稳定高表达Uroplakin Ⅱ基因人膀胱癌细胞株的建立及其意义

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果　所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论　通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。     

补肾阴对胚胎干细胞活动的影响

目的观察补肾阴中药复方对胚胎干细胞活动的影响。方法选用胚胎干细胞模型CRL-1825细胞株,加入补肾阴中药复方大鼠含药血清,观察补肾阴中药对干细胞分化、凋亡、细胞周期及其关键基因表达的影响。结果补肾阴中药复方含药血清可以抑制干细胞的分化和凋亡,促进干细胞增殖以及细胞周期的进程,促进干细胞Wnt、Oct4等基因的表达,下调P16INK4a基因的表达。结论补肾阴中药复方可以促进干细胞增殖、维持其不分化状态。     

金匮肾气丸治疗糖尿病少阴证

目的以《伤寒论》六经辨证理论体系为指导,从少阴证角度切入,观察金匮肾气丸治疗糖尿病的临床疗效。方法观察2型糖尿病患者在常规西药治疗基础上加金匮肾气丸后临床症状积分的变化情况。结果治疗前后比较,患者临床症状改善明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论肾气丸可较好地改善患者口渴喜饮、尿频多尿、自利而渴、虚烦、神疲欲寐、脉微细等临床症状,对糖尿病伴少阴心肾同病有一定疗效。     

从补肾升阳活血浅谈椎-基底动脉供血不足眩晕病机及治疗

正椎-基底动脉供血不足是多发于中老年人的临床常见病,反复发作的眩晕、耳鸣、恶心、呕吐等症状,眩晕为主要症状。椎-基底动脉供血不足眩晕属中医学眩晕范畴。人至中老年期,脏腑渐虚,肾精不足,脑髓空虚,精亏无以化气,上气不足,清阳不能充养脑髓,脑失所养,浊阴盘踞清窍,而发为眩晕。笔者     

补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的：比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法：采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2Bs细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT—PCR、Westemblot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^INK4、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果：补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA／蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA／蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论：补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。     

尿脱落细胞增殖细胞核抗原mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值

目的探讨尿脱落细胞增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA检测在膀胱癌诊断中的应用价值。方法收集32例膀胱癌、52例泌尿系统良性疾病患者和10例健康志愿者清晨中、后段尿液,采用RT-PCR法检测尿脱落细胞PCNAmRNA表达,并与尿脱落细胞学检查结果比较。结果PCNAmRNA诊断膀胱癌的特异性为64%,低于尿脱落细胞学检测的88%(P<0.05),敏感性为100%,高于尿脱落细胞学检测的69%(P<0.01)。膀胱良性疾病患者、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度分别为0.5128±0.0307、0.5153±0.0402、0.6560±0.0626、0.8657±0.0266。膀胱良性疾病患者与Ⅰ级膀胱癌患者间差异无统计学意义,与Ⅱ、Ⅲ级膀胱癌患者间差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度随膀胱癌分级增加而升高(P<0.05)。浸润性膀胱癌患者尿脱落细胞PCNAmRNA表达强度高于浅表性膀胱癌患者(P<0.01),分别为0.8040±0.0807、0.5595±0.0447。结论尿脱落细胞PCNAmRNA检测在膀胱癌早期诊断、常规筛查以及术后复发监测中具有潜在的应用价值。     

成熟型Smac真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞中的表达

目的 构建成熟型Smac基因真核表达载体．探讨成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡的可能性。方法 以Xba Ⅰ和Bam HⅠ双酶切质粒pET15b-Smac．回收酶切释放基因片断．定向插入以Xba Ⅰ和BamHⅠ双酶切的真核表达质粒pcDNA3．1（-）中．构建含有成熟型Smac基因的真核表达载体pcDNA-MT Smac．测序鉴定重组的质粒。构建的质粒转染膀胱癌T24细胞．在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导下以原位未端转移酶标记法（TUNEL）检测凋亡率。结果 以T7引物测序证实得组的质粒pcDNA-MT Smac含有成熟型Smac基因。空白对照组、50ng／ml TRAIL处理组、转染Smac组和转染Smac后50ng ml TRAIL处理组的凋亡率分别为1．6％、20．2％、1．7％和35．7％．未经TRAIL诱导．T24细胞及转染了成熟型Smac的T24细胞间凋亡率差异无显著性意义（P〉0．05）．然而作TRAIL的诱导下．转染了成熟型Smac的T24细胞凋亡率明显高于术转染细胞．其差异有级显著性意义（P〈0．01）。结论 成功构建了含有成熟型Smac基因的真核表达载体．并证实该基因可以促进TRAIL诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡．为研究成熟型Smac基因促进肿瘤细胞凋亡提供了实验依据。     

左卡尼汀联合针刺治疗腕管综合征的疗效观察

目的:观察左卡尼汀联合针刺治疗腕管综合征的临床效果.方法:选取我院内外科门诊于2017年10月至2019年9月诊断为轻、中度腕管综合征患者62例,随机分为两组,各31例.对照组服用甲钴胺片,观察组采用左卡尼汀联合针刺治疗,治疗8周后观察两组患者正中神经感觉传速度(SCV)、感觉神经动作电位波幅(SNAP)及运动神经复合...     

膀胱癌误、漏诊原因的深层次分析

回顾性分析57例误、漏诊原发性膀胱癌患者的临床资料,探讨误、漏诊的深层次原因及对策.发现57例误、漏诊病例中仅按影像学资料诊断23例,影像学 尿脱落细胞学检查14例,影像学 膀胱镜检查 脱落细胞学检查12例,影像学 膀胱镜检 病理活组织检查8例.认为影像学检查不能作为膀胱癌定性诊断依据,但可作参考;尿脱落细胞学检查有时也难以定性;病理活检是相对可靠的诊断方法 ,但有时也因取材深度、部位及组织学类型、病理特点不熟悉等易误、漏诊,必要时需免疫组化法协助诊断.     

膀胱癌肉瘤(附3例报告)

目的: 探讨膀胱癌肉瘤的临床特征、病理特点及诊治。 方法: 对2002年1月～2006年9月收治的3例膀胱癌肉瘤患者的临床资料进行复习,并结合文献进行讨论。 结果: 3例患者均为男性,临床表现以无痛性肉眼血尿或尿频为主要症状。B超或CT示膀胱占位。膀胱镜检示膀胱肿瘤1例。2例患者行膀胱部分切除术,1例患者行膀胱全切术及盆腔淋巴结清扫术。2例术后辅以化疗。术后病理检查可见肿瘤由上皮和间质两种恶性成分组成,均诊断为膀胱癌肉瘤。1例免疫组织化学检查CK(-)、LCA(-)、CD20(-)、CD45_Ro(-)、NSE(-)、Myo(++)、CgA(-)、Syn(-)、Vim(-)、Des(-);1例免疫组织化学检查Vim(++)、CK(++)、Des(-)、Actin(-)、CD68(++)、S-100(-)、MyoD1(-)、Myo-genin(-)、SMA(-)。1例术后随访30个月死于肺、肝转移,1例术后随访8个月死于肺转移,另1例则失访。 结论: 膀胱癌肉瘤是一种临床罕见的恶性肿瘤,生物学行为独特,恶性程度高,浸润性强,进展迅速,预后差。确诊依靠病理组织学和免疫组织化学检查。尽早行根治性膀胱切除术是最佳治疗方法。