人血管内皮生长因子165的克隆和在大肠杆菌中的表达

克隆和在大肠杆菌中表达人血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）。方法利用ＰＣＲ的方法从胎脑ｃＤＮＡ库扩增得到人ＶＥＧＦ１６５的全长ｃＤＮＡ并测定其核酸序列。利用基因重组技术构建ＶＥＧＦ１６５的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果经测序表明，克隆的ＶＥＧＦ１６５与文献报道相符，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明经用ＩＰＴＧ诱导后，ＶＥＧＦ１６５在大肠杆菌中表达出。结论克隆和表达出ＶＥＧＦ１６５，为以后进一步研究ＶＥＧＦ１６５的功能奠定了基础     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞７７２１胞液和膜性组３类蛋白激酶（ＴＰＫ、ＰＫＡ、ＰＫＣ）的早期（５－６０ｍｉｎ）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果ＰＭＡ在３０ｍｉｎ内中促进ＰＫＡ由膜向胞液的转位和ＰＫＣ由胞液向膜的围位，并能迅速促进胞液ＰＫＣ的下降，但膜性ＰＫＣ的下降发生在３０ｍｉｎ的活性高峰以后，６０ｍｉｎ时膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都恢复到正常水平。ＰＭＡ还使胞液ＴＰＫ持续     

亚硝胺诱发大鼠肝癌不同细胞组分中三类蛋白激酶的变化

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）、蛋白檄酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液＞膜结构＞胞核，而ＰＫＣ则为膜结构＞胞液＞胞核。在胞液的三类蛋白激酶中，ＰＫＣ＞ＰＫＡ＞ＴＰＫ；膜结构为ＰＫＣ＞ＴＰＫ＞ＰＫＡ；而胞核却以ＴＰＫ特别高，ＰＫＡ和ＰＫＣ的含量甚微。ＤＥＮ诱发大鼠肝癌１８周后，膜性和胞核ＴＰＫ升高，尤以膜性ＴＰＫ升高明显。但膜性ＰＫＡ则降低而胞核ＰＫＡ升高，胞液中ＴＰＫ和ＰＫＡ均无明显变化；而ＰＫＣ和ＴＰＫ相反，胞液中显著升高，膜性及胞核变化不大。其中ＰＫＣ的增高不是激活剂含量上升的结果。     

血清碱性磷酸酶的凝集素亲和层析在肝脏疾病鉴别诊断中的应用

血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）通过ＷＧＡ亲和层析柱后，可分成不结合的峰Ⅰ和结合的峰Ⅱ两个活力峰，峰Ⅰ为肝型（Ｌ－ＡＬＰ），而峰Ⅱ为骨型（Ｂ－ＡＬＰ）。Ｌ－ＡＬＰ在急性肝炎时明显增高；慢性肝炎或肝癌时轻度上升，而肝硬化时变化不大。如将Ｌ－ＡＬＰ再通过欧蔓陀罗凝集素（ＤＳＡ）亲和层析柱，则正常血清Ｌ－ＡＬＰ完全不被ＤＳＡ结合；急性肝炎的血清Ｌ－ＡＬＰ有部分为弱结合；慢性肝炎和肝硬化除弱结合组分外，出现较多的中度结合组分；而原发性肝癌则出现中度结合组分及特有的强结合组分。这些结果说明肝病越发展成慢性或恶习性或恶性，血清Ｌ－ＡＬＰ和ＤＳＡ的结合力越强。这可应用于临床上鉴别各类不同肝的。肝病血清Ｌ－ＡＬＰ结合于ＤＳＡ增多的原因主要是Ｎ－连接型糖链的无线数增加，后者尚可从天线末端唾液酸增多以及强结合组分不被ＣｏｎＡ结合而获得证明。     

两种分化诱导剂对人肝癌细胞株丝氨酸蛋白激酶的影响

１０μｍｏｌ／Ｌ视黄酸（ＲＡ）或０．５ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰环磷酸腺苷（ｄｂ－ｃＡＭＰ）在体外都可使ＳＭＨＣ－７７２１人肝癌细胞株生长抑制，使增殖指标γ－谷氨酰转肽酶活力下降；而分化指标碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活力上升，故这两类化合物都是ＳＭＭＣ－７７２１细胞的分化诱导剂。ＲＡ处理１～３ｄ可引起胞液中蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）上升，而膜性ＰＫＡ下降；但５ｄ后相反，胞液ＰＫＡ明显下降，而膜性ＰＫＡ显著上升，可能与ＰＫＡ在细胞内转位有关。ＲＡ处理１～５ｄ尚可使胞液和膜性蛋白激酶Ｃ活力下降，两亚细胞组分的下降程度接近，提示未发生ＰＫＣ的转位作用。但ｂｄ－ｃＡＭＰ处理１～５ｄ，胞液或膜性的ＰＫＣ均未见明显变化，提示ＲＡ和ｄｂ－ｃＡＭＰ使细胞分化的机制不同，前者可能与ＰＫＣ有关。     

碱性磷酸酶肝型同工酶的糖链结构

碱性磷酸酶肝型同工酶的糖链结构吕晴，段恕诚，陈惠黎应用固相凝集素亲和层析法研究小儿病毒性肝炎和慢性肝病血清碱性磷酸酶肝型同工酶糖链结构的变化。血清经麦胚凝集素亲和层析分离出碱性磷酸酶肝型同工酶后过蔓陀罗凝集素柱。结果表明：正常人血清碱性磷酸酶肝型同工...     

胆管癌胆汁糖蛋白及其糖链结构的初步研究

目的寻找对胆管癌具有诊断价值的特异性标志物。方法应用SDS?PAGE分析41例恶性胆道病变(胆管癌27例、胆囊癌9例、壶腹癌5例)和20例良性胆道病变病人胆管胆汁中蛋白成分的差异。应用糖蛋白定性试验分析差异蛋白是否为糖蛋白。采用制备好的HRP标记凝集素探针(DSA-HRP、WGA-HRP、LCA-HRP、ConA-HRP)对分离出的差异糖蛋白的糖链结构进行初步分析。结果胆管癌胆汁中存在4种差异较明显的蛋白，相对分子质量分别为75×103、63×103、52×103、27×103。前3种为糖蛋白，后一种为非糖蛋白。胆管癌胆汁中分离出的3种差异糖蛋白中糖链结构的变化，主要表现为天线数和核心岩藻糖的明显增多，还可能伴有平分型GlcNAc增多。结论胆汁中某些糖蛋白及其糖链结构的变化可能对鉴别胆道良恶性病变有一定价值。     

丙酮酸激酶同工酶与Crabtree效应的关系

Crabtree效应是恶性肿瘤糖代谢调节的重要特征,指有氧酵解对氧化的抑制作用。自该效应发现五十余年来,对其机理的研究一直不断,但至今尚未完全阐明。我们以小鼠HepA腹水肝癌(简称HepA)为材料,比较系统地研究了丙酮酸激酶(PyK)同工酶与该效应之间的关系。     

正常人肝和肝细胞癌中γ-谷氨酰转肽酶的凝集素亲和分析

恶性组织中糖蛋白糖链结构的改变,近年来渐被重视。γ-谷氨酰转肽酶(γ-GTP)是细胞膜上的一种糖蛋白,含N-连接型糖链。是一个公认的肝癌标志,Yamashita曾报道大鼠AH66肝癌中γ-GTP的糖链与正常肝γ-GTP有明显区别,但对人肝癌γ-GTP的糖链变化则未见报道。本文利用植物凝集素能特异识别某些糖链结构的原理,用四种交联