可溶性FasL联合survivin RNA干扰诱导肺腺癌细胞凋亡

目的：探讨可溶性FasL（sFasL）联合survivin RNA干扰对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法：构建survivin特异RNA小干扰表达载体，DNA测序，转染A549细胞。G418（geneticin）筛选稳定表达survivin RNA小干扰细胞株，荧光实时定量RT-PCR、免疫印迹（Western blot）和免疫组化法检测survivinm RNA和蛋白表达。sFasL作用于转染后细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测细胞活性和凋亡率。结果：成功构建survivin-siRNA表达载体，筛选出稳定表达单克隆细胞。SurvivinmRNA和蛋白表达分别下降76．4％（P〈0．01）和84．5％，免疫组化也显示survivin下调。sFasL联合survivinRNA干扰细胞，光密度值在各时间点较siRNA组、sFasL组和对照组均明显降低（P〈0．01），抑制率增加；凋亡率较siRNA组、sFasL组和对照组明显增加（P〈0．01）。结论：SurvivinRNA干扰表达载体可降低survivin的表达。sFasL联合survivinRNA干扰较单用sFasL或survivin RNA干扰能更有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖，促进凋亡。     

本科生分子生物学实验教学改革的实践和体会

为使生物科学专业本科生掌握分子生物学的基本技术,全面提高本科生的综合素质,根据实际情况和学生培养目标从教材、教法及效果评价等多方面内容对实验教学进行了改革和实践,培养了本科生的创新意识、动手能力及科研能力。     

全反式维A酸联合c-myc RNA干扰抑制肺腺癌细胞增殖并诱导凋亡

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)联合c-myc RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变及对survivin 基因表达的影响.方法 构建c-myc特异RNA小干扰(siRNA)的表达载体,转染A549细胞后G418(Geneticin)筛选出稳定表达c-myc特异siRNA的细胞株,荧光实时定量RT-PCR和免疫印迹 (Western blot)检测c-myc基因表达水平.ATRA作用于c-myc RNA干扰细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吸光度值,流式细胞仪测凋亡率,定量RT-PCR和免疫印迹检测survivin基因表达.结果 成功构建c-myc-siRNA表达载体.c-myc基因mRNA和蛋白表达下降71.9%和85.6%.ATRA联合c-myc-siRNA细胞组吸光度值在各时间点较单用ATRA组,单用c-myc-siRNA组以及对照组均下降,差异有显著性(P＜0.01),凋亡率增加,差异有显著性(P＜0.01).ATRA联合c-myc-siRNA细胞, survivin表达下降49.2%,差异有显著性(P＜0.01).结论 ATRA联合c-myc-siRNA较单用ATRA或c-myc siRNA能更有效地抑制A549细胞的增殖,促进细胞的凋亡.survivin基因表达降低.     

靶向TrKA基因的SiRNA干扰对乳腺癌细胞生长的影响

目的:观察TrKA对乳腺癌细胞生长的影响,并初步探讨其分子机制,为乳腺癌治疗提供新的药物靶点。方法:荧光定量PCR和Western-blot检测干扰前后乳腺癌细胞株中TrKA的表达水平;MTT法检测干扰后对神经生长因子的促细胞生长作用的影响;Western-blot检测干扰后caspase-3的蛋白活性变化。结果:干扰后TrKAmRNA和蛋白表达分别下降73.8%和80.5%(P<0.05);NGF能促进乳腺癌细胞株MCF-7增殖(P<0.01);MCF-7+NGF组在OD_490nm值,各时间点高于MCF-7组(P<0.01);干扰后抑制了NGF的促细胞增殖作用,TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组在490nm处,各时间点均低于MCF-7(P<0.01);Western-blot结果显示,与MCF-7组相比TrKA-SiRNA和TrKA-SiRNA+NGF组caspase-3蛋白明显活化,cleavedcaspase-3增加(P<0.05)。结论:TrKA的SiRNA干扰有效抑制乳腺癌细胞的生长,并有助于细胞趋向凋亡,提示NGF-TrKA生物学轴对乳腺癌的生长起重要作用,阻断此生物学轴可能是乳腺癌治疗新的靶点。     

奥沙利铂对肝癌细胞HuH-7细胞周期的影响

目的探讨奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人肝癌细胞株HuH-7细胞周期的影响及其相关机制,为其应用于原发性肝细胞癌临床治疗提供理论依据。方法 MTT方法检测L-OHP对肝癌细胞HuH-7生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测L-OHP诱导HuH-7细胞周期阻滞的作用;RT-PCR和Western blot方法观察L-OHP对细胞周期调节因子Cyclin D1、CDK2、CDK4及p16、p21、p53表达的影响。结果 MTT结果显示L-OHP对HuH-7细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。L-OHP能够诱导HuH-7细胞周期阻滞于S期,并可下调CDK4和Cyclin D1蛋白的表达,上调p21蛋白的表达,低浓度上调p53表达而高浓度下调p53表达,CDK2和p16表达无明显变化。结论 L-OHP可能通过影响CDK4、Cyclin D1及p21的活性使HuH-7细胞阻滞在S期,从而抑制肝癌细胞HuH-7的增殖。     

中国生活饮用水有机污染与肝癌死亡率的相关研究

本文根据全国生活饮用水水质调查资料及中国恶性肿瘤资料,进行了以县为单位的统计学分析,数据包括全国29个省、市、自治区中的2072个县,约8亿人口的资料。分析结果表明,全国大范围内饮水的有机污染程度(用水耗氧量作为指示指标)的分布与肝癌死亡率的分布基本符合,男、女肝癌死亡率与水耗氧量呈正相关(P<0.01)。说明饮水有机污染可能是肝癌致病的重要原因之一。     

体外具有强力抗单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型的核苷类化合物:BIOLF-62

Ogilvie等合成的BIOLF-62,{9[(2-羟基-1-羟甲基乙氧基)甲基]鸟嘌吟}(简称DHPG)是一个新的开环核苷类化合物,分子式C_9H_(13)N_5O_4,分子量255.233。本品中性、稳定且水溶性好。Smith等发现,BIOLF-62在组织培养中远在细胞毒浓度以下时即有显著的抗Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒的作用,对8株I型疱疹病毒(HSV-I)的半数有效浓度ED_(50)的范围为0.084～2.4μg/ml,对6株Ⅱ型疱疹病毒(HSV-Ⅱ)的ED_(50)范围为0.068～2.0μg/ml,其中对临床分离的天然耐无环鸟苷的单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ型各一株也有效。在HFF-36-P-6细胞中,用HSV-1-Patton株实验,其抗病毒和抑制细胞的毒性作用与无环鸟苷和碘苷比较,BIOLF-62的细胞EDS_(50)病毒EDS_(50)为360,远较无环     

乳腺癌雌激素受体ERα和ERβ的表达

目的 :研究乳腺癌和乳腺纤维腺瘤组织中雌激素受体亚单位ERα和ERβ的表达。 方法 :以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法测定 4 2例乳腺癌和 19例乳腺纤维腺瘤组织中ERα和ERβ的mRNA表达 ,评价其分布的差异以及乳腺癌中ER表型与淋巴结转移和肿瘤大小的关系。结果 :ERβ总表达率在乳腺癌为 5 4 .8% ,高于乳腺纤维腺瘤的 2 6 .3% (P <0 .0 5 ) ;乳腺癌ERα表型占 2 1.4 % ,乳腺纤维腺瘤为 5 2 .6 % ;乳腺癌ERα和ERβ共表达表型占 5 4 .8% ,乳腺纤维腺瘤为 2 1.1% ,两者差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。乳腺癌中各ER表型与淋巴结转移和肿瘤大小均无明显关系 (P >0 .0 5 )。结论 :乳腺癌可获得ERβ的表达     

对检验报告进行数据自查的方法探讨

在水质分析过程中各项指标之间存在着一定的内部联系 ,依据这些相互关系可以推断检验数据的合理性和可信性 ,是检验测试人员工作质量的一种有效的方法。水质检验报告中经常存在以下问题 :(1 )同一份水质检验报告中阴阳离子不平衡 ;(2 )溶解性总固体与各离子的浓度之和不一致 ;(3)总硬度超过或接近溶解性总固体等 ,这些不合理现象的存在 ,使人们有理由怀疑检验工作可能存在错误 ,检验数据不可信。针对以上问题 ,我们采集了有代表性的水样进行了分析测定 ,为检验报告数据自查提供一种方法。1　材料与方法1 1　测试指标　测试典型地区饮水样品…