRNA表达均呈正相关关系（依次为r=0.463,P〈0.01;r=0.356,P〈0.05）。结论：肝细胞癌中apoM的表达和LRH-1及HNF-1α表达密切相关,LRH-1和HNF-1α可能是apoM表达的重要调节因子。     

水质分析实验室间质量控制

水质分析实验室提供的分析数据的可靠性直接影响对水质的评价、水源保护措施的采取及水体的合理利用。近年来我国已经制定了一套与卫生标准相适应的水质分析方法。为保证分析质量、科学地管理实验室,开展分析质量控制试验应作为当前的主要任务之一。一九八○年举办了二次水质分析质量控制试验。第一次全国84个实验室参加了工作。各参加单位进行了实验室内部控制,绘制了控制图。在此基础上测定实验室间的控     

人体中有机氯化合物监测总结会议

《通过生物监测评价人体接触环境污染物》的规划是世界卫生组织和联合国环境规划署于1977年起联合举办的。此规划分两部分分别进行,人体中有机氯化合物监测为其中之一。这项工作已经完成,并于1982年11月15～19日在比利时的布鲁塞尔召开总结会,通过总结报告初稿。人体中有机氯化合物主要是指DDT、六六六和多氯联苯。这几种化合物使用历史久、用量大、不易分解,已成为全球性的环境污染物。此规划的目的是要     

CXCR4抑制性多肽对乳腺癌细胞株转移作用的研究

背景与目的:CXCR4-SDF-la体系在乳腺癌靶向转移中具有重要作用,已证明多种CXCR4拮抗剂对乳腺癌转移有抑制作用.本研究拟探讨CXCR4抑制性多肽(N-terminal 21-met peptide,NT21MP)对乳腺癌细胞株MCF-7转移相关因素的影响.材料与方法:采用免疫组织化学和荧光抗体检测NT21MP对乳腺癌细胞株MCF-7和SK-BR3表面CXCR4表达的抑制作用;用粘附和趋化实验观察N121MP对不同转移阶段MCF-7细胞的作用;并用软琼脂集落形成实验评价克隆形成率.结果:分别以0.1、0.5、1.0、4.0 μg/ml NT21MP处理MCF-7细胞24 h后,相对于空白对照,CXCR4表达明显下降(P＜0.05＝.5、50、100、500 ng/ml NT21MP处理后,MCF-7细胞对纤维连接素(FN)和Matrigel的粘附能力均下降(P＜0.05).趋化抑制实验中,N'121MP降低穿膜细胞数并呈浓度依赖性(P＜0.05).NT2IMP抑制MCF-7细胞集落的形成,抑制率在22.O%-51.8%之间,并呈浓度依赖性.结论:NT21MP可有效降低CXCR4的表达,从而降低MCF-7对FN和Matrigel的粘附,抑制其对趋化因子SDF-la的靶向趋化作用,并抑制MCF-7在软琼脂中的克隆形成率.     

紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p诱导乳腺癌细胞产生耐药表型研究

目的研究紫杉醇耐药乳腺癌细胞外泌体来源的miR-5585-5p对乳腺癌细胞迁移、凋亡和耐药性的影响。方法超速离心法获取外泌体,使用qRT-PCR方法分别检测乳腺癌细胞（SKBR-3）和紫杉醇耐药乳腺癌细胞（SKBR-3/PR）细胞株和外泌体中miR-5585-5p的表达量;通过外泌体共培养技术以及在乳腺癌耐药细胞中转染miR-5585-5p的抑制剂,用Transwell检测其迁移能力,流式细胞术检测其凋亡情况;qRT-PCR和Western blotting检测其耐药指标。结果与SKBR-3相比,miR-5585-5p在耐药细胞SKBR-3/PR细胞株和外泌体中表达均上调（P < 0.01和P < 0.05）;在耐药细胞株中转染miR-5585-5p的抑制剂,Transwell、流式分析等结果显示,与对照相比,抑制剂组的耐药性下降,生物学活性降低（P < 0.01）;耐药细胞源性的外泌体与亲本细胞共培养可使SKBR-3细胞产生耐药表型,增强其迁移能力,抑制其凋亡率（P < 0.01）,而转染抑制剂的耐药细胞分泌的外泌体可减弱这一作用。结论紫杉醇耐药乳腺癌细胞通过外泌体递送高表达的miR-5585-5p至亲本细胞并诱导亲本细胞产生耐药表型,外泌体miR-5585-5p可为乳腺癌耐药治疗提供新的分子靶点,为乳腺癌预后评估提供新的生物标志物。     

某高校新生乙型肝炎病毒携带情况分析

目的:了解某高校新生HBsAg携带情况,为学校乙型肝炎的预防提供科学依据。方法:新生入校时,抽取早晨空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验法检测HBsAg,速率法检测丙氨酸氨基酸转移酶(ALT),HBsAg阳性且ALT增高者用ELISA方法检测HBV五项指标。结果:HBsAg总携带率为4.56%。其中男生携带率为5.70%,高于女生的3.69%(P<0.05)。结论:某高校新生HBsAg携带率比社会人群的HBsAg携带率低。